ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВРЕМЕНИ ЭКСТРАКЦИИ ДИБУНОЛА ИЗ БИООБЪЕКТОВ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебно-медицинской экспертизе при определении дибунола в тканях и биожидкостях, а также при определении фармакодинамики в различных лекарственных формах. Прототипом предлагаемого изобретения является фармакодинамика дибунола в крови и тканях крыс после однократного введения (см. Известия АН СССР, серия биологическая; 1977, N1 с. 59-64, С.А.Матвеева, В.А.Барсель, Л.М.Дронова). По данному способу извлечение дибунола из биообьекта производится методом экстракции диэтиловым эфиром в аппарате Сокслета при t=60^oC, в течение 1,5 часов, на одно определение берется 1,5 мл крови или 200-600 мг измельченной ткани. Количественное определение дибунола в образцах определяется на газожидкостном хроматографе "Хром-31" с пламенно-ионизационным детектором при использовании наполнительной колонки с неподвижной фазой Апиезон L в количестве 13 вес.%. На силанизированном хромосорбе W. Температура термостатирования колонки - 180^o, объем пробы 1-2 мкл.

Недостатком данного способа является использование сложной аппаратуры, что является следствием его сложности при проведении с определенным, единым временем экстракции - без его определения для конкретного вида биообьекта с учетом его гистологической структуры для тканей и крови.

Целью предлагаемого изобретения является упрощение способа и определение времени экстракции для каждого биообьекта с учетом индивидуальной его гистологической структуры. Данная цель достигается тем, что эстракция дня каждого биологического объект осуществляется изопропиловым спиртом в колбе с обратным холодильником на водяной бане с последующим спектрофотометрическим определением по максимальному значению оптической плотности с учетом гистологической структуры биообъекта.

Способ определения времени экстракции дибунола из биообъектов осуществляется следующим образом. В сухую химическую колбу емкостью 100 см³ помещают 3 мл гомогената биообъекта (1,0 г исследуемого органа и 3 мл физиологического раствора), прибавляют 50 мл изопропилового спирта, перемешивают стекляной палочкой и ставят на водяную баню. Колбу закрывают обратным холодильником и проводят экстракцию дибунола из каждого биологического объекта при 80^oC, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 часов.

После каждого часа экстракции вытяжку в изопропиловом спирте охлаждают при комнатной температуре и обезвоживают 5,0 г сульфата меди (предварительно прокаленным). Обезвоженный раствор фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента", в сухой химический стакан емкостью 50 см³ и фотометрируют на спектрофометре марки HEWLETT PACKARD 8452А при длине волны 276 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. На основании полученных данных время экстракции дибунола из биообъектов определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности. Результаты изучения темени экстракции представлены в таблице.

Пример 1. Способ определения времени экстракции дибунола из биообъекта (плазмы) осуществляется следующим образом. В сухую химическую колбу емкостью 100 см³ помещают 3 мл плазмы, прибавляют 50 мл изопропилового спирта, перемешивают стеклянной палочкой и ставят на водяную баню. Колбу закрывают обратным холодильником и проводят экстракцию дибунола из каждого биологического объекта при 80^oC, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 часов.

После каждого часа экстракции вытяжку в изопропиловом спирте охлаждают при комнатной температуре и обезвоживают 5,0 г сульфата меди (предварительно прокаленным). Обезвоженный раствор фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента", в сухой химический стакан емкостью 50 см³ и фотометрируют на спектрофотометре марки HEWLETT PACKARD 8452А при длине волны 276 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. На основании полученных данных время экстракции дибунола из плазмы определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности, что соответствует 5 часам
Пример 2. Способ определения времени экстракции дибунола из биообъекта (сердца) проводится по предложенной методике примера 1. На основании полученных данных время экстракции дибунола из тканей сердца определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности, что соответствует 2 часам.

Пример 3. Способ определения времени эстракции дибунола из биообъекта (мозговой ткани) проводится по предложенной методике примера 1. На основании полученных данных время экстракции дибунола из мозговой ткани определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности, что соответствует 4 часам.

Пример 4. Способ определения времени эстракции дибунола из биообьекта (печени) проводится по предложенной методике примера 1. На основании полученных данных время экстракции дибунола из тканей печени определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности, что соответствует 4 часам
Пример 5. Способ определения времени экстракции дибунола из биообъекта (почек) проводится по предложенной методике примера 1. На основании полученных данных время экстракции дибунола из тканей почек определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности, что соответствует 3 часам.

Пример 6. Способ определения времени экстракции дибунола из биообъекта (подкожной жировой клетчатки) проводится по предложенной методике примера 1. На основании полученных данных время экстракции дибунола из тканей подкожной жировой клетчатки определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности, что соответствует 3 часам.

Данное изобретение было апробировано на животных белых беспородных крысах самцах, для определения времени экстракции дибунола из тканей и биожидкостей. Время экстракции дибунола определялось в биообъектах на животных со спровоцированными заболеваниями и в сравнении с контрольной группой. Опытным животным дибунол вводился перорально в виде водной суспензии из расчета 100 мг/кг. Время экстракции дибунола из биообъектов было определено для точного его обнаружения, для последующего количественного определения распределения дибунола в органах при различных путях введения, что имеет исключительно важное значение при судебно-медицинской экспертизе и изучении методов лечения различных заболеваний, их коррекции, титровании дозы - гастродуоденальных язв, гепатитов, колитов, профилактике сердечно-сосудистых заболеваний и применении в дерматологической практике.

Предложенный метод по сравнению с прототипом является доступным, более точным, экономичным, простым в исполнении в связи с использованием несложного оборудования (колбы с обратным холодильником, водяной бани, спектрофотометра), доступных и недорогих реактивов (спирт этиловый, спирт изопропиловый, сульфат меди).

Способ может быть использован в медицине, а именно в судебно-медицинской экспертизе при определении дибунола в тканях и биологических жидкостях, а также при определении фармакокинетики времени экстракции дибунола из различных лекарственных форм. Экстрагируют гомогенат биологического объекта изопропиловым спиртом в колбе с обратным холодильником на водяной бане при 80^oC с последующим спектрофотометрическим определением при длине волны 276 нм, а время экстракции дибунола определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности. Способ упрощает определение времени экстракции для каждого биологического объекта с учетом его гистологической структуры. 1 табл.

Способ определения времени экстракции дибунола из биообъектов, включающий экстракцию, отличающийся тем, что гомогенат экстрагируют изопропиловым спиртом в колбе с обратным холодильником на водяной бане при 80^oC, после каждого часа экстракции вытяжку обезвоживают, фильтруют и спектрофотометрируют при длине волны 276 нм, а время экстракции дибунола определяют по максимальному значению интенсивности оптической плотности.