Способ определения термоустойчивых спор облигатно-анаэробных микроорганизмов в рыбном продукте Советский патент 1993 года по МПК G01N33/12 C12Q1/00 C12Q1/04 

Изобретение относится к технической микробиологии и может применяться для микробиологических исследований рыбных продуктов.

Изобретение направлено на повышение точности способа определения термоустойчивых спор облигатно-анаэробных микроорганизмов в рыбном продукте. Технический результат достигается тем, что согласно изобретению вуплотненный питательный агардобавляют крахмал в количестве 0,8-3,0%. Способ осуществляют следующим образом. Готовят уплотненный питательный агар, в который добавляют крахмал в количестве 0,8- 3,0%. Рыбный продукт высевают на эту питательную.среду в трубки Вейона. Посевы термостатируют при температуре, оптимальной для развития микроорганизмов

(для CLsporogenes это может быть 37°С) и производят подсчет выросших на средах колоний микроорганизмов. По известному способу большинство выросших спор в трубках Вейона дают бурный рост и газообразование, делая невозможным выявление и подсчет спор, выросших значительно позже (например, термоповрежденных спор). Однако по способу согласно изобретению добавление крахмала в питательную среду позволяет ограничить бурный рост и чрезмерное газообразование выросших первыми спор. Кроме того, крахмал поглощает небольшие количества присутствующих в среде веществ, подавляющих прорастание и восстановление термоповрежденных спор. Это приводит к тому, что все споры прорастают в одно и то же время,.что облег00

о

00

о о

со

чает их подсчет и способствует более точному их определению. При добавлении крахмала в питательную среду в количестве менее 0,8% положительный эффект не наблюдается, а при использовании крахмала в количестве более 3% подсчет выросших спор микроорганизмов невозможен из-за чрезмерной мутности среды.

П р и м е р. В 1 л водопроводной воды вносят 10 г агар-агара, кипятят 20 мин, добавляют 50 г сухого питательного агара (в соответствии с прописью на этикетке), кипятят 2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, добавляют 1 мас.% крахмала от общего количества жидкости, стерилизуют. Затем определяют количество термоустойчивых спор облигатно-анаэробных микроорганизмов в рыбном продукте. В качестве спор используют штамм 25 спор чистой культуры CL.sporogenes. Рыбный продукт заранее готовят из фарша ставриды, фасуют в банку N2 в количестве 160 г и после предварительной тепловой обработки пастеризуют в автоклаве по режиму 5-15-80-20 мин/100°С. В этот продукт до его тепловой обработки вносят споры тест-культуры CL. sporogenes- 25 в количестве 1400 спор/г. Навески готового продукта высевают на питательную среду в трубки Вейона, термоста- тируют в течение 7 дней при37°С, затем при 20°С в течение 7 дней, подсчитывают количество выросших спор, которое оказалось равным 1280 спор/г.

Для сравнения и наглядного представления о достигаемом техническом результате готовят аналогичным образом питательные среды с 0,5. 0,8, 3,0 и 4,0% крахмала и без крахмала (известный способ) и высеваюттот же продукт на эти среды в трубки Вейона, термостатируют аналогичным образом, подсчитывают количества выросших коло0

5

0

5

0

5

0

ний. Трубки Вейоиа оставляют после этого на 30 дней при 20°С для последующего подсчета. Результаты исследований представлены в таблице.

По известному способу на 14-й день тер- мостатирования (7 дней при 37°С и 7 дней при 20°С) выявляются споры в количестве 720 спор/г. Эти споры активно размножаются, выделяют газ, дают разрывы агара в трубках Вейона, что не позволяет даже на 44-й день термостатирования определить количество начавших вырастать позже спор.

По заявленному способу (0,8-3,0% крахмала) к 14-му дню термостатирования выявляются не только известные 720 спор/г, но одновременное ними вырастают еще 560 спор/г, которые должны были прорасти позже.

Реализация способа определения термоустойчивых спор облигатно-анаэробных микроорганизмов позволит более точно учитывать их количество, что особенно важно при. разработке режимов стерилизации и пастеризации, а также для обоснования мягких режимов тепловой обработки рыбных продуктов повышенного качества без ухудшения микробиологической надежности.

Формула изобретения

Способ определения термоустойчивых спор облигатно-аназробных микроорганизмов в рыбном продукте, заключающийся в приготовлении уплотненного питательного агара, посеве продукта на агар в трубки Вейона, термостатировании посевов и подсчете выросших колоний микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в уплотненный питательный агар добавляют крахмал в количестве 0,8-3,0%.

Продолжение таблицы

Использование: изобретение относится к технической микробиологии и может применяться для микробиологических исследований рыбных продуктов и обоснования мягких режимов тепловой обработки и термоповреждений. Сущность изобретения: способ осуществляется путем приготовления уплотненного питательного агара, посева продукта на агар в трубки Вейона, термостатирования посевов и подсчета выросших колоний. Технический результат достигается тем, что в уплотненный питательный агар добавляют крахмал в количестве 0,8-3,0%. Применение способа позволяет полнее выявлять термоустойчивые споры облигатно-анаэробных микроорганизмов в рыбном продукте. 1 табл.