Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS - продуцент @ -эндотоксина против колорадского жука Советский патент 1993 года по МПК A01N63/00 C12N1/20 

Изобретение относится к биологическим средствам борьбы с жуками - вредителями сельского хозяйства и может быть использовано против вредителя картофеля - колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata).

Целью изобретения является повышение штамма, образующего эндотоксин, активный против колорадского жука.

Поставленная цель достигается штаммом B.thuringiensis 2B выделенным из личинки большого мучного хруща (Fenebrio

molitor), культивируемого в лабораторных условиях.

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов, имеет регистрационный номер ВКМ - В1806Д.

Культурально-морфологические признаки.

Штамм образует на МПА матовые сероватые морщинистые колонии с извилистым краем. Размер клеток; ширина 1,2 нм, длина 4 нм. Образует споры и кристаллы через 72 часа при культивировании на среде Са при 30°С. Споры имеют овальную форму, кри00

Ј

СЛ

ю о

со

сталлы имеют ромбовидную форму. Продуктивность 5,5 х 109 спор/мл на среде С2 и бхЮ9 спор/мл на среде ДПС.

Физиолого-биохимические свойства.

Температурный оптимум роста 30°С, максимум 45°С, минимум 10°С: Усваивает глюкозу, фруктозу. Не усваивает ксилозу, арабинозу, манит, тирозин. Желатину разжижает. Молоко непептонизирует и свертывает. Крахмал гидролизует. Обладает каталазной, лецитиназной, нитратредуктаз- ной активностью. Растет на среде с NaCI до 10%.

Штамм Bacillus thurlnglensls 2B вызывает 100% гибель личинок колорадского жука при 10 концентрации спор и кристаллов на 1 см2 картофельного листа.

Пример Для накопления максимального количества спор и кристаллов белка эндотоксина культуру Bacillus thurfngicnsls 2B выращивают на полусинтетической среде Cz, следующего состава в %: глюкоза-1-, пептон-0.2, казаминовые кисло- ты-0,5, дрожжевой экстракт-0,2, (NH4)2S04 - 0,2; КН2РСМ - 3; КгНР04 - 5; MgSO4 x 7H20 - 0,01 MnCl2 - 0,003; ZnSCM х 7Н20 - 0.0005; CuS04 х 5Н20 - 0,0004; х 7Н20 - 0,00005 CaCte 0,006; дис Н20.

Для наблюдения за образованием спор и кристаллов используют световой микроскоп (х 100.0) с фазово-контрастным устройством и применяется метод Смирнова для покраски кристаллов с последовательной обработкой мазков амидошварцем и кар- бол-фуксином Циля.

Испытание активности против колорадского жука проводят следующим образом; листья картофеля вымачивают 30 мин в сус0

5

0

5

0

5

пензии спор и кристаллов получаемой после 72- часового выращивания культуры на качалке (200 об/мин) при температуре 30°С. На листья, пропитанные разведенной в 10 суспензией спор и кристаллов, помещают по 10 личинок колорадского жука (Leptlnotarsa decemllneata) 1-го возраста. Испытание инсектицидной способности спор и кристаллов, полученных на синтетической среде С2, обнаруживает 70% гибель личиной первого поколения на 3-й сутки и 100% гибель на 4-е сутки.

П р и м е р 2. Культуру Bacillus thurlnglensls 2B выращивают на производственной среде ДПС следующего состава в %: дрожжевой экстракт - 3,0, кукурузная мука - 1,5. водопроводная вода, рН - 6,8. Далее согласно примеру 1.

Наблюдается 100% гибель личинок 1-го поколения на 2-ые сутки при использовании суспензии в разведении .e. концентрация 10 спор и кристаллов на 1 см листа).

Таким образом биологическая активность штамма B.thuringlensls2B следующая Ц 1оо 5x102 - 6x103 спор/мл превосходит данные отечественных и иностранных авторов.

Представленный штамм 2В имеет своим активным началом а -гчдотоксин нёпато- генный против животных и может быть предложен как основа для биопрепарата против колорадского жука.

Форм у л а изобретения

Штамм бактерий Bacillus thurlnglensls ВКМ В-1806 - продуцент а -эндотоксина против колорадского жука.

Использование: производство биологических средств борьбы с вредителями сельского хозяйства - колорадским жуком и касается нового штамма бактерий для производства вышеуказанного средства/Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus thurlnglensls выделен из личинки мучного хруща (Tenebrlo molitor), культивируемого в лабораторных условиях. Депонирован в ВКМ под № В-1806Д. Для получения препарата G-эндотоксина (в виде спор и кристаллов) вышеуказанный штамм бактерий выращивают на среде С2, содержащей (%): глюкозу 1; пептон 0,2; казалиновые кислоты 0,5; дрожжевой экстракт 0,2; сернокислый аммоний 0,2; однозамещенный фосфорнокислый калий 3; двузамещенный фосфорно-кислый калий 5; сернокислый магний 0,01; хлористый марганец 0,003; сернокислый цинк 0,0005; сернокислую медь 0,0004; сернокислое железо 0,00005; хлористый кальций 0,006; вода остальное, в течение 72 ч при 30°С. Полученную суспензию разводят до 103 спор и кристаллов. На листья, пропитанные суспензией, помещают по 10 личинок колорадского жука первого возраста. На 3-й сутки обнаруживают 70% гибель личинок первого поколения, а на 4-ые сутки - 100% гибель.