Производные 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5,-триазина в виде свободного основания или в виде гидрохлорида, обладающие активностью потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению Советский патент 1993 года по МПК C07D413/04 A61K31/535 C07D413/04 C07D251/18 C07D295/14 

R - водород или метил и

Ra - ацетил или бензоил, имеющим активность потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению.

Указанные свойства позволяют предполагать возможность применения этих соединений в медицине.

Известны 2-амино-1,3 5-триазины, замещенные в - положении аминогруппой, которая моно- или дизамещен радикалом алкил, алкенил, циклоалкил арил или аралкил, или азотным гетероциклическим радикалом, и в положении 6 алкилом, арилом или аралкилом, в частности, 2-амино- -морфолино-6- пропил-1,3,5 триазин. Эти соединения обладают свойством повышения секреции гормонов коры надпочечников и, в частности, глюкогормонов коры надпочечников.

Целью изобретения является получение новых производных 2-амино- -мор- фолино-6-пропил-1,3,5-триазина , или их гидрохлоридов, обладающих новым видом биологического действия в этом ряду соединений.

Новые 2-амино- -формолино-6-про- пил-1,3,5-триазины формулы I обладаю свойством повышения потенциала центральных и периферийных холинэргичес- ких эффектов, вызванных холиномиме- тическим агентом, таким как, например, оксотреморин в то время, как сами новые соединения не обладают собственным холинэргическим эффектом. Кроме того , эти соединения обладают преимущественным свойствам ослабления эффектов при пони : енной холинэр- гической деятельности, вызванной холинэргическим антагонистом таким, как, например, скопояамин. Холинэр- гическая система широко связана с явлениями запоминания и обучения. Введение молодым пациентам ачтихолинэр- гического агента такого, как скопол- амин, вызывает недостатки памяти, похожие на недостатки памятей у пожилых людей. Наоборот, холинэргические агенты, как физостигмин, способны бороться с амнезией, вызванной введением антихолинэргических агентов.

Кроме того, в настоящее время установлено, что наиболее часто встречающимся признаком, связанным со ела,- боумием является именно разрушение холинэргической системы. Вот почему, новые соединения могут быть исполь

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

зованы для лечения нарушений сознания и поведения, связанных с возрастом и синдромами слабоумия, в частности, при лечении нарушений, связанных с болезнью Альцхаймера, старческим слабоумием типа Альцхаймера и с любой развивающейся патологией сознания.

Пример 1. Получение морфолино-6-пропил-1,3,5 триазин-2- ил)аминс -этанола (соединение I).

Растворяют ,5 г (0,6 моль) 2- хлор- -морфолино-6-пропил-1 ,3, 5-триазина в 600 мл дйоксана. В этот раствор вводят, по каплям и при хорошем перемешивании, примерно за 80 минут, раствор М г (7,28 моль) 2-амино- этанола в 600 мл дйоксана. Затем реакционную смесь нагревают в рефлюксе в течение 7 часов. Образовавшийся гидрохлорид 2-аминоэтанола охлаждают, декантируют и удаляют диоксан под пониженным давлением. Полученный осадок растворяют в 5 литрах диэтило- вого эфира. Этот раствор промывают водой, а промывочную воду повторно экстрагируют дихлорметаном. Органические фазы объединяют и высушивают на сульфате магния. Удаляют растворитель под пониженным давлением. Полученный твердый осадок рекристаллизи- руют в смеси 50:50 (объем) этилаце- тэт-петролейный эфир. Получают 1б9,8г 2- Ј( -морфолино-6-пропил-1,3,5-три- азин-2-ил)амино -этанола.

В,ыход: 88%. Температура плавления: 95-99°С.

Анализ для в %

Вычислено: С 53,91, Н 7,92, N 26,20.

Найдено: С 5,30, Н 8,10, N 26,13.

2-Ј(-морфолино-6-пропил-1,3,5- триазин-2-ил)амино -этанол может быть представлен в двух различных кристаллических формах в зависимости от рекристаллизации продукта в метаноле (температура плавления: ) или в толуоле (температура плавления: 89-90°С).

Таким же образом получают соединения формулы I, приведенные в табл. 1.

Пример 2. а) Получение исходного 2- Ч -хлор-6-пропил-1,3,5- триазин-2-ил)амино -этанола.

При температуре окружающей среды добавляют по каплям 2,г (Q,h моль 2-аминоэтанола, растворенного в 100 мл дйоксана, в раствор 38, г

5

(0,2 моль) 2,(4-дихлор-6-пропил-1 ,3,5 триазина в 100 мл диоксана. После добавления выдерживают еще перемешивание в течение одной ночи. Фильтруют гидрохлорид 2-аминоэтанола, а фильтрат выпаривают под пониженным давлением. Полученный осадок рекрис- таллизуют в смеси этилацетат-гексан (объем). Получают Л , 5 г 2-(Ц хлор-6-пропил-1, З -триазин -ил ми ноЗ-этанола.

Выход: 96%. Температура плавления 87-88°С

Анализ: для С e II0C1N40 в %

Вычислено: С М,3 Н 6,00,N 25,88 С1 16,40.

Найдено: С W.42. Н 6,17. N 25,69 С1 16,52.

в) Получение 2-Ј(-морфолино-6- пропил-1,3,5-триазина-2-ил)амино - этанола.

Вариант 1.

Смешивают 10,83 г (0,05 моль) 2- (-хлор-6-пропил-1 , 3,5-триазин-2- ил)амино -этанола и 8,7 г (0,10 моль морфолина в 150 мл диоксана. Самопроизвольно повышают температуру смеси до Н°С. Затем образовавшийся гидрохлорид морфолина нагревают в рефлюк- се в течение 30 мин, затем охлаждают и фильтруют. Фильтрат выпаривают и рекристаллизуют осадок в смеси 50:50 (объем) этилацетат-гексан. Получают 11,8 г 2-((-морфолино-6-пропил- 1,3,5 триазин-2-ил)амино2-этанола.

Оыход: 88,%. Точка плавления:

.

Рекристаллизированный в метаноле продукт плавится при и является идентичным соединению I, полученному по примеру 1.

Вариант 2.

Смешивают 10,83 г (0,05 моль) 2- (А-хлор-6-пропил-1,3,5 триазин-2- ил)амино -этанола и 15,15 г (0, 15 моль N-метилморфолинэ в 100 мл диоксана. Смесь нагревают в рефлюксе в течение 20 часов, затем охлаждают и удаляют диоксан под пониженным давлением. Осадок растворяют в 200 мл этилаце- тата. Раствор промывают два раза посредством 50 мл воды, высушивают на сульфате натрия и концентрируют раствор. Продукт кристаллизируют в ходе выпаривания. Получают 9,23 г морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2- ил)амиж -этанола, идентичного продукту, полученному по примеру 1.

22 4036

Пример 3. а) Получение исходных 2-амино- -морфолино-б-пропил- 1,3,5-триазинов

1.2 амино- -морфолино-6-пропил1 ,-3,5-триазина (гидрохлорид).

Смешивают 87 г (1 моль) морфолина и 8,6 г (0,05 моль) 2-амино- - хлор-6-пропил-1, 3,5-триазина. Темпе- jo ратуру смеси самопроизвольно повышают до . Затем нагревают в рефлюксе в течение 5 часов. Реакционную

смесь выпаривают под пониженным дав- i лением, а полученный осадок повторно

15 растворяют в этилацетате. Раствор

промывают три раза водой, затем высушивают его на сульфате натрия. Растворитель удаляют под пониженным давлением, а осадок рекристаллизируют в 20 гексане. Получают 9,1 г 2-амино- - морфолино-6-пропил-1,3,5-триазина. Выход: 82%. Температура плавления: 127-128°С.

Гидрохлорид: температура плавле- 25 ния: 210-211°С (изопропиловый спирт- эфир) .

Анализ для C(OH,7N5OHC1 в I:

Вычислено: С )6,2,Н 6,94N 26,97, СГ13.68.

30 Найдено: С 16,21, H 6,90, N 26,78, СГ 13,61.

2. 2-Метиламино-4-морфолино-6-про- пил-1,3,5-триазин гидрохлорид.

В раствор,-содержащий 5,6 г

35

(0,03 моль) 2-хлор- -метиламино-6пропил-1,3,5-триазина в 50 мл диоксана, добавляют раствор, содержащий 8,7 г (0,1 моль) морфолина в 50 мл диоксана. Смесь нагревают о рефлюксе

MQ в течение 5 ч Затем охлаждают и фильтруют образовавшийся гидрохлорид морфолина. Растворитель удаляют под пониженным давлением, а осадок разбавляют в хлороформе. Промывают

де водой и высушивают органическую фазу на сульфате натрия. Растворитель выпаривают, а осадок рекристаллизуют в этилацетате. Получают 5,3 г 2-ме- тиламино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5

с триазина.

Выход: . Температура плавления: 131-133°С.

Полученный продукт растворяют в ее изопропиловом спирте в горячем состоянии. В этот раствор добавляют эквивалентное количество хлористоводородной кислоты в растворе в этиловом эфире. Гидрсхлорид кристаллизуют путем охлаждения. Фильтруют, промывают этиловым эфиром и высушивают.

Выход: 75%. Температура плавления 177-1784.

Анализ: для C,,H,9N50-HC1 в %

Вычислено: С W,26,H 7,31,N 25,29, СГ12.97.

Найдено: С 8,38, Н 7ЛО,Н 25,57, СГ12,61.

в) Получение 2-амино- -морфолино- 6-пропил-1,3,5 триазинов.

1.М-(-морфолино-6-пропил-1,3,5- триазин 2-ил)-ацетамид (соединение 21)

При температуре окружающей среды добавляют по каплям Ц г (0,05 моль) ацетилхлорида в раствор 11,2 г (0,05 моль) 2-амино- -морфолино-б- пропил-1,3,5-триазина в 100 мл безводного пиридина. Смесь перемешивают в течение 6 ч, затем оставляют в течение 8 ч. Гидрохлорид пиридина фильтруют и выпаривают фильтрат под пониженным давлением. Полученный осадок разбавляют один раз толуолом, который снова выпаривают. Затем осадок разбавляют дихлорметаном, промывают раствор водой и высушивают на сульфате натрия. Полученный после вы .паривания осадок растворителя очищают хроматографией на двуокиси кремния (элюент: 90:10 (объем) дихлорметан- этанол), а продукт, в конечном итоге рекристаллизируют в этилацетате. Получают 5,75 г М-(-морфолино-6-про- пил-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамида.

Выход: 3,. Температура плавления: 1 1-2°С (соединение 21а)

Гидрохлорид: температура плавления: С (изопропиловый спирт- эфир), (соединение 21 в).

Анализ для С yjH,9 N502- HC1 в %

Вычислено: С 7,7б, Н 6,63,N 23,22 С1 11,77.

Найдено: С 7,78,Н 6,73, N 22,80, С1 11,62.

2.N-Ct-морфолино-б-пропил-1,3,5- триазин-2-ил)бензамид (гидрохлорид) (соединение 22)

В раствор 11,2 г (0,05 моль) 2- амино- -морфолино-6-пропил-1,3,5 триазина а 200 мл дихлорэтана добавляют при температуре окружающей среды, последовательно, раствор 7,7 г (0,055 моль) бензоилхлорида в 50 мл дихлорэтана и раствор 5, 5 г (0,055 моль триэтиламина в 50 мл дихлорэтана. Нагревают смесь в рефлюксе в течение

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

6 ч, затем ее охлаждают до температуры окружающей среды. Последовательно промывают водой с водным раствором бикарбоната натрия, затем еще раз водой. Органическую фазу высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель под пониженным давлением. Полученный осадок хроматографируют на двуокиси кремния (элюент: 95:5 (объем) дихлорметанэтанол), затем, в конечном счете, рекристаллизируют в смеси 50:50 (объем) эфир-гексан. Продукт образует гидрохлорид в эфире. Таким образом, получают 12,1 г гидрохлорида N-(4-морфолино-6-пропил- 1,3,5 триазин-2-ил)-бензамида.

Выход: 66,5%. Температура плавления: 197-1986С.

Анализ: для С(7Н2(Ы504 НС1 в %.

Вычислено: С 56,12, Н 6,05, N 19,26, С1- 9,77.

Найдено: С 56,30, Н 6,50,N 19,16, el 9,5.

Соединения, объединенные в табл.2, получают либо по методу примера Зв (1), либо по методу примера Зв (2).

Пример 4. 1,2- Ј2-(ацеток- си)этил aMHHoJ- t-морфолино-б-пропил- 1,3,5-триазин(соединение 37).

В раствор 13,Ь г (0,05 моль) 2- ГС -морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин- 2-ил)амик -этанола (соединение 1, полученное по примеру 1) в 200 мл . дихлорметана одновременно вводят, при температуре 0°-5°С, ,3 г (0,055 моль) ацетилхлорида, растворенного в 50 мл дихлорметана, и 5,5 г (0,055 моль) триэтиламина в растворе в 50 мл дихлорметана. Добавление этих двух реактивов регулируют таким образом, чтобы в реакционной среде кислотный хлорид всегда был в избытке по отношению к триэтиламину. Выдерживают перемешивание в течение одного часа при 5°С, и затем, в течение 12 ч при температуре окружающей среды. Реакционную смесь последовательно промывают водным раствором бикарбоната натрия и водой. Высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель под пониженным давлением. Осадок кристаллизуют в смеси толуол-гек- сан 1:2. Полученный продукт сначала очищают хроматографией на двуокиси кремния (элюент: 95:5 (объем) дихлорметанэтанол) , затем его рекристаллизируют в смеси толуол-гексан 1:1. По10

лучают 9,3 г 2- Ј2-(ацетокси)этип - аминоЗ- -морфолино-б-пропил- ,3,5- триасина.

Выход: 60%. Температура плавления: 9/ -95°С.

Анализ для C, + H2iN50 в

Вычислено: С 5,37, Н 4,77, N 22,65.

Найдено: С 54,98, Н 7,69.,N 22,62,

Пример 5. Получение N.N-ди- метил-N1-(4-морфолино-6-пропил-1,3,5- триэзин-2-ил)мочевины (соединение 41).

При температуре 20 °С пропускают в течение трех часов, газовый поток ди- «с метиламина в растворе 5 г (0,0145 моль) (4-морфолино-6-пропил-1, 3, 5-триазин- 2-ил)карбамата фенила в 100 мл безводного дихлорметана. Затем оставляют смесь в течение 12 ч. Последовательно OQ промывают ее разбавленным раствором гидроокиси натрия и водой. Органическую фазу высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель под пониженным давлением. Полученный осадок 25 кристаллизируют в смеси 50:50 (объем) этилацетат-гексан. Получают 1,7 г К,М-диметил-Н -(4-морфолино-6-пропил- 1,3,5-триазин-2-ил)мочеоины.

Выход: 39,9%.

Температура плавления: 110-111°С.

Анализ для С,-,НагМ6Ог в %

Вычислено: С 53.06.Н 7,48,N 28,57.

Найдено: С 53,20, Н 7,69,N 28,67.

2-Лмино-4-морфолино-6-пропил- 1,3,5-триаяины или их гидрохлориды обладают свойством коррекции эффектов гипофункции холинэргической системы. Это преимущественное свойство

30

35

путем введения мыши небольшой дозы оксотреморина.

Степень периферийной холинэргн- ческой активации измеряют по слюно- еыделению, количественно определенному по следующей системе отсчета:

0очкоп: слюновыделение не превышает слюновыделение у обычной мыши,

1очко: немного слюны находится вокруг зубов,

2очка: слюна образует узкую полоску вокруг рта,

4 очка: слюна смачивает кожу под подбородком,

6 очков: слюна течет из рта, например, на передние конечности,

Промежуточные очки не применяются, а слюна снимается после каждого наблюдения.

Степень центральной холинэргической актипации измеряется по тремоген- ному эффекту, количественно определяемому по слелующей системе отсчета:

0очков: нет дрожи,

1очко: случайное, легкое периодическое дрожание,

2очка: умеренно-легко, часто повторяющееся дрожание,

4 очка: сильное дрожание, но с периодами покоя,

6 очков: очень сильное, почти постоянное дрожание.

Самцов мышей NIIRI (20-25 г) распределяют на четыре группы по пять животных, а именно: одна контрольная группа и три обработанные группы. Тестируемое соединение вводят интрабыло выявлено в резупьтате серии фар-40 пеРитональным пУтем ° тРех обрабо- макологических испытаний, показываю- танных группах) за 20 мин перед введением оксотреморина с разными дозами для каждой из оброботанных групп. Оксотреморин вводят интраперитональ- ным путем в обработанных группах и в контрольной группе, с дозировкой 0,05 мг/кг, в растворе в 10 мл/кг физиологической сыворотки. Эта доза соответствует примерно минимальной дозе

щих, что соединения по изобретению оказывают определенный эффект, подобный эффекту хорошо известных холинэргических соединении таких, как оксо- треморин, ареколин или физостигмин (2) или же противодействуют эффекту такого холинэргического антагониста, как скополамин (3).

45

Соединения настоящего изобретения подвергли следующим фармакологическим испытаниям.

1. Потенциализация холинэргичес- ких эффектов оксотреморина. Целью этого теста является доказательство того, что соединения по изобретению усиливают центральные и периферийные холинэргические эффекты, вызванные

0

с Q 5

0

5

путем введения мыши небольшой дозы оксотреморина.

Степень периферийной холинэргн- ческой активации измеряют по слюно- еыделению, количественно определенному по следующей системе отсчета:

0очкоп: слюновыделение не превышает слюновыделение у обычной мыши,

1очко: немного слюны находится вокруг зубов,

2очка: слюна образует узкую полоску вокруг рта,

4 очка: слюна смачивает кожу под подбородком,

6 очков: слюна течет из рта, например, на передние конечности,

Промежуточные очки не применяются, а слюна снимается после каждого наблюдения.

Степень центральной холинэргической актипации измеряется по тремоген- ному эффекту, количественно определяемому по слелующей системе отсчета:

0очков: нет дрожи,

1очко: случайное, легкое периодическое дрожание,

2очка: умеренно-легко, часто повторяющееся дрожание,

4 очка: сильное дрожание, но с периодами покоя,

6 очков: очень сильное, почти постоянное дрожание.

Самцов мышей NIIRI (20-25 г) распределяют на четыре группы по пять животных, а именно: одна контрольная группа и три обработанные группы. Тестируемое соединение вводят интра40

45

оксотреморина, которая вызывает дрожание и выделение слюны.

i

После введения оксотреморина животных отдельно помещают в небольшие клетки и яа ними устанавливают наблюдение с равномерными интервалами в 5 мин до полного исчезновения холин- эргических эффектов.

Для каждой из групп суммируются индивидуальные очки, начисляемые за

каждый период наблюдения, это позволяет составить кривую, представляющую сумму очков в зависимости от времени, характерную для каждой группы.

Средние значения поверхностей под кривыми, полученными для каждой из обработанных групп, сравнивают со средним значением поверхности под кривой соответствующей контрольной группы, и проводят статистический анализ по методу Манн-Уитнел.. В результате этого сравнения, можно определить минимальную активную дозу. Эта минимальная активная доза явля- ется минимальной дозой соединения, необходимой для наблюдения потенциа- лизации эффекта слюновыделения или тремогонного эффекта оксотреморина, или, другими словами, для получения поверхности, большей, чем поверхность под кривой, полученной для контрольной группы.

В приводимой ниже табл. 3 даны активные минимальные дозы соединений согласно изобретению, которые потен- циализируют слюнотечение и дрожания, вызванные оксотреморином.

Результаты, полученные в этом тесте, доказывают, чти соединения изоб- ретения усиливают эффект слюновыделе- нил оксотреморина при минимальной дозе, составляющей 8,-88,6 мг/кг, и усиливают тремогенный эффект при минимальной дозе, составляющей 8,0 - 37,8 мг/кг. Кроме того, минимальные активные дозы не обладают собственным холинэргическим эффектом и очень далеки от смертельных доз, определенных в тесте Ирвина.

Кроме того, этот тест выявил, что некоторые соединения согласно изобретению, введенные в минимальной активной дозе, обладают более продолжительным эффектом, чем сложный мети- ловый эфир 1,2,5,6-тетрагидро-1-ме- тил-3-пиридинкарбоновой кислоты (аре- колин), являющийся известным холинэргическим соединением.

Таким образом, соединения изобре- тенил показывают потенциализацию эффектов слюновыделения и тремогенных эффектов оксотреморина через двадцать минут после их введения при минимальной активной дозе в то время, кок, в тех же самых условиях, ареко-а лин не дает никакой потенциализации.

2. Торможение чрезмерной активности, вызванной скополамином.

Животное, помешенное впервые в новую окружающую среду, проявляет интенсивную исследовательскую активность по изучению этой новой среды. Постепенное снижение и последующее исчезновение этой активности по изучению, другими словами, припыкаемость к новой среде, монет рассматриваться как элементарная Форма обучения. Эта элементарная Форма обучения чувствительна к влиянию медикаментов, которые облегчают или которые замедляют обучение. Так например, скополамин - соединение, которое вызывает мнези- ческие расстройства, приводит к чрезмерной познавательной активности у крысы, помещенной о новую окружающую среду, это явление связано с центральной антихолинэргической активностью этого соединения. Напротив, холин- .оргический антагонист типа физиостигми- на противодействует чрезмерной активности, созданной укололамином.

В нижеописанном тесте в зависимости от их растворимости, соединения изобретения вводят либо в физиологической сыворотке, либо в соответствующем носителе (обычно, буферный раствор-цитрат с рН 5).

Этот тест позволяет установить для соединений согласно изобретению активность, сравнимую с активностью физиостигмина.

В этом тесте используют самцов , крыс Sprague-Dawly SPF (Specific Pat- hogeri Free) (160-200 г). В течение недели перед экспериментом этих животных содержат в нормальных условиях группами по 15 животных в стандартных ограждениях решетками клетках со свободным доступом к пище и питью.

В начале эксперимента, крыс распределяют на однородные группы по 10 животных и приучают, в течение одного часа, к месту эксперимента. Затем, каждая группа животных подвергается определенной обработке:

-группа 1 получает две одновременные интраперитональные инъекции физиологической сыворотки или использованного носителя,

-группа 2 получает одну интрапе- ритональную инъекцию физиологической сыворотки или использованного носителя и одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг/кг скополамина в растворе,

-группа 3 получает одну интрапе- ритональную инъекцию тестируемого соединения в растворе в соответствующем носителе и одну интраперитональ- ную инъекцию физиологической сыворотки или использованного носителя,

-группа ( полумает одну интрапе- ритональную инъекцию тестируемого соединения и одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг/кг скополамина.

Через тридцать минут после этой обработки, одновременно тестируют четыре группы животных. Для этой цели каждую группу помещают о квадратную камеру ( см) с решетчатым полом и одной вертикальной стенкой высотой 50 см. Каждая из этих камер имеет 16 зон, включая 4 зоны по углам, 4 центральные зоны и 8 периферических зон. Кроме того, каждая камера снабжена 2 рядами элементов инфракрасного излучения, расположенными в 2 см над полом для регистрации горизонтальных перемещений животных и 2 другими рядами элементов инфракрасного излучения, расположенными на высоте 10 см от пола, для регистрации вертикальных перемещений. Эти элементы инфракрасного излучения соединены с микропроцессором, который позволяет определять среднюю от пройденных расстояний (в см) для одной группы животных, определять среднее число осуществленных выпрямлений а также распределение горизонтальных перемещений, в различных центральных периферийных и угловых зонах, выраженных средним временем пребывания в этих различных зонах.

Каждое тестированное соединение исследуют, по меньшей мере, при трех различных дозах, исходя из которых определяют минимальную активную дозу, которая тормозит чрезмерную активность, наведенную интраперитональ ным введением 0,5 мг/кг скополамина. Затем, сравнивают либо значения, полученные в группе 2, обработанной только скополамином, со значениями, которые получены в группе 4, одновременно обработанной скополамином и тестируемым соединением, либо значения, полученные в группе 4, со значениями, полученными в группе 3, обработанной только тестируемым соединением.

Контрольная группа 1 служит для контроля действия скополамина, ове0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

денного в группу 2. Во всех случаях, отмеченные различия статистически, оценивают по методу Ман-Уитнея.

В приведенной ниже табл. 4 даны результаты, полученные в этом тесте с соединениями по изобретению.

Полученные в этом тесте результаты показывают, что соединения изобретения обладают хорошей тормозящей активностью в отношении чрезмерной активности, наведенной скополамином. Определенные для этих соединений минимальные активные дозы составляют 1,1-15,5 мг/кг. Однако в противоположность йизостигмину, который является неактивным, когда его вводят более, чем за 15 минут перед проведением измерений, соединения, согласно изобретению, еще обладают тормозящей активностью, когда их вводят за 30 мин перед проведением измерений. Следовательно, их активность является более продолжительной, чем активность физиостигмина.

3. Торможение эффектов скополамина на электроэнцефалограмме (ЭЭГ)

Введение скополамина человеку или животному вызывает мнезические расстройства, сравнимые с расстройствами , которые появляются в ходе нормального или патологического старения. У пациентов, страдающих старческим слабоумием типа Альцхаймера, получают улучшение мнезических расстройств путем введения физостигмина - соединения, которое тормозит ацетил- холи нэстеразу.

Скополамин, введенный крысам инт- раперитональным путем, при дозе 0,5 мг/кг приводит к изменениям спектра ЭЭГ, которые выражаются в повышении мощности полосы в 8 Гц, уменьшении мощности полос 20,8-40 Гц, а также в повышении общей мощности спектра ЭЭГ. Физостигмин противодействует этим изменениям.

Целью этого теста является подтверждение посредством метода количественного анализа электроэнцефалограммы того, что соединения изобретения обладают свойством нейтрализации воздействия скополамина на спектр ЭЭГ.

В этом тесте, используют самцов крыс Albinos Sprague Dauly SPF (1бО- 2ПО г).

Когда животные достигают возраста 3 месяца, вживляют накрепко, асептимески и под общей анестезией, 5 кортикальных электродов: один нейтральный электрод, один лобный левый и один лобный правый электроды, один затылочный левый и один затылочный правый электроды.

Тест проводят, когда животные достигают возраста примерно 15 мес. В интервале животных содержат в индивидуальных клетках, они получают воду и пищу по желанию и их подвергают регулярному суточному циклу, содержащему период темноты от 10 часов ве- чера до 6 ч утра. Одновременно животные постепенно привыкают к клеткам звуконепроницаемой кабины, которые они впоследствии будут занимать для записи электроэнцефалограмм, а также к экспериментальным условиям путем введения плацебоинтраперитональным путем.

Продукты вводят сразу перед записью ЭЭГ.

Крыс распределяют по группам из 8 животных и записывают 16 образцов спектров ЭЭГ за 5 секунд (два спект- .ра ЭЭГ на животное). Затем полученные спектры анализируют на ЭВМ, что позволяет определять для каждой группы среднее из 1б проведенных измерений и вычислить из него длл одного животного общую мощность спектра ЭЭГ, а также распределение этой мощности (в %) а различных полосах частот.

Эту операцию (запись спектров) повторяют 9 раз (общая продолжительность : 121 минута).

Эффект изучаемого соединения вычисляют из статистического сравнения результатов, полученных для различных групп животных, которым ввели соответственно тестируемое соединение, скополамин и плацебо.

D табл. 5, приводится, для некоторых соединений изобретения, введенных интраперитонеальным путем при дозе, указанной в мг/кг, процент снижение увеличения мощности полосы 6, t- 9,6 Гц (средняя 0 Гц), вызванного интраперитонеальным введением 0,5 мг/кг скополамина.

Результаты показывают, что соединения изобретения, как и физостигнин, тормозят эффекты, которые оказывает скополамин на электроэнцефалограмму. Видно, что это торможение достигает и даже превышает 50, при относительно небольших дозах, очень далеких от

5

0

5

0

5

0

5

0

5

токсичных доз, что не является случаем для физостигмина.

Ь, Пассивное уклонение с многократными испытаниями.

Соединения настоящего изобретения исследуют с целью выявления с одной стороны, их свойства содействия обучению, выраженного уменьшением числа испытаний, необходимых для достижения заранее определенного критерия, и с другой стороны, их свойства противодействия амнезии, вызванной введением скополамина. Для этой цели, используют метод пассивного уклонения с многократными испытаниями. Этот метод хорошо известен в плане оценки эффектов, которые оказывает продукт на память и на обучение.

Тест проводят на самцах крыс Spra- gue-Dawley (160-200 г), которых выдерживают во время эксперимента в стандартных клетках. Использованным устройством является квадратная прозрачная клетка со стороной 35 см и высотой 25 см, снабженная решетчатым электрифицированным полом. На полу, в одном из углов клетки, размещают резиновый изоляционный слой (10х х17 см).

Для оценки способности соединения содействовать обучению осуществляют следующее испытание.

Каждое животное помещают на резиновый слой и отмечают время, которое животное затрачивает на решение покинуть это место длл исследования клетки. После 20 с исследования животное получает удар электрическим током (прсдолжительность 3 с) в лапы, вызывая реакиию бегства. Крысу сразу извлекают из устройства и снова помещают в прежнюю клетку. Повторяют этот эксперимент до тех пор, пока животное не остается, по меньшей мере, 180 с на резиновом слое, чтобы избежать получения удара электрическим током. Обучение выражается в среднем числе испытаний, необходимых для достижения времени пребывания на слое в 100 с. I

Время пребывания на резиновом слое

в 180 с рассматривается как максимальная достигаемая характеристика для животного для избежания получения удара электрическим током. Крысы, которые остаются на слое в течение этого времени, приобретают рефлекс уклонения и снова помещаются в

17

их прежнюю клетку без полумения удара электрическим током.

Для оценки способности соединения содействовать мнезимескому удержанию по истечению времени проводят следующий эксперимент. Каждое животное подвергают четырем испытаниям по времени 0,, 21 и 28 часов. При первом испытании (время 0), животное помещают на резиновый слой и отмечают время, которое затрачивает животное для принятия решения покинуть это место для исследования клетки. После 20 с исследования, крыса получает удар элек трическим током (продолжительность 3 с) в лапы, вызывая реакцию бегства Крысу немедленно извлекают из устройства и снова помещают в прежнюю клетку. В ходе трех последующих испытаний (время: А, 21) и 28 ч), животное снова помещают на резиновый слой и отмечают время, затраченное для оставления этого места. Как только четыре лапы животного попадают на решетку, оно получает удар электрическим током и немедленно извлекается из устройства.

В начале эксперимента крыс распре деляют на 4 группы однородного состава из 15 животных. За 30 мин перед каждым испытанием, каждую группу животных подвергают определенной обработке.

-группа 1 получает одну интрапе- ритональную инъекцию физиологической сыворотки,

-группа 2 получает одну интрапе- ритональную инъекцию тестируемого соединения,

-группа 3 получает одну интрапе- ритональную инъекцию в 0,5 мг скопо- ламина и

-группа одновременно получает одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг скополамина и одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения.

Группы 1 и 2 используют в первом эксперименте, а группы 3 и используют во втором эксперименте.

Результаты, полученные в этом тесте с соединениями изобретения приведены в табл. 6. В этой таблице указаны подвергающееся испытанию соединение (колонка 1) и введенная интрапе- ритональным путем доза, выраженная в мг/кг (колонка 2).

10

е22 0318

В колонках 3 и k приводятся результаты, полученные о испытании, использованном для оценки обучения. Цифры указывают среднее число испытаний, необходимых для того, чтобы контрольное животное (группа 1) или обработанное соединением животное (группа 2) научилось пребывать в течение 180 секунд на резиновом слое, чтобы избежать получения удара электрическим током.

20

5

е

0

5

0

5

0

5

Результаты проанализированы по тесту Стьюдента.

В колонках приводятся результаты, полученные в эксперименте, использованном для оценки мнеэичсского удержания. В колонках цифры представляют среднее время пребывания, отмеченное соответственно во время О,k, .k и 28 ч для животных группы 3, обработанных только скополамином, а в колонках преде, гавлены цмфры, соответствующие живо-ных группы А, одновременно обработанных скополамм- ном и исследуемым соединением (при дозе, указанной во второй колонке). Благоприятное влияние соединения в -плане противодействия амнезии, вызванное скополамином, доказано увеличением времени пребывания на слое при каждом наблюдении. Наблюдаемые различия статистически проанализированы по методу Пан-Уитнея.

Из табл. 6 видно, что:

-соединения изобретения способствуют обучению рефлексу уклонения: среднее число испытаний, необходимых для достих ения заранее определенного критерия (максимальное время пребывания на слое порядка 180 секунд), является меньшим для обработанных животных (колонка k), чем для контрольных животных (колонка 3).

-амнезионный эффект скополамина -очень ярко выражен: видно, что время

пребывания животных группы 3 (колонка 5-8) является явно меньше, чем 180 секунд, полученных контрольными животными после среднего числа испытаний (колонка 3) и в этих условиях, благоприятное влияние соединений изобретения для противодействия амне- зионному эффекту скополамина является очень явным: животные группы (, одновременно обработанные скополамином и соединением изобретения, имеют время пребывания при каждом наблюдении значительно большее, чем животные труппы 3, обработанные только скополами- ном (сравнить результаты колонки 5 с результатом колонки 9, колонки 6 с результатами колонки 10 и т.д.).

- физостигмин оказывает благоприятное действие в плане противодействия амнезионному эффекту скополами- на, подобное действию соединений изобретения, но при дозе, вызывающей побочные эффекты и очень близкой к токсичной дозе, что не относится к соединениям изобретения.

5.Токсичность.

Токсичность соединений изобрете- ния определяют у самцов мышей NMRI посредством теста Ирвина.

Нарастающие дозы тестируемого соединения вводят интраперитональным путем группам из трех мышей до дости- женил смертельной дозы (доза, вызывающая смерть двух животных из трех за t8 часов) .

В табл. 7 приводится смертельная доза, наблюдаемая для соединений изобретения. Из табл. 7 следует, что соединения изобретения являются малотоксичными, в противоположность физо стигмину.

6.Дозировка и введение Фармацевтические композиции, содержащие соединения изобретения, могут вводиться оральным, парентеральным или ректальным путем. Фармацевтические композиции, которые могут использоваться для введения оральным путем, могут быть твердыми или жидкими, например, в форме таблеток (дра- жированных или недражированных), пилюль, драже, желатиновых капсул, растворов, сиропов и т.д. Таким же образом, композиции, которые могут использоваться для введения парентеральным путем, имеют фармацевтические формы, известные дпя этого вида введения, например, растворы, суспензии или водные или маслянистые эмульсии.

Для введения ректальным путем композиции, содержащие соединения изобретения, обычно представлены в форме свечей.

Фармацевтические Формы содержат также композиции, которые позволяют постепенно высвобождать активный продукт. Соединения изобретения смешивают с нетоксичным Фармацевтически

.

Q

с

0

5

0

5

5

0

5

0

приемлемым твердым или жидким носи- телем, и в известных случаях, с дис-( лергатором, дезинтегратором или стабилизатором. В случае необходимости, туда можно добавлять агенты подслащивания, красители. Процентное содержание активного продукта в фармацевтических композициях может изменяться в очень широких пределах в зависимости от частоты введения.

Что касается ежедневной дозировки, она может изменяться в широком диапазоне унитарных доз, например, от 0,1 до 2 г активного продукта, в зависимости от способа введения. Так, например, она может составлять 0,25 0,75 г, предпочтительно, 0,5 г один- три раза в день, когда соединение вводится в форме таблеток.

В качестве примера композиции, содержащей соединение формулы 1, которая может вводиться оральным путем, ниже приводится состав для таблеток: Соединение I250 мг

Метилцеллюлоза (Не- тосель )200 мг

Сухая лактоза 15 мг Аэросил5 мг

Безводная лимонная кислота60 мг

Тальк11 мг

Стеарат магния 20 мг Формула изобретения

Производные 2-амино- -морфолино- 6-пропил-1,3,5-триазина общей формуR1

лы

о

/-

W

N

;N-/YN

N-fN

СНоСНлСН-

i L з

в виде свободного основания, когда РЧ - водород или метил и R2 - 2-гид- роксиэтил или ацетил или R( - водород и Rg. - гидроксигруппа, 1-этил-2-гид- роксиэтил, 2-метоксиэтил, диметилами- ногругпа, 2-(ацетокси)этил или (ди- метиламино)карбонил, или в виде гид- рохлорида, когда R - водород или метил и RЈ ацетип или бензоил, обладающие активностью потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению.

Таблица 1 2-К- 4-морфолино-6-пропил-1,3, 5-триазины

Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности 2- амино- -морФолино-6-пропил-1,3,5Настоящее изобретение относится к новым производным 2-амино- -морфоли- но-6-пропил-1,3,5-триазина общей формулы I х, V N-fN 2 СН СНлСН триазинов, моно- или дизамещенных по 2-аминогруппе, или их гидрохлоридов, обладающих активностью потенциализа- ции холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых веществ указанного класса с новым видом биологического действия. Синтез ведут взаимодействием 2-хлор- -мор- .фолино-б-пропил-1,3,5-триазина с соответствующим моно- или дизамещенным амином при кипячении в растворителе с выделением продукта в виде его гидрохлорида или свободного основания. Соединения исследованы на тесты: по- тенциализация холинэргических эффектов оксотремолина, торможение чрезмерной активности, вызванной скопол- амином, торможение эффектов скопол- амина на полосе 6,-9,6 Гц ЭЭГ, мне- зическое удержание. Новые соединения превосходят известный препарат физо- стигмин. Новые соединения малотоксичны, их смертельная доза составляет 700-1100 мг/кг в противоположность 0,82 мг/кг у физостигмина. 7 табл. в форме свободного основания, когда R - водород или метил и R2 - 2-гидроксиэтил или ацетил,или R, - водород и R2 - гидроксильная группа, 1-этил2-гидроксиэтил, 2-метоксиэтил, ди- метиламиногруппа, 2-(ацетокси)этил или (диметиламино) карбонил, или в виде гидрохлорида, когда Ј 00 ю ю 4 О СО со

Таблица 3 Потенциализация холинэргических эффектов оксотреморина

35

Таблица А

Тормохение чрезмерной активности, вызванной скополамином

23

Таблица 5 Торможение эффектов скополамина на полосе 6, t - 9,6 Гц ЭЭГ

5,3

2,

29,5

8,8

2,8

2,7

52

83,3

50

53,3

25,0

66,7

Ннеэическое удержание Время пребывания (в секундах)

Таблица Токсичность соединений

СоединениеСмертельная доза, мг/кг

1t

1802

2718 7886

9ОМ

20799 21л 996

2k

Продолжение табл. 5

Таблица 6

Составитель З.Латынова Редактор В.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор А.Обручар

Заказ 2118ТиражПодписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035i Москва, Ж-35 Раушская наб,, д. V5

Производственно-издательский комбинат Патент, г Ужгород, ул. Гагарина, 101