Способ получения стимулятора роста растений Советский патент 1993 года по МПК A01N65/00 

Изобретение относится к средствам, стимулирующим развитие и урожайность растений.

Целью изобретения является значительное сокращение длительности технологического цикла, уменьшение потерь активности за счет ускорения развития продуцента с одновременной интенсификацией процесса экстракции биологически активных веществ (БАВ) из биомассы.

Это достигается тем, что для культивирования эндофитов жекь-шеня используют сбалансированную питательную среду, дополнительно содержащую ZnS04 и предше- ственник ауксинов - триптофан при следующем соотношении ингредиентов: глюкоза - 10-12 г; КН2РО - 0,9-1.5 г; К2НР04 - 0,3-0,5 г; MgSO - 0.2-0.3 г, MnSO.j, ZnSOi, FeS04, CuS04 - следы, т.е. 0,01-0,02 г; аспарагин - 15 мг, триптофан - 15мг, вода-1 л, а экстракцию БАВ проводят из биомассы, сконцентрированной центрифугированием, т.е. без применения активированного угля.

Культивирование эндофитов жень-шеня на указанной среде позволяет сократить технологический цикл до 18-20 дней, то есть за 2 месяца удается при этом проводить вместо двух - три цикла, а за год вместо 12 - 18 циклов. То есть по предлагаемому способу можно получить за одинаковое время минимум на 50% больше биологически активных веществ по сравнению с известным способом. Экстракция БАВ по предлагаемому способу позволяет исключить использование дефицитного сырья-активированного углп и избежать потерь БАВ из-за их адсорбции на угле.

Пример 1. Один и тот же посевной материал эндофитов женьшеня вносили в питательные среды, приготовленные по известному способу и предлагаемому способу. В стандартные качалочные колбы вносили по 250 мл каждой среды. Кучьтиви- рование проводили в стандартных условиях, одинаковых для обоих вариантов, при температуре 23-25°С в условиях дневной освещенности. Колбы инкубировали в течесл

С

00

ю

|4Ьь

iЈ 100

;

нив 30 дней. Затем в часть колб вносили активированный уголь в соответствии с известным способом получения БАВ, через 3 часа отфильтровывали на фильтр, собирая биомассу с углем. Фильтры вместе с содержимым переносили в колбу, и заливали 70%-ным этиловым спиртом и оставляли до следующего дня. Затем содержимое колб снова фильтровали и получали готовый экстракт БАВ.

Содержимое другой части колб, т.е. биомассу, концентрировали центрифугированием без внесения активированного угля. Осадок в центрифугируемых стаканах с0би- рали в колбы с притертой пробкой, заливали 70%-ным этиловым спиртом и стряхивали на качалке 2--3 часа, Затем экстракт отделяли от биомассы центрифугированием в течение 30 минут при 2000-3000 1/мин и таким образом получали готовый экстракт БАВ. Полученные таким образом препараты БАВ проверяли на их способность стимулировать развитие проростков озимой пшеницы Зерноградка-6. Разбавление препарата ьодой составляло 1:10000. Контрольную часть проростков обрабатывали вместо препарата дистиллированной водой,

Как видно из данных табл. 1, экстракты БАВ по предлагаемому способу (без угля) не дает значимого изменения стимулирующего эффекта как на известной, так и на предлагаемой среде. Одновременно происходит увеличение стимулирующего эффекта на 5- 7% благодаря использованию предлагаемой питательной среды при 30-суточном культивировании.

Пример 2. Все операции осуществляли, как в примере 1, но культивирование эндофитов женьшеня проводили в течение 20 дней. При этом получены следующие данные.

Как видно из представленных данных, на 20 день культивирования эндофитов женьшеня на предлагаемой среде активность БАВ намного больше, чем на известной среде. Дальнейшее культивирование продуцента до 30 дней на среде с триптофаном и цинком практически не изменяет содержание БАВ в культуре, в то время как на известной среде, т.е. без цинка и триптофана наблюдается постепенное накопление БАВ, которое в конечном счете не превышает уровень содержания их в 20-суточной культуре на предлагаемой среде. Эффект, достигаемый использованием предлагаемой среды связан, очевидно, как с ускорением развития продуцента, так и с тем, что введение в среду триптофана - предшественника ауксинов - способствует обогаще- нию комплекса ростовых веществ, содержащихся в получаемых экстрактах биомассы.

Пример 3. Все операции осуществляли, как в примере 2, но в качестве проду- цента БАВ использовали эндофиты облепихи. При этом получены следующие данные.

Как видно из табл. 3, активность БАВ эндофитов облепихи на предлагаемой среде также выше, чем при использовании известной среды,

Представленные материалы показывают, что предлагаемый способ позволяет резко сократить время культивирования продуцентов БАВ, стимулирующих рост и развитие растений, исключить из технологического цикла дефицитное сырье - активированный уголь.

Формула изобретения Способ получения стимулятора роста растений путем культивирования эндофит- ных грибов из корней лекарственных растений на питательной среде, содержащей глюкозу, фосфорнокислый однозамещен- ный калий, фосфорнокислый двузамещен- ный калий, сернокислый марганец, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и воду, в течение 30 дней с после- дующим отделением биомассы и выделением из нее целевого продукта экстрагированием, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени культивирования, в среду дополнительно вводят сер- нокислый цинк, сернокислую медь и триптофан при следующем соотношении .компонентов, г:

Глюкоза 10-12

Фосфорнокислый одноза- мещенный калий0,9-1,5

Фосфорнокислый двузамещенный калий0,3-0,5

Сернокислый магний0,2-0-,3

Сернокислый

марганец0.01-0,02

Сернокислый цинк0,01-0.02

Сернокислое железо0,01-0,02

Сернокислая медь0,01-0,02

Аспарагин0,15

Триптофан0,15

ВодаДо 1 л.

518241486

Таблица 1 Стимулирующий эффект БАВ. полученных различными способами

Таблица 2 Стимулирующий эффект БАВ, полученных различными способами

Таблица 3 Стимулирующий эффект БАВ, полученных различными способами