Способ получения средства, обладающего радиозащитным действием Советский патент 1993 года по МПК A61K35/84 

Изобретение относится к медицине, а именно к радиопротекторам природного происхождения, и может найти применение в радиобиологических экспериментах, клинической и сельскохозяйственной практике на территориях с радиоактивным загрязнением.

Согласно изобретению в способе получения средства, обладающего радиозащитным действием, включающем культивирование мицелия гриба на питательной среде, обработку его экстрагентом и получение конечного продукта, из грибов используют Schizophyllum commune, а в качестве экстрагента - этиловый спирт. Полученное таким образом средство обладает выраженным радиоэащитным действием, не уступающим известному синтетическому препарату - ионолу

Гриб Schizophyllum commune образует макроскопические, достаточно крупные плодовые тела (1 -5 см в диаметре), отличается активным ростом мицелия, что позволяет легко поступать его мицелиальные культуры. Плодовые тела сидячие до почти распростертых с отогнутым краем, часто подвешенные, прикрепляющиеся к субстрату су- женным основанием, вееровидные, половинчатые до почти округлых, срастающиеся боками или черепитчатые, реже одиночные, тонкие, сухие, мягкокожистые. Поверхность радиально-бороздчэтая, от войлочной до щетинисто-волосистой, от беловатой до серой. Край лопастный, тонкий, обычно подгибающийся или заворачивающийся вниз. Ткань очень тонкая, слегка же- латинозная. на разрезе заметная в виде темной линии, примыкающей к опушению шляпки Пластинки вееровидные, радиаль- но расходящиеся от суженного основания шляпки, с опушенными закругленными краями, от сероватых до серовато-розовых и бледно-фиолетово-розоватых Базидии удлиненно-булавовидные 2 4-споровые.

&

00

ю

ю

(Л

20-25 х 7-8 мкм. Споры цилиндрические, тонкостенные, гладкие, малиновые с розоватым оттенком, 3-4,5 х 1-1,5 мкм. Споровый порошок розоватый.

Мицелиальные культуры, полученные из плодовых тел гриба, имеют следующие культурально-морфологические особенности: на сусло-агаре колонии белые, пушистые, быстро растущие; на среде с таннином положительная реакция на экстрацеллюлозные оксидазы, как правило, не проявляется. Генеративные гифы бесцветные, 2-4 мкм в диаметре, с небольшими выростами на клеточных стенках. Конидии, хламидос- поры и оидии отсутствуют. Перечисленные признаки позволяют легко идентифицировать мицелиальные культуры при получении их из плодовых тел.

Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Из плодовых тел гриба S. commune, собранных в природе, выделяют мицелиаль- ную культуру на твердой питательной среде. Далее мицелий гриба выращивают на жидкой питательной среде в глубинной культуре. Мицелий отделяют фильтрованием, промывают водой и экстрагируют этиловым спиртом, Спиртовой экстракт концентрируют под вакуумом, разводят дистиллированной водой. Полученное таким образом средство было испытано на облученных животных для питья при свободном доступе. .Применение средства позволяет значительно (в 2 раза) увеличить средний срок жизни облученных животных и обеспечивает их 100%-ное выживание на 30-й день после облучения.

Пример. Выбирают наиболее крупные плодовые тела гриба S. commune и скальпелем удаляют с их поверхности частички по- чвы и растительные остатки. После механической очистки плодовые тела обтирают вначале сухой стерильной ватой, а затем ватой, смоченной этиловым спиртом. Разрезают плодовое тело стерильным скальпелем и переносят части ткани в чашки Петри на поверхность агаризованной питательной среды - сусло-агара. Чашки помещают в термостат при температуре 26-28°С. На 5-7-е сутки появившийся мицелий микроскопируют с целью идентификации культуры. Мицелий из зоны роста пересевают в следующую чашку с сусло-агаром для изучения культурально-морфологи- ческих свойств и уточнения видовой принадлежности гриба. Затем мицелиаль- ную культуру S. commune пересевают в пробирки со скошенным сусло-агаром и выращивают в течение 6 суток. Культуру засевают смывом в жидкую глюкозо-пептонную среду следующего состава: глюкоза - 10 г, пептон - 3 г, - 1 г, 0,5 г, кукурузный экстракт - 2 г, Н20 - до 1 л. Глубинное культивирование проводят в колбах на качалке в течение 4-5 суток при температуре 26-28°С. Выросший мицелий измельчают путем встряхивания в колбе со стерильными бусами и используют для посева глюкозо-пептбнной среды аналогично0 го состава. Культивирование проводят в течение 3-х суток при тех же условиях.

Мицелий отделяют фильтрованием, промывают водой и экстрагируют этиловым спиртом при гомогенизации в ступке с квар5 цевым песком. Этиловый спирт берут из расчета 25 мл на 1 г мицелия, при этом экстракцию проводят трехкратно в течение 30 мин, Спиртовой экстракт концентрируют в 100 раз под вакуумом при температуре не

0 выше 35-40°С и далее разводят дистиллированной водой до содержания сухих веществ 0,1 мг/мл. Остаточное содержание этилового спирта не превышает 1-2%.

Полученное таким образом средство

5 было испытано на мышах линии СВА, с начальной массой 18-20 г, подвергнутых внешнему гамма-облучению 6,0 Гр (мощ- ностьдозы - 0,055 Гр/с) на установке УГУ- 420 (Со). Средство давали мышам для

0 питья при свободном доступе по 1-1,5 мл в сутки в течение 28 суток после облучения. Для сравнения параллельно группе мышей, получавшей такую же дозу облучения, давали известный антиоксидант, обладающий

5 радиопротекторным действием в такой же дозе.

Как видно из результатов, приведенных в таблице, применение средства обеспечивает 100%-ное выживание мышей на 30-й

0 день после облучения, а также значительно увеличивает средний срок жизни по сравнению с контролем. По своему радиозащитному действию средство не уступает известному антиоксиданту-радиопротекто5 ру - ионолу. По сравнению с известным (прототип) предложенный способ позволяет расширить сырьевую базу и использовать в качестве исходного сырья гриб S. commune, образующий макроскопические плодовые

0 тела, что упрощает его идентификацию и выделение в чистую культуру.

Формула изобретения Способ получения средства, обладающего радиозащитным действием, включаю5 щий культивирование мицелия гриба на питательной среде, обработку его экстра- гентом и получение конечного продукта, отличающийся тем, что из грибов используют Schlzophyllum commune, а в качестве экстрагента этиловый спирт

Использование: в медицине, а именно в радиобиологических экспериментах, клинической и сельскохозяйственной практике на территориях с радиоактивным загрязнением. Сущность изобретения способ включает экстракцию грибов, при этом в качестве гриба используют Schizophyllum commune, а в качестве экстрагента - этиловый спирт. 1 табл.