Способ поддержания жизнеспособности ЕNтамоева нISтоLYтIса Советский патент 1993 года по МПК C12N1/00 C12N1/10 

Изобретение относится к паразитологии, а именно к способам поддержания жизнеспособности амеб.

Целью изобретения является упрощение техники поддержания жизнеспособности Entamoeba histolytlca.

Это достигается тем, что в предложенном способе посев культуры амеб осуществляют в нестерильную питательную среду в .нестерильных условиях, инкубирование проводят при температуре 18-20°С в течение 2-х месяцев, а культуру подкармливают путем добавления в исходную питательную среду одной петли нестерильного измельченного рисового крахмала через каждые 3-4 суток.

Отсутствие необходимости в стерильной питательной среде, в стерильных условиях при пересеве культуры амеб и в свежих порциях питательной среды приводит к упрощению способа поддержания жизнеспособности амеб, сокращению времени и энергозатрат, необходимых для его осуществления.

Предложенный способ реализуют следующим образом. По ивзестному в прототипе рецепту приготавливают питательную среду (среда Павлова), содержащую следующие ингредиенты:

1.Хлористый натрий8,5г.

2.Доухзамещенный фосфорнокислый натрий безводный (N32HP04)0.59г.

3.Однозамещенный фосфорнокислый калий (КЙ2Р04)0,45 г.

4.Вода дистиллированнаядо 1 л.

В пробирку с 10 мл нестерильной средой добавляют 0,5 мл стерильной неинакти- вированной лошадиной сыворотки или сыворотки крупного рогатого скота (соотно- шение 1;20) и петлю нестерильного измельченного рисового крахмала. Далее, в тех же нестерильных условиях, осуществляют посев 0,5 мл суспензии фекалий, содержащих амеб на физиологическом растворе (соотношение фекалий к физраствору - 1:10) в пробирку с питательной средой и инкубируют ее при комнатной температуре (18 20°С) в

00

с

ico

hO N .N

СО XI

течение 2-х месяцев. Через каждые 3-4 суток п пробирку с культурой добавляют петлю нестерильного измельченного рисового крахмала.

Пример осуществления способа. Суспензию фекалий, содержащую амеб в про- светной форме, инкубировали в среду Павлова в соответствии с известным и предложенным способами. Сравнительную оценку результатов проводили по следующим критериям: затраты времени и электро- знергии на реализацию способов; концентрация амеб в питательной среде в конце периода инкубации; длительность сохранения жизнеспособности амеб; сохранение исходной формы у амеб; простота в осуществлении и доступность способа. Полученные результаты показали, что при использовании предложенного способа в сравнении с известным затрачивается в 12,5 раза меньше времени (28 и 350 минут), а энергозатраты составляют, соответственно 0 и 20 Квт/час (период наблюдения - 2 месяца). За этот период культура амеб оставалась жизнеспособной при использовании обоих способов, а концентрация амеб в питательной среде в конце инкубации была примерно на одинаковом уровне (126 и 135 амеб в среднем в 1 мл питательной среды). В конце периода наблюдения при обоих способах амебы сохраняли исходную про- светную формуй проявляли в начале микроскопии несколько пониженную двигательную активность. В ходе микроскопии амебы быстро восстанавливали свою обычную подвижность (видимо, под влиянием света и других факторов).

Ограничение роста бластоцистов и бактерий, в т.ч. кислотообразующих, содержащихся в фекалиях и способных угнетать амеб, обеспечивается добавлением в среду

измельченного рисового крахмала, инкубированием среды при неоптимальной для большинства кишечных микроорганизмов температуре (18-20°С) и относительно коротким периодом инкубации (2 месяца).

Этим же исключается возможность изменения исходной формы существования амеб и их биологических свойств в процессе инкубации,

Таким образом, предложенный способ

поддержания жизнеспособности дизентерийной амебы в значительной степени проще и экономичнее известного, не уступает ему по продолжительности сохранения жизнеспособности амеб и по их концентрации

в питательной среде, прост в осуществлении и широкодоступен. Рекомендуемый способ может использоваться для транспортировки исследуемого материала, а также в учебных и научных целях.

Формула изобретения

Способ поддержания жизнеспособности Entamoeba hlstolytica, включающий посев суспензии фекалий в питательную среду Павловой с последующим инкубированием,

отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, посев осуществляют в нестерильных условиях и в нестерильную - среду, инкубирование проводят при температуре 18-20°С в течение двух месяцев,

причем через каждые 3-4 суток в инкубационную среду добавляют одну петлю нестерильного измельченного рисового крахмала.

Использование: паразитология. Сущность изобретения: поддержание жизнеспособности Entamoeba histolytlca, заключающееся в посеве суспензии фекалий в питательную среду Павловой о нестерильных условиях, в нестерильную среду, инкубирование проводят при температуре 18-20°С в течение двух месяцев, причем через каждые 3-4 сут в инкубационную среду добэвля-ют одну петлю нестерильного измельченного рисового крахмала.