Способ дифференциации пневмококка от зеленящего стрептококка Советский патент 1992 года по МПК C12N1/00 C12Q1/00 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно, к способу дифференциации пневмококков от других cvi-гемолитических (зеленящих) стрептококков.

Известен способ дифференциации пневмококков от других зеленящих .- стрептококков, при котором исследуемые штаммы засеваются на агар с 5% крови барана с одновременным подсевом стафилококка, образующего неполный гемолиз бараньих эритроцитов, i После 20-24 часов инкубации при 37°С учитывается характер гемолиза вокруг стафилококка, в секторе роста пневмококка происходит усиление гемолиза, в отличие от других об-гемолитических стрептококков, не изменяющих характер гемолиза.

Однако, предложенный способ имеет ряд существенных недостатков:

-около 10 штаммов Streptococcus pneuraoniae не дают зоны усиления гемолиза в первые 24 часа;

-необходима свежая баранья кровь, что представляет определенные трудности для большинства практических лабораторий. Применение эритроцитов человека снижает эффективность ро 5-10%;

-- требует постоянного поддержания музейных штаммов гемолитического стафилококка, на что дополнительно расходуются питательные среды, в том числе и дефицитная кровь.

Цель изобретения - упрощение и ускорение дийферёнциации пневмококков от других зеленящих стрептококков.

Это достигается тем, что посев исследуемых колоний производят на полу- жидкую питательную среду для контроля стерильности следующего соста- ва, г/л:

Х| Ч

00

-А

VJ

Ч)

20

25

Ферментативный гидролизат казеина15

Витаминный препарат

ЭКД5 5

Натрий хлористый 6,4

Глюкоза медицинская 5,0

Тиогликолят натрия 0,5

Цистеин дигидрохлорид 0,75

Агар порошкообразный 0,6 Q

Натрий углекислый 0,5-0,95 Данная среда является коммерческим препаратом и выпускается в виде сухого порошка Предприятием Центрального НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечни- g кова под названием: Среда питательная, для контроля стерильности, сухая.

Через 18-24 ч посевы просматривают. Из всех видов зеленящих стрептококков только для Str. pneumoniae характерны следующие особенности: рост наблюдается в виде локального, гомогенного слабого помутнения среды, форма которого напоминает стрелу, расположенную острием вверх, толщиной до 2 мм и длиной от 4 мм и более. Зона роста четко ограничена, равномерной оптической плотности. Несколько таких стрел могут соединяться у зо основания в нижней части пробирки, образуя сплошную зону помутнения среды в виде облака, с четкой локализацией, такой же консистенции, как и у стрел и также без каких-либо флуктуации оптической плотности. Рост других видов oi-гемолитических стрептококков в данной среде отличается либо за счет роста в виде облака при отсутствии стреловидного роста, либо за счет наличия в зоне роста оптически плотных включений (размерами от мельчайших, на грани видимости, до крупных - диаметром до 2-3 мм и более) .

Пример. Приготовленную согласно инструкции завода-изготовителя коммерческую среду разливают по пробиркам по 5-7 мл. Отобранные колонии, подозрительные на пневмококк, засе35

40

45

на чувствительность к желчи и в реакции аглютинации со специфической сывороткой. Штаммы, способные образовывать в зоне роста различного диаметра оптически плотные структуры, а также те, рост которых в данной среде проходит в виде облаковидного помутнения без наличия стреловидных выростов исключают из дальнейших анализов.

Автором было испытано 1 34 эталонных и свежевыделенных штаммов пневмококка, а также эталонных и свежевыделенных штаммов микроорганизмов следующих видов: Str.mitis, Str.sanquis, Str.nutans, Str.anginosus в общем количестве 347 экземпляров. Посев про- изводился параллельно на две пробирки. Ни в одном случае характер роста микроорганизмов, не принадлежащих к виду Str.pneumoniae не соответствовал вышеописанному. В то же время из 134 штаммов пневмококка лишь у семи (5%) рост в одной из двух пробирок не был характерен для данного вида, что проявилось отсутствием стреловидного роста.

Таким образом, предлагаемый способ дифференциации пневмококка от золотистого стрептококка путем пересева подозрительных колоний на среду для контроля стерильности существенно суживает поиск пневмококковых культур, обладает высокой чувствительностью, достаточно экономичен, не требует дополнительных средств,, приборов и реактивов. В частности, по сравнению с прототипом, данный способ более г чувствителен, исключает необходимость поддержания музейных культур гемолитического стафилококка и наличие свежей бараньей крови. Приготовление питательной среды на основе комерческо- го препарата не требует больших затрат времени, а готовая и разлитая по пробиркам среда способна длительное время (до двух месяцев) сохраняться в холодильнике при 4°С. Способ может широко использоваться в практических лабораториях при этиологической расвают петлей в толщу среды на глубину50 шифровке заболеваний, обусловленных

пневмококками.

3/4 заполненного объема от верхнего края среды. После 18-24 часов инкубации при 37°С посевы просматривают. Рост культуры в виде характерного

стреловидного помутнения среды одно- 5 От зеленящего стрептококка путем породной оптической плотности свидетель- сева исследуемого материала на элек- ствует о росте пневмококка. Такие тивную среду, инкубирования с после- культуры микроскопируют, испытывают дующей идентификацией культур по хаОормула изобретения Способ дифференциации пневмококка

0

5

5

Q

g

о

35

40

45

на чувствительность к желчи и в реакции аглютинации со специфической сывороткой. Штаммы, способные образовывать в зоне роста различного диаметра оптически плотные структуры, а также те, рост которых в данной среде проходит в виде облаковидного помутнения без наличия стреловидных выростов исключают из дальнейших анализов.

Автором было испытано 1 34 эталонных и свежевыделенных штаммов пневмококка, а также эталонных и свежевыделенных штаммов микроорганизмов следующих видов: Str.mitis, Str.sanquis, Str.nutans, Str.anginosus в общем количестве 347 экземпляров. Посев про- , изводился параллельно на две пробирки. Ни в одном случае характер роста микроорганизмов, не принадлежащих к виду Str.pneumoniae не соответствовал вышеописанному. В то же время из 134 штаммов пневмококка лишь у семи (5%) рост в одной из двух пробирок не был характерен для данного вида, что проявилось отсутствием стреловидного роста.

Таким образом, предлагаемый способ дифференциации пневмококка от золотистого стрептококка путем пересева подозрительных колоний на среду для контроля стерильности существенно суживает поиск пневмококковых культур, обладает высокой чувствительностью, достаточно экономичен, не требует дополнительных средств,, приборов и реактивов. В частности, по сравнению с прототипом, данный способ более г чувствителен, исключает необходимость поддержания музейных культур гемолитического стафилококка и наличие свежей бараньей крови. Приготовление питательной среды на основе комерческо- го препарата не требует больших затрат времени, а готовая и разлитая по пробиркам среда способна длительное время (до двух месяцев) сохраняться в холодильнике при 4°С. Способ может широко использоваться в практических лабораториях при этиологической распневмококками.

От зеленящего стрептококка путем посева исследуемого материала на элек- тивную среду, инкубирования с после- дующей идентификацией культур по хаОормула изобретения Способ дифференциации пневмококка

5 17781796

рактеру роста, отличающий- посев осуществляют в толщу среды и с я тем, что, с целью упрощения и- при стреловидном оптически однородном ускорения способа, в качестве элек- помутнении среды культуру идентифици- тивной среды используют среду пита- . 5 руют как пневмококк, а при отсутствии тельную для контроля стерильности, такого как зеленящий стрептококк.

Использование: медицинская микробиология, диагностика, дифференциация пневмококков от других&Ј-гемолитических (зеленящих) стрептококков. Сущность изобретения: в качестве среды для дифференциации используется полужидкая питательная среда для , . контроля стерильности следующего состава, г/л: ферментативный гидролиэат казеина 15, витаминный препарат ЭКД 5; натрий хлористый б, глюкоза медицинская 5,0; тиогликолят натрия 0,5; цистеин дигидрохлорид 0,75{ агар порошкообразный 0,6; натрий углекислый 0,5-0,95. Среда является коммерческим препаратом и выпускается в виде сухого порошка. Пневмококки дифференцируют по особенному для них стреловидному, однородной оптической плотности характеру роста в толще . данной среды.