Способ профилактики болезни Гамборо Советский патент 1993 года по МПК C12N7/00 A61K39/12 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к вакцинам против болезни Гамборо и к способам их применения.

Целью изобретения является получение высокоиммуногенной, эффективной, безвредной вакцины, а также обеспечение высокого уровня иммунитета в условиях массового заражения птиц и уменьшения трудоемкости процесса вакцинации.

Для достижения цели в качестве вакци- онного штамма используют штамм ВНИ- ВИП. представляющий собой авирулентный генетически однородный ьи- русный материал, легко культивируемый в культуре клеток куриных фибробластов с высокой биологической активностью (титр вируса105 5-10б1°ТЦД50/мл).ДЛЯ

профилактики болезни Гамборо птицу иммунизируют путем дачи вакцины с водой в дозе105-104 °ТЦД50/мл.

На первом этапе работы берут 1-2 ампулы лиофилизированного штамма ВНИВИП, добавляют в них по 2 мл стерильного физиологического раствора. Полученную суспензию используют для заражения 1,5-литровых матрацов с 24-часовым монослоем культуры куриных фиб- роблзстов из расчета 0,01 ТЦДю/нл вируса на клетку. В контроле оставляют матрацы с незаряженной культурой клеток. Затем матрацы помещают в термостат при температуре +37,5-38°С в течение 36-48 часов Матрацы с зараженным монослоем трехкратно замораживают и размораживают по мере поступления цитопатического действия вируса в виде дегенерации и округления клеток и появления в клетках мелкой зернистости без нарушения целостности монослоя.

Вируссодержащую культуральную жидкость сливают в одну емкость для контроля на стерильность по общепринятой методике в соответствии с ГОСТом 28085.-89 и биологическую активность путем титрации на культуре куриных фибробластов. Для титрования берут 7 стерильных пробирок и разливают стерильный физиологический раствор по 9 см3. Из исходного разведения вируса (1:10) берут 1 мл, вносят в первую пробирку, тщательно перемешивают и 1 мл полученного раствора переносят в следующую пробирку. Путем последовательного

Ё

00

ю

Jb

Јь

со

разведения заполняются все пробирки. Для каждого разведения используют отдельную пипетку.

Вирус каждого разведения в объеме 0,2 мл вносят о 4 пробирки с культурой куриных фибробластов, устанавливают в штативах под углом 5°-7° в неподвижном состоянии при температуре 37,5 - 38°С на 1 час для контакта вируса с культурой клеток.

Затем в каждую пробирку вносят под- держивающую среду по 1 мл и инкубируют при температуре 37.5 - 38°С в течение 7 суток.

Четыре пробирки с незараженной куль

турой клеток оставляют для контроля.

Цитоанатомический эффект вируса учитывают под микроскопом в течение 7 суток и высчитывают тканевую цитопатическую

дозуВируссодержащую культуральную жид-

кость с титром не ниже 105t5-106 ° ТЦД50/мл используют для лиофилизации с обезжиренным молоком.

Лиофилизировэнная вакцина хранится при температуре +4° -8°С в течение от 1 года до 1,5 лет.

Пример 1. Эффективность вакцины при введении цыплятам различных доз.

Опыты проводились на 14-дневных СПФ-цыплятах с использованием вакцины активностью не ниже 101 ТЦДэд/мл. Предварительно были приготовлены десятикратные разведения вируса и каждом его разведением были иммунизированы по 10 СПФ-цыплят. Вакцину выпаивали с водой. В контроле использовали 10 невакциониро- ванных СПФ-цыплят. Иммуногенная активность вируса в разных разведениях оценивали по результатам контрольного заражения цыплят в опытных и контрольных группах через 14 суток после введения вакцины. Опыт проводили трижды (табл.1).

Из данных таблицы следует, что 100% иммунитет создается при выпаивании вакцины СПФ-цыплятам в дозе 103 ТЦДвд/мл. Однако учитывая, что при вакцинации цыплят с пассивным иммунитетом требуется наличие некоторого запаса вируса, в качестве иммунизирующей дозы определили не менее - 1033 ТЦДсо/мл.

П р и м е р 2. Эффективность вакцины от способа ее введения.

Было сформировано три подопытных группы по 15 голоо в каждой и одна контрольная группа. Опыт проведен на 14-днев- ных СПФ-цыплятах и для иммунизации цыплят использовалась одинаковая доза вакцины (1035 ТЦД50/мл). В первой группе цыплятам оакцину вводили с водой, GO второй - интраназяльно. в третьей - внутримы

0

5

0

5

0 5 0

5 0

5

шечно. Контрольное заражение цыплят в опытных и контрольной группах проводили через 14 суток после вакцинации путем ин- траназального введения вирулентного вируса болезни Гамборо (табл.2).

Из данных, представленных в табл. 2. следует, что при введении вакцины в одинаковой дозе СПФ-цыплят наиболее высокий процент сохранности обеспечивается при выпойке вакцины с водой.

П р и м е р 3. Эффективности вакцины от уровня материнского иммунитета цыплят.

Опыты проведены на цыплятах разного возраста, доставленных из неблагополучного птицехозяйства по болезни Гамборо. Предварительно в каждой возрастной группе цыплят определили уровень материнских антител. Для этого у пяти цыплят в каждой группе стерильно брали кровь, готовили общую пробу сыворотки и исследовали в реакции нейтрализации в культуре клеток куриных фибропластов. Цыплят всех групп вакцинировали против болезни Гамборо в дозе 1033 ТЦДбо/мл путем выпойки и по 15 невакцинированных голов использовали в качестве контроля.

Через 14 суток после вакцинации цыплята во всех группах были заражены вирулентным штаммом вируса болезни Гамборо (табл.3).

П р и м е р 4. Сравнительная оценка эффективности разных вакцин от дозы ее введения.

В опытах использованы вакцины производства Франции из штамма Люкерт. производства ГДР и опытные образцы вакцины из штамма ВНИВИП.

При проверке активности вируса в указанных вакцинах, титр биологической ак- тивности во всех случаях составил не ниже 10 6ТЦД5о/мл.

Изучение эффективности указанных вакцин проводили на СПФ-цыплятах 14- дневного возраста. Для этого было сформировано 13 групп цыплят по 15 голов в каждой. Цыплят с 1 по 4 группы вакциниро- с вали вакциной производства ГДР в дозе 10 2, . и 10 3ТЦЦ5о/мл, соответственно.

Вакцину производства Франции испытывали в аналогичных дозах на цыплятах 5. 6, 7 и 8 групп.

Вакциной из штамма ВНИВИП выпао

ивали цыплят в 9 по 12 группах в дозах 10 , , Ю. 10 5ТЦД50/мл соответственно.

Цыплята в 13 группе не вакцинировались, их использовали в качестве контроля, Оценку эффективности вакцин проводили по результатам контрольного заражения

цыплят осех групп через 14 суток после их вакцинации (табл.4).

Результаты контрольного заражения показывают, что. при вакцинации цыплят вирулентным штаммом в дозе от 10 до 10 ТЦД50/МЛ. независимо от происхождения штамма, обеспечивается 100-процентная защита птиц. Наиболее высокую иммуно- генную активность при введении вируса даже в минимальных дозах, оказывала вакцина, изготовленная из штамма ВНИ- ВИГГ.

П р и м е р 5. Эффективность вакцин против болезни Гамборо от способа их введения.

Для сравнения испытывали три метода введения вакцин: выпойку, иитраназальный и внутримышечный. Доза введения препарата для всех групп была одинаковая. Было сформировано 9 подопытных и одна конт- рольная группа (табл.5).

Эффективность применения оакцин производства ГДР и ВНИВИП при различных методах введения оказалась одинаковой, но значительно выше по сравнению с французской вакциной при их интраназаль- ном и внутримышечном введении.

П р и м е р 6. Эффективность озкцин при иммунизации цыплят разного возраста.

Иммунизацию проводили с использова- нием трех вакцин на цыплятах 7-, 14-, 21-, 28-дневного возраста. Вакцину в одинаковых дозах давали с водой. Через 14 суток после вакцинации цыплят в подопытных и контрольных группах заражали вирулент- ным вирусом болезни Гамборо. Результаты этих исследований представлены о табл.6.

Из данных, представленных в таблице, следует, что, по своим иммуногенным свойствам при введении цыплятам с материн- скими антителами, вакцина, изготовленная из штамма ВНИВИП, не уступает препарату, выпускаемому в ГДР. и значительно превосходит вакцину Фракции.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о возможности изготовления вакцины из штамма ВНИВИП для предупреждения заболевания у цыплят, вызываемого вирусом болезни Гамборо.

Производственные испытания плкцины из штамма ВНИВИП пропедоиы по разрешению Главного управления гчмеринэрни Гасагропрома РСФСР (№ 44 109/64 от 22.01.9Qr) в неблагополучном по болезни Гамборо птицехозяйстве Рязанской области. Птицу вакцинировали согласно разработанному наставлению по применению. Было привито и ревакцинировано более 5 млн. птиц.

Результаты испытаний показали, что живая вакцина против болезни Гамборо из штамма ВНИВИП способствует повышению сохранности поголовья бройлеров на 0,1%, увеличению живой массы одного бройлера на 0,4 г и уменьшению затрат кормов на 0,07 кг на 1 ц привеса. Экономический эффект с учетом затрат на применение вакцины составил 26331 руб.

Основываясь на результатах лабораторных и производственных опытов по изучению нммуногенных свойств живой вакцины лропш болезни Гамборо. а также се безвредности, можно заключить, что предлагаемая вакцина при ее выпойке безвредна и обладает высокой иммуиогенностыо. Вакцина из штамма ВНИВИП может быть использована в качестве средства специфической профилактики болезни Гамборо птиц в неблагополучных птицехозяйст- вах.

Формула изобретения

Способ профилактики болезни Гамборо, включающий введение в организм цыплят вакцины, состоящей из штамма вируса болезни Гамборо и обезжиренного молока, отличающийся тем, чго, с целью повышения уровня иммунитета и уменьшения трудоемкости вакцинации, в качестве штамма вируса используют штамм ГКВ № 2200 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Штамм ГКВ № 2200 с

титром 1055- 10ад ТЦПзо/мл50

Обезжиренное молоко50

а впедение осуществляют путем выпаивания вместе с водой в дозе 103 °-10 0ТЦД so/мл.

Таблица 1

Использование: ветеринария, вирусология Способ профилактики болезни Гамборо включает использование вакцины, изготовленной на основе штамма вируса ГКВ Nfe 2200 и содержащей обезжиренное молоко в равном соотношении. Введение вакцины цыплятам осуществляют путем выпаивания вместе с водой в дозе 10 - ТЦДво/мл б табл

Эффективность вакцины из штамма ВНИВИГГ в зависимости от дозы введения

Эффективность вакцины от способа ее введения

Таблица 2

Таблица 3 Эффективность вакцины от уровня материнского иммунитета

Эффектионость вакцин против болезни Гамборо от способа введения

Таблица 4

Таблица 5

Оценка эффективности вакцин против болезни Гамборо при иммунизации цыплят разного возраста

Продолжение табл.5

Таблица 6