Способ дифференциальной диагностики вирусного гепатита и механической желтухи Советский патент 1993 года по МПК G01N33/68 

; Изобретение относится к медицине, а

именно к клинической биохимии, и может

I быть использовано для дифференциальной

i. диагностики вирусного гепатита В и меха| нической желтухи.

Целью изобретения является повыше ние точности способа.

; Поставленная цель достигается тем, что

. определение активности ЛДГ в эритроцитах

проводят по методу Нордмана и соавт.

Способ осуществляют следующим образом. У больного с желтухой берут кровь в : пробирку с антикоагулянтом. Кровь центри- ; фугируют и удаляют плазму. Из осадка эрит- роцитов готовят 20% гемолизат. i В субстратную смесь, содержащую 0,2 мл 0,02 М НАД (молекулярный вес 663,45) и 1,0 мл 0,02 М лактата кальция на 0.05 -М боратном буфере рН 8,5. добавляют 0,2 мл

20% гемолизата эритроцитов и 1 мл 0,0012 М раствора нитросинего тетразолия (М.в, 816). приготовленных на дистиллированной воде.

Для приготовления боратного буфера растворяют 1 г буры в 100 мл воды и доводят рН до 8,5 с помощью 0,1 н HCI.

При построении калибровочной кривой в качестве растворителя стандартной навески формазана используют ацетон, который также используется для экстрагирования образовавшегося в опытных пробах формазана и в качестве контроля при спектрофо- тометрировании.

Активность ЛДГ в эритроцитах выражают в мкмоль/ч-г гемоглобина, т.е. в единицах, отражающих количество мкмолей формазана, образовавшегося в ходе химической реакции в пробе объемом 1 мл за 1 ч

00

СлЭ

ч го

CJ

о

инкубации в расчете на 1 г гемоглобина, содержащегося в пробе. Количество гемоглобина в гемолизате определяли по методу -И.С.Лугановой и М.Н.Блинова.

Положительный эффект способа подтверждается результатами обследования 3-х групп больных: с острым вирусным гепатитом В и механической желтухой различного генеза при желчно-каменной болезни и при опухолях поджелудочной железы. Исследовали активность ЛДГ в сыворотке крови по известной методике, описанной в работе А.В. Чижевик, В.К.Кухта, а также активность фермента в эритроцитах по описанной выше методике.

Данные сравнительного анализа актив- ности ЛДГ в сыворотке крови и эритроцитах, определенных различными методами представлены в таблице, из которой следует, что различие между контрольной группой здоровых лиц и больными, а также между .больными с вирусным гепатитом и

0

5

0

желчно-каменной болезнью не достоверно по показателю активности ЛДГ, определенному известным способом. Предлагаемый способ определения активности ЛДГ в эритроцитах напротив выявляет достоверную разницу данного показателя у больных при вирусном гепатите и механической желтухе. Формула изобретения Способ дифференциальной диагностики вирусного гепатита и механической желтухи, включающий определение активности ЛДГ в крови, отличающиеся тем, что, с целью повышения точности способа, проводят определение активности фермента в 20%-ном гемолизате эритроцитов по образованию формазана в НАД-зависимой реакции с использованием субстратов лактата кальция и нитросинего тетразолил и при значении этого показателя более 9,16 мкмоли/ч.г гемоглобина диагностируют вирусный гепатит В, а ниже этого значения - механическую желтуху.

При м-е.ч а н и е. I - метод Хилла и соавт., II - модифицированный метод Нордмана и соавт. В скобках указано число больных, - указывает на достоверность различий по отношению к контролю.