Способ прогнозирования затяжного течения сальмонеллеза Советский патент 1993 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине и t асается способов диагностики инфекционных заболеваний.

Целью изобретения является повышение точности и надежности способа прогнозиро- t ания затяжного течения сальмонеллеза.

Эта цель достигается оценкой функционального состояния лимфоцитов перифери- -еской крови больных сальмонеллезом при помощи реакции термозависимой лимфоци- тотоксичности в двух режимах - холодовом (три +15°С) в тепловом (при +37°С) под воз- Действием сыворотки крови больных, разведенной в 2-64 раза.

Использование данного предложения 4тало возможным благодаря впервые выявленной авторами заявки опытным путем закономерности, заключающейся в том, что, в случае затяжного течения сальмонеллеза реакция лимфоцитотоксичности резко положительна (20% погибших лимфоцитов и выше) в одном или нескольких разведениях. При этом лимфоцитотоксичность может проявляться как в холодовом, так и в тепловом режиме или в обоих режимах одновременно. В то же время при благоприятном прогнозе заболевания (острое циклическое течение) реакция термозависимой лимфоцитотоксичности отрицательна или слабоположительна (1-5%).

Необходимость исследования реакции лимфоцитотоксичности в двух режимах и 6

со со

XJ К) 00

XI

разведениях в каждом из них обусловлена тем, что эта реакция может быть, как показано авторами заявки опытным путем, резко положительна лишь в одном каком-то разведении одного из режимов, а в остальных - отрицательна или слабо положительна.

Способ осуществляется следующим образом. Сыворотку крови больного сальмо- иеллезом, взятую о остром периоде заболевания, разводят средой 199 в концентрациях 1/2. 1/4, 1/8, 1/16. 1/32 и 1/64. Аутологические лимфоциты выделяют в градиенте плотности фикол-верографина (с удельной плотностью 1,076). инкубируют с эутосывороткой во всех разведениях в концентрации 2 млн клеток/мл в течение 40 мин. Инкубация проводится при температуре +37°С (тепловой режим) и +15°С (холодо- вой режим), после чего в пробирки добавляется комплемент, приготовленный из стандартного коммерческого сухого комплемента, предназначенного для постанов- .ки реакции связывания комплемента (РСК). После добавления комплемента инкубация продолжается при тех же температурных режимах в течение 3,5 ч. Затем производится суправитальное окрашивание лимфоцитов трилановым синим и в камере Горяева подсчитывается количество клеток, нежизнеспособных вследствие лимфоцитотокси- ческого действия сыворотка крови больного, выражаемое в % отношении к общему числу лимфоцитов..

При наличии отрицательной или слабоположительной (2-5%) реакции лимфоците- токсичности сыворотки больного дают заключение о малой вероятности развития затяжного течения сальмонеллеза (менее 5%). Резко положительная (20% и более) реакция лимфоцитотоксичности. вне зависимости от того, регистрируется она в тепловом (+37°С), холодовом (+15°С}, или в обоих режимах одновременно, свидетельствует о высокой вероятности формирования затяжного течения сальмонеллеза. При этом более высоки показатели лимфо- токсичности, и чем в большем числе разведений они выявляются, тем больше вероятности формирования затяжного течения сальмонеллеза.

В связи с этим при положительной реакции лимфоцитотоксичности сыворотки необходимо осуществлять коррекцию лечения, в частности, назначать препараты имунно модулирующего действия, что способствует улучшению прогноза.

При неопределенных результатах реакции (от 6% до 19%) необходимо ее повторение в динамике через 3-5 дней, при этом в

подавляющем большинстве случаев, как показывает клинический опыт, она снижается до 5% или повышается до 20% и более, что дает основание для заключения о вероятно5 сти затяжного течения сальмонеллеза,

В клинике инфекционных болезней Во- рошиловградского медицинского института проведено сопоставление эффективности существующего способа (прототип) и предлатаемого способа прогнозирования затяжного течения сальмонеллеза. Полученные результаты сведены в табл.1.

Как следует из таблицы, предлагаемый способ прогнозирования затяжного течения

5 сальмонеллеза имеют преимущества перед существующим (прототип), поскольку его информативность по % диагностики выше на 21,7 ± 1,5% Р 0,05). При этом его результаты хорошо воспроизводимы и получа0 ются уже через 4,5 ч от момента начала постановки реакции, что весьма важно для клинической практики.

При предлагаемом способе прогнозирования % диагностики достоверно выше,

5 чем при существующем, что свидетельствует о достижении цели изобретения - повышения точности и надежности способа прогнозирования затяжного течения сальмонеллеза.

0 Приме р. Больная К., 65 лет, пенсионерка. Страдает атеросклерозом,гипертонической болезнью, хроническим гипоацидным гастритом, холециститом, колитом. Заболела остро, беспокоила

5 тошнота, многократная рвота, обильный зловонный зеленоватого цвета стул с примесью слизи, боли в животе, слабость, повышение температуры до 38,5°С. Заболевание связывает с употреблением в

0 пищу несвежей колбасы. Клинически заподозрен сальмонеллез. Диагноз подтвержден бактериологически выделением из кала и промывных вод желудка возбудителя - сальмонеллы тифимуриум. Лечение про во5 дилось солевыми растворами, поливитаминами, детоксицирующими препаратами. Состояние больной улучшилось, температура нормализовалась на 3 день лечения, прекратилась тошнота и рвота, появился

0 аппетит. Тем не менее сохранялся неустойчивый стул, повторно из кала выделена сальмонелла. Это заставило подумать врача о возможности формирования затяжного течения сальмонеллеза. С целью уточнения

5 прогноза заболевания проведены иммунологические исследования. Исследование кортизолрезистентной популяции лимфоцитов (способ-прототип) дало неопределенные результаты. Исследована реакция

термозависимой лимфоцитотоксичности.

При этом получены показатели, приведен- |ные в табл.2.

Таким образом, в тепловом режиме получена резко положительная реакция лимфо- цитотоксичности в разведениях 1/8 и 1/16, положительная в разведениях 1/4, в то же время в холодовом режиме реакция была лишь слабоположительной. Положительная реакция лимфоцитотоксичности дала основание для прогнозирования затяжного тече- ния сальмонеллеза у больной К., что в дальнейшем подтвердилось при клиническом наблюдении. Дальнейшее лечение в связи с этой особенностью клинического течения заболевания включало иммуномоду- ляторы. Наступило выздоровление. I Использование предлагаемого способа позволяет повысить точность прогнозирования затяжного течения сальмонеллеза и, следовательно, индивидуализировать про- ведение лечения с учетом предполагаемых Iособенностей клинического течения. Спо- соб технически не сложен, не требует спе- |циального оборудования и дефицитных i реактивов и может осуществляться в уело-

виях диагностических лабораторий больниц и других учреждений практического здравоохранения.

Формула изобретения Способ прогнозирования затяжного течения сальмонеллеза, включающий иммунологический анализ крови, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точности способа, пробу крови у больного берут в остром периоде заболевания, пробу делят на две части, каждую часть разводят средой 199 в соотношении 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, в каждое разведение добавляют ауто- лимфоциты в концентрации 2 млн клеток в 1 мл с последующей предварительной инкубацией в течение 40 мин одной части пробы при 15°С, а другой - при 37°С, затем в каждое разведение добавляют комплемент в стандартной концентрации с последующей инкубацией в течение 3,5 ч и определением процента жизнеспособных аутолимфоцитов и при значении этого показателя 20% и выше в любом из разведений прогнозируют затяжное течение сальмонеллеза.

Таблица 1

Способ прогнозирования течения с альмонеллеза. Использование: медицина, касается способов диагностики и про- гнозирования течения инфекционных заболеваний. Цель: повышение точности способа. Сущность изобретения: у больного в остром периоде заболевания берут пробу крови, пробу делят на две части, каждую часть разводят средой 199 в соотношении 1:2,1:4.1:8, 1:16,15:2.1:64. в каждое разведение добавляют аутолимфоциты в концентрации 2 млн. клеток на 1 мл с последующей предварительной инкубацией в течение 40 мин одной части пробы при 15°С, а другой - при 37°С, а затем в каждое разведение добавляют комплемент в стандартной концентрации с дальнейшей инкубацией в течение 3,5 ч и определением % жизнеспособных аутолимфоцитов и при значении этого показателя 20% и выше в любом из разведений прогнозируют затяжное течение сальмонеллеза. 2 табл. СО с

Изученные показатели

Количество обследованных больных Результаты реакции положительны: предполагается затяжное течение сальмонеллеза

Из них фактически сформировалось затяжное течение сальмонеллеза % совпадения ожидаемого и фактического результатов

Результаты реакции отрицательны - предполагается отсутствие затяжного течения

Из них фактически затяжное течение сальмонеллеза отсутствовало Сформировалось затяжное течение сальмонеллеза

% совпадения ожидаемого и фактического результатов

Всего случаев формирования затяжного течения сальмонеллеза В том числе возникновение затяжного течения совпало с прогнозом Ложноположительные результаты Ложноотрицательные результаты Процент диагностики

Существующий способ . (прототип)

Предлагаемый способ

216

46

31

67-4%

168

163

5

97,0% 36

1(86,1%)

15

(13.9%) 0,8 ±1.9%

,01

216

37

33

89,2%

179

176

3

98,3% 36

33,(91,6%)

4

3 (8.4%) 82,5±2,2%

Та блица 2