Способ хранения ларвального альвеококка Советский патент 1993 года по МПК C12N1/00 

ve

Vw

с. С

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской паразитологии, и может быть использовано для определения дегенерации длительно пассируемого на лабораторных животных мзолята ларвального альвеолярного эхинококка (альвеококка).

Поддержание штамма ларвального альвеококка осуществляют путем внутрибрю- шинного пассирования зародышевых элементов альвеококка (протосколексов, мелких ацефалоцист) на лабораторных животных одного вида 1, 2. Для этой цели обычно используют хлопковых крыс, реже- монгольских песчанок. От животных, на которых поддерживается штамм, ларвоцисты используются для заражений животных других видов, на которых проводятся различные экспериментальные исследования. Так на мышах и золотистых хомяках проводятся скрмнинг и изучение химиотерапевтических препаратов, а белые крысы являются удобными продуцентами большой биомассы паразита, специфические антигены которого используются в промышленном производстве иммуноферментной тест-системы, применяемой для диагностики альвеококкоза у человека.

Однако при длительном пассмровании личинки альвеококка на лабораторных животных (до 20-50 пассажей) появляются различные признаки дегенерации паразита. Дегенерация ларвального альвеококка приводит в конечном счете к утрате инвазион- ности его зародышевых элементов для животных, т, е. к .потере лабораторного штамма паразита. Дегенерация лабораторного штамма ларвального альвеококка сопровождается снижением антигенной активности и, следовательно, диагностической ценноста специфических паразитарных Антигенов.

В качестве прототипа избрана работа h. П. Лукашенко 3, по данным которого при внутрибрюшинном пассированми ларвального альвеококка на хлопковых крысах регрессивные изменения в ларвоцистах паразита, сопровождавшиеся образованием казеозного детрмта и аномалиями развития протоскопексов, отмечены после 17 пассажей на животных указанного вида.

Целью изобретения является восстановление морфологических и антигенных свойств длительно пассированных штаммов ларвального альвеококка.

Это достигается тем, что из ларвоцист альвеококкэ длительно пассированного штамма выделяют зародышевые элементы и.вводят их в бедренную вену животным- Р ципи нтя -11 того же видя. Г ЯЗВИР.ШИРСЯ в

легких реципиентов ларвоцисты альвеококка используют затем в качестве донорского материала для дальнейшего внутрибрю- шинного пассирования паразита на животных того же или других видов.

С помощью предлагаемого способа удалось преодолеть дегенерацию лабораторного штамма ларвального альвеококка, пассируемого на хлопковых крысах в течение 16 лет, что подтверждено результатами морфологических и иммунологических исследований ларвоцист восстановленного штамма ларвального альвеококка от 357 хлопковых крыс пяти последовательных

5 внутрибрюшинных пассажей, а также от реципиентов других видов - 1438 мышей линии СВА, 296 нелинейных белых крыс и 64 золотистых хомяков, зараженных внутри- брюшинно зародышевыми элементами вос0 становленного штамма альвеококка от хлопковых крыс-доноров.

Пример. Осуществляют сохранение дегенерирующего штамма ларвального альвеококка, пассируемого на хлопковых кры5 сах внутрибрюшинно в течение 16 лет. От двух хлопковых крыс, зараженных вхутри- брюшинно зародышевыми элементами (протосколексами и ацефалоцистами) ларвального альвеококка и вскрытых через 2

0 месяца после заражения, выделяют из брюшной полости ларводисты альвеококка. Фрагменты конгломератов ларвоцист, содержащие очаги казеозного детрита, удаляют ножницами, в из оставшихся

5 конгломератов массой 96 г выделяют зародышевые элементы. Для этого ларвоцисты . измельчают ножницами, полученные фрагменты смешивают со стерильным физиологическим раствором хлорида натрия при.

0 соотношении объемов фрагментов ларвоцист и физиологического раствора 1:10. Полученную смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 1,0 мм. Полученный фильтрат процеживают через

5 мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после 2 мин отстаивания удаляют всю надосадочную жидкость и заменяют ее свежим физиологическим раствором до конечного объема 50

0 мл. Эту операцию повторяют 5 раз до достижения полной прозрачности надосздочной жидкости. В приготовленном таким образом инокуляте определяют концентрацию жизнеспособных ацефалоцист альвеококка,

5 диаметр которых составляет 0,1-0,3 мм. В 50 мл готового к употреблению инокулята концентрация ацефалоцист составила 72 экз./мп. Заражение хлопковых крыс-реципиентов проводят внутривенно следующим образом. У животные под общим .обеэболиванием в асептических условиях рассекают кожу в пэховой области вдоль пупартовой связки на расстоянии 1,5-2,0 см, выделяют из фасций бедренную вену, в которую вводят черенок инъекционной иглы диаметром 3,3 мм, жестко соединенный с полиэтиленовым капилляром длиной 9 см и внутренним диаметром 0,5 мм. на доугсм конце которого имеется расширение для соединения с канюлей шприца. Затем в бедренную вену каждого животного в течение 1,5-2 мин вводят по 0,3 мл равномерно перемешанного предварительно инокулята. Доза инвазионного материала составила около 20 ацефа- лоцист на животное. После введения инокулята иглу извлекают из вены и к пунк- ционному отверстию прикладывают ватный тампон на 1-3 мин, затем на кожу накладывают швы, У всех 50 зараженных таким образом хлопковых крыс, вскрытых через 45 дней после заражения, из легких выделяют ларвоцисты альвеококка массой от 0,47 до 3,80 г на животное. Наиболее крупные конгломераты ларвоцист от 10 хлопковых крыс общей массой 15,8 г используют затем в качестве донорского материла для внутри- брюшинного заражения выделенными из него зародышевыми элементами 50 хлопковых крыс, 200 нелинейных белых крыс, 300 мышей линии СВА и 30 золотистых хомяков

обоего пола в возрасте 1-1,5 месяца. У всех животных реципиентов, вскрытых через 2-3 месяца после заражения, в брюшной полости выявляются живые ларвоцисты альвео- кокка, содержащие множество юных и зрелых протосколексов альвеококка. В конгломератах ларвоцист очаги казеозного детрита не выявляются, паразитарный материал обладает полноценными антигенными свойствами (таблица).

Таким образом, данное изобретение имеет следующие преимущества. Оно позволяет преодолеть дегенерацию длительно Кассируемого на лабораторных животных штамма ларвального альвеококка и обеспечивает воспроизведение полноценной по морфологическим и антигенным свойствам паразита модели инвазии, пригодной для различных экспериментальных исследований, а также для получения антигенов высокой диагностической ценности в промышленном производстве диагностической тест-системы для нужд здравоохранения.

(56)1. Canad. J, Zool. 1960; v. 38, p. 1117- 1125.

2J. Infect Dis, 1954, v. 94, p. 178-1 m.

З.Лукашенко Н. П. Альвас с коз, ivi,: Медицина. 1Ј75, 328.

Сравнение признаков штамма ларвального альвеококка, пассируемого на хлопковых крысах способами по прототипу и заявляемым

Формула изобретенияMOBi из ларвоцист длительно пассированСПОСОБ ХРАНЕНИЯ ЛАРВАЛЬНОГОного штамма выделяют зародышевые

АЛЬВЕОКОККА путем внутрибрюшинногоэлементы и вводят их в бедренную вену

пассирования на лабораторных животных,животным-реципиентам того же вида, даотличающийся тем, что, с целью восстанов- лее выделяют ларвоцисты из легких рециления морфологических и антигенныхпиентов и используют для

свойств длительно пассированных штам-внутрибрюшинного пэссирования.