СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Советский патент 1968 года по МПК C12N1/16 

Получение в нромышленности биомассы дрожжеподобных грибов Candida, растущих на парафинах нефги, известно. По основному авт. св. X 171827 известен способ производства биомассы, являющейся питательной средой для микроорганизмов, путем выращиваппя дрожжей на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода углеводородные фракции нефти, например парафины, отделения выращенных дрожжей от питательной среды, суспендирования и стерилизации полученной биомассы.

Для использования биомассы в качестве питательной среды при выращивании микроорганизмов, высокотребовательных к составу сред, например патогенных, предложено суспензию биомассы перед стерилизацией разрушать автолизом при перемещивании всей массы, после чего отделять полученный автолизат от нерастворимых белковых веществ, не усваиваемых микроорганизмами, одним из известных способов, например фильтрацией.

Автолиз следует вести в течение 24 час при 45-48° С, чтобы предотвратить развитие посторонней микрофлоры в процессе автолиза, в биомассу целесообразно вводить антисептик, например толуол.

ника углерода нефтепродукт), например парафины. Полученную биомассу отделяют от питательной среды одним из известных способов, например сепарацией, и суспендируют.

Суспензию живых дрол;жей (с содержанием 350-400 г прессованных дрожей в 1 л) направляют для автолиза в лабораторный ферментер емкостью 10 л. Серной кислотой активную реакцию среды доводят до рН 4,5, в дальнейшем этот показатель не регулируют. В ферментере поддерживают температуру 45- 48° С, а в качестве антисептика в него добавляют толуол. Автолиз ведут 24 час, каждый ча.с автолизат подвергают легкому механическому перемешиванию. Процеес автолиза нрекран ают путем кипячения автолизата в течение 1 час, затем автолизат освобождают от рыхлого осадка, например, сепарированием на лабораторной сенараторной центрифуге. Очищенный от осадка автолизат содержит следующие компоненты (з мг%):

общий азот около 500

амминный азот 340-350

пеитон-следы, азот полипеитидов 210-220

азот аминокислот 190-200.

Автолизах разводят водопроводной водой до нужной концентрации питательных веществ, доводят до кипения, подщелачивают 40%-ным раствором NaOH до рН 7,6, затем вносят 0,1% двухзамещенного фосфорнокислого натрия () и 0,5Vo поваренной соли (NaCl). Полученную среду кипятят мин после чего фильтруют через полотно.

Плотную среду готовят из жидкой добавлением 2,5Vo агар-атара. Стерилизацию проводят в автоклаве 20 мин при 120° С.

На основе такого автолизата можно получать и сухие агаровые среды путем упаривания (концентрирования) его в вакуум-выпаривателе до содержания (в мг о/о): общего азота 1200-1500, амминного азота 850-1000; пропитывания им агар-агара в соотношении 4 : 1 и последующего высущивания.

При выращивании на жидких и плотных средах, приготовленных из автолизата, разведенного в два раза, в стационарных условиях некоторых представителей тифопаратифозной и дизентерийной групп и ряда других микроорганизмов, интенсивность роста их не уступала таковой на общепринятых мясных ередах.

Пример. (Глубинное культивирование микроорганизмов с аэрацией). Выращивают щтамм Salmonella paratyphi В 50602 в 5-литровых бутылях с матерчатыми барботерами, через которые продувают 2 л воздуха в течение 1 мин. Количество опытной и контрольной среды (бульон Хоттингера в бутылях) 2 л.

Перед высевом в питательные среды вносят 0,5|)/о глюкозы и аеногаситель (оксидированное персиковое масло 1 мл масла на 1 л питательной среды). Интенсивность роста олределяют по оптическим стандартам контрольного института имени Тарасовича.

После 14 час выращивания в среде из автолизата содержалось в среднем 9 млрд, клеток в 1 мл, в бульоне Хоттингера-8 млрд, в 1 мл. При этом интенсивность роста на ней микроорганизмов не уступала интенсивности роста на бульоне Хоттиигера.

Морфологические, культуральные, биохимические и антигенные свойства микроорганизмов, выращенных на средах из автолизата Candida, не отличались от таковых у микроорганизмов, выращенных на бульоне Хоттингера.

Предлагаемая среда может быть использована во многих микробиологических производствах, например ее можно использовать вместо кукурузного экстракта в производстве кормового витаминизированного биомицина и вместо гидролизата соевой муки при микробиологическом получении р-каротина.

Себестоимость такой среды значительно ниже себестоимости сред, изготавливаемых из других белковых субстратов (мяса, рыбы, казеина и т. д.). Для промыщленности медицинской микробиологии можно использовать автолизаты Candida, выращенные на очищенных ларафинах, а для отраслей технической микробиологии, производящих продукты, не идущие в пищу человеку и животным, рациональнее использовать автолизаты , выращенных на неочищенных парафинах.

Предмет изобретения

1.Способ производства питательной среды для микроорганизмов по авт. св. Af 171827 отличающийся тем, что, с целью использования полученной среды для выращивания микроорганизмов, высокотребовательных к составу сред, например патогенных, суспензию биомассы перед стерилизацией разрущают автолизом при перемещивании всей массы с последующе, очисткой полученного автолизата от нерастворимых белковых веществ одним из известных способов, например фильтрацией.

2.Способ по п. 1, отличающийся &м, что автолиз проводят в течение 24 час при 45- 48° С.

3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что, с целью предотвращения развития посторонней микроф)лоры в процессе автолиза, в биомассу вводят антисептик,

толуол.