СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МУКОРОВЫХ И ГИФАЛЬНЫХ ГРИБОВ Советский патент 1968 года по МПК C12N1/14 C12N1/26 

Известен способ культивирования гифальных и мукоровых грибов на твердом, предварительно измельченном парафине в присутствии водной минеральной питательной среды, содержащей источники азота, фосфора, калия и магния, при аэрации среды с последующим отделением выращенных от культуральной жидкости.

Для улучшеиия условий использования нарафина в процессе культивирования и интенсификации таким путем процесса по предлагаемому способу из.мельчеиие парафина ведут до иорощкообразного состояния, а процесс культивирования осуществляют при высокой те.мпературе, предпочтительно равной 42-56°С, обеспечивающей плавление парафина.

Вводить измельченный иарафии при глубинном культивировании грибов следует двумя порциями, первую из которых вносят во время посева грибов, а вторую спустя два-три дня с начала процесса культивирования.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Готовят питательную среду, например минеральную среду Чапека, следующего состава: NaNO.j 2 г; KHgPOi 1 г; MgSOi 7П..О 0,5 г; КС1 0,5 г; FealSOi),, /НаО 10 мг; дистиллированная вода 1 л. Эту среду разливают в матрасы или колбы в зависимости от способа выращивания (глубинного или поверхиостиого)

и стерилизуют ири 0,5 атм. Причем в каждый матрас наливают 300 с.из среды, а в колбы (объемом 750 c.if5) - 500 см- среды. рН такой среды 5,2--5,5. После стерилизации в колбы

или матрасы стерильио добавляют отдельно перетопленный, взвешенный и измельченный до получения порошкообразной массы парафин. Навеска парафина для каждой колбы 4 г, для каждого матраса 3 г.

Для обеспечеиия хорошего роста грибов пеобходимо обеспечить равномерное распределение парафина в толще питательной среды.

Приготовленную с парафином среду разливают в пробирки, чашки Петри или чашки Коха и производят иглой иосев грибов, используя ири этом суспеизию еиор, смываемую основной жидкой стерильной средой из культуры на с)словом агаре.

Посевной материал выращивают в течение

двух суток прп 45, 52 и 54°С в зависимости от вида культивируемых грибов.

Выращенный посевной материал смывают основной жидкой стерильной средой с одного

косяка на иробирке на оД1т матрас или колбу, или с одной пленки в колбе. Подсчитывают конидии. После получения необходимой густоты содержимое разливают прт глубиниом способе в фермеитаторы или в колбы на качалке,

При глубинном выращивании посевиой материал расходуют из расчета на 300-400 мл 1 :идк6й среды смыв сиор из одной пробирки со скошенным агаром. Такое же количество гюсевиого материала расходуют и при иоверхпостном способе.

Продолжительность культивироваиия зависит от принятого способа выращивания, т. е. при поверхностном иять-семь, ири глубинном- семь-девять дней.

При поверхностном культивировании парафин лучше виосить вначале, так как образующаяся во время роета грибов пленка очень легко разрушаетея даже при незначительном движении среды в матрасе и затем не восстанавливается.

При глубинном способе выращивапия парафин лучще прибавлять двумя порциями: нервую половину необходимого количества - во время посева, а вторую половину - снустя два-три дня.

Ферментания ведется при температурах 45, 52 и 5б°С. Многие штаммы грибов на третийиятый день образуют нигменты.

После окончания ферментации получен 1ую биомассу промывают для освобождения от оставшегося парафина петролейным эфиром или же другим растворителем парафина. Для иарафинового гача лучше применять метилэтнлкетои или метилизобутилкетон.

Культуральную жидкость с выращенным грибом перед фильтрацией центрифугируют. Поднявшийся на поверхность жидкости иарафнн отделяют (он не содержит мицелня гриба). При фильтрации мицелий промывают водой, нагретой до 50-60°С, и оставшийся неиспользованный парафин, таким образом, переводят в жидкое состояние, что облегчит отделение его от иродуктов ферментации. Для полного удалеиия парафина мицелий иа фильтре промывают гексаном и отфильтровывают через капроновый фильтр.

1э процессе ферментации в зависимости от требований, предъявляемых к получаемому продукту, 1(1чио регулировать рН, который обычно иовышаетея от 5,2-5,5 до 6,5-7,5. Для этого применяют КОН, NaOH или аммиак.

Для ускорения процесса можно использовать стимуляторы - сиородрожжевой автолизат, экетракт липидов и другие широко известные вещества.

Для культивирования применяют грибы с высок:им темиературным оптимумом, выделенные по специальной методике из почв и рубца рогатого скота. К пим относятся Aspergillus oryzae, Aspergillus fumigalus, Mueor pusillus, Aspergillus niger, Rhizopus orysae, Absidiu corymbifera, Absidia ramosa, Mucor hiemalis, Musor raccmosus, Mucor eircinelloides.

Предмет изобретения

1.Способ культивирования мукоровых и гнфальных грибов иа твердых, иредварительно измельченных иарафинах, в приеутствни водной минеральной пнтательной среды, еодержащей источники азота, фосфора, калия и магния, и при аэрации среды, отличающийся тем, что, с целью улучшения условий использования парафина в ироцессе культивирования и интенсификации таким образом процесса, измельчение парафинов ведут до порошкообразного еостояния, ироцесс культивирования осуществляют при высокой температуре, обеспечивающей иереход нарафииа из твердого в жидкое еостояние.

2.Способ но п. 1, отличающийся тем, что температура культивирования равна 42-56°С.

3.Сноеоб по п. 1, отличающийся тем, что, ири глубинном культивировании грибов измельченный парафин вводят в нитательную среду двумя равными порциями: первую во время посева грибов, а вторую енустя два-три дня с начала нроцссса культивирования.