СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГЛУТАМИНОВОЙ И L-ПИРРОЛИДОН- КАРБОНОВОЙ АМИНОКИСЛОТ Советский патент 1969 года по МПК C12P13/14 C12N1/38 C12P13/04 

Известен способ получения L-глутаминовой кислоты путем культивирования продуцента ее Micrococcus glutamicus на жидкой углеводноминеральной питательной среде с добавлением биотина.

Предлагаемый способ дает возможность увеличить выход и концентрацию L-глутаминовой кислоты. Для этого в процессе выращивания продуцента в питательную среду добавляют антибактериальный агент, замедляющий рост продуцента, например хлористую ртуть, фенилацетатную ртуть, пенициллин.

Сущласть способа состоит в следующем.

Продуцент L-глутаминовой и L-пирролидонкарбоновой аминокислот культивируют на жидкой углеводно-мицеральной питательной среде с добавлением биотина в количестве, большем оптимального, и антибактериальных реагентов, замедляющих рост продуцента, например хлористой ртути, фенилацетатной ртути, пенициллина. Реагенты, замедляющие рост, должны способствовать повышению активности сверхоптимального количества биотина; контролировать ненужный рост мицеллы и образование побочных продуктов, вызванных биотином, так, чтобы поддержать метаболическое течение преимущественно в направлении накопления L-глутаминовой кислоты. Вместо непосредственно af-биотина могут быть

использованы любые вещества, проявляющие микробиологическую активность, присущую d-биотину, например, гомологи биотина, такие, как L-дестиобиотин и d, L-биотиновый тионил,

диаминопелартокическая кислота и ей подобные. с -Биотиц или его гомологи вводят в количестве от до 1 мг/л в зависимости от условий брожения, а диаминопеларгоцическую кислоту - в количестве от одного до нескольких сот миллиграммов на 1 л. cf-Биотин и ему подобные вещества добавляют в питательную среду в период от 2 до 24 час после начала брожения, сразу или по частям. Реагенты, замедляющие рост продуцента, добавляют в питательную среду в количестве от до 0,5 мг/мл. Культивирование проводят при аэрации среды, рН 6-9 и температуре 33°С.

При м е р. Брожение начинается в водной питательной среде следующего состава, %: осахаренная жидкость крахмала (на основе редуцирующего сахара)40,0 фосфат моноаммония0,1 „ диаммония0,1 Сульфат калия 0,3 „ аммония 0,2 ,, магния 0,05 „ марганца 0,004 „ железа 0,002

мочевина0,5

биотин, мг1л10 з

вода, млдо 3000

2,25 л этой водной питательной среды наливают в нятилитровый бродильный чан. Среду регулируют на рН 7,0, затравляют и культивируют обычным способом нри следуюш,их условиях брожения: скорость аэрации 3000 мл/мин; скорость перемешивания 500 об/мин; температура брожения 33 °С; рН 6-9.

Эти условия соблюдаются во всех следующих циклах брожения.

Для затравки иснользуют культуру Micrococcus glutamicus АТСС 13031. После того как начинается брожение, в питательную среду вводят следующие дополнительные вещества, изменяющиеся в зависимости от группы циклов брожения на 1, 3, 5, 7, 9 и И час брожения соответственно. Для контрольного брожения используют 3000 мл среды, содержащей только 13% осахаренной жидкости на основе редуцирующего сахара. Дополнительные компоненты в соответствующих количествах и результаты анализа L-глутаминовой кислоты приведены в табл. 1 и 2.

Из табл. 2 видно, что лучший результат получен для группы циклов: А-3, А-4 и А-5, которые протекали при более высоком содержании биотина. Более того, эффект усилился после добавления биотина через 3 или 5 час, что подтвердило выше предложенную теорию: микроорганизмы должны расти нри условии Результаты анализа через 48 час после начала брожения

Группы

L-глутаминовая кислота, мг/мл L-глутаминовая кислота -(-L-пирролидонкарбоновая кислота, мг/мл циклов

Таблица 1

субоптимального количества биотина, благоприятного для образования ферментной систе15 мы и вводимого при синтезе L-глутаминовой кислоты.

Предмет изобретения

Способ получения L-глутаминовой и L-пирролидонкарбоновой аминокислот путем культивирования их продуцента Micrococcus glutamicus на питательной среде, содержащей источник углевода, в присутствии необходимых 5 для роста минеральных солей и стимулятора роста, например биотина, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и концентрации L-глутаминовой кислоты, в процессе выращиваиия продуцента в питательиую среду добавляют антибактериальный реагент, замедляющий рост продуцента, например хлористую ртуть, фенилацетатную ртуть, пенициллин.

Таблица 2