СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА /-ЛИЗИНА Советский патент 1970 года по МПК C12P13/08 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам производства /-лизина с,помощью ферментации.

Известны способы получения /-лизина путем глубинного выращивания продуцирующих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей углеводы, азотные, фосфорные соли и стимуляторы роста, с последующим отделением клеток от культуральной жидкости, например, фильтрацией и выделением /-лизина из культуральной жидкости на ионообменных смолах.

Однако для биосинтеза /-лизина используют ограниченный комплекс микроорганизмов.

Целью изобретения является расширениекомплекса микроорганизмов, используемых для биосинтеза /-лизина.

Для этого в качестве микрооргани,змов-продуцентов используют штаммы Bfevibacterium ammoniagenes АТСС № 19350, АТСС%е 19351, АТСС № 19352, АТСС № 19353, АТСС № 19354, АТСС № 19355 и АТСС № 19356.

Микроорганизмы-продуценты /-лизина, например штаммы Brevibacterium ammoniagenes АТСС № 19350, АТСС № 19351, АТСС № 19352, АТСС № 19353, АТСС № 19354, АТСС № 19355 Я АТСС № 19356, требующие для своего роста

треонин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, цйстин или цистеин, выращивают в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода - различные углеводы; источники азота - аммиак и соли аммония, например хлористый аммоний, сульфат аммония, нитрат аммония, карбонат аммония, фосфат аммония, ацетат аммония; стимуляторы роста- дрожжевой экстракт, гидролизат казеина, мясной экстракт; неорганические вещества - первичный кислый фосфорнокислый калий, вторичный кислый фосфорнокислый калий, сульфат магния, хлористый натрий, сернокислое железо, сернокислый марганец и углекислый кальций.

Ферментацию проводят в течение 2-5 дней при 24-37°С и рН 5,1-8,5. Затем культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток одним из известных способов, например

фильтрацией, и пропускают через слой ионообменной смолы, которая адсорбирует /-лизин. Пример 1. В качестве бактерии, используемой для посева, применяют Brevibacterium ammoniagenes № 4948 АТСС 19350, (штамм,

требующий треонин):

Этот штамм инокулируют в 250 мл среды, используемой для посева и имеющей состав в %:

глюкозы 2, пептона 1, дрожжевого экстракта 1 и хлористого натрия 0,2.

Выращивание проводят при 30°С в течение 24 час.

Полученные при этом бактерии, служащие для посева, инокулируют в количестве 10% по объему в коническую колбу, содержащую 30 мл ферментационной среды следующего состава, %:

Глюкоза7,5

Сульфат аммония1,5

Первичный кислый фосфорно-кислый калий0,05

Вторичный кислый фосфорно-кислый калий0,05

Сульфат магния0,025

N-Z-амин0,5

Карбонат кальция2,0

рН среды равен 7,0, а биодин присутствует в количестве 30,0 мкг на 1 л.

Встряхивание культуры при доступе воздуха проводят при 30°С в течение 4 дней.

Накопление /-лизина 7,2 кг/мл.

Культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток фильтрацией и пропускают через слой ионообменной смолы, обладающей слабыми щелочными свойствами.

Колонку, заполненную смолой, промывают водой и производят отмывку адсорбента с помощью 0,15 н. аммиачной воды. Полученные растворы, содержащие /-лИзин, соединяют вместе и концентрируют.

Затем концентрированный раствор доводят до кислой среды (рН 4,0) и дополнительно концентрируют.

В результате получают 10,5 г кристаллического /-лизин-1-гидрохлориДа со степенью чистоты, соответствующей техническому продукту.

П р и м е р 2. Культивирование Производят таким же образом и при тех же условиях, как было описано в примере 1, с той лишь разницей, что ферментационная среда содержит 7,5% фруктозы и 0,5% мясного экстракта вместо глюкозы и N-Z-амина.

В результате получают 6,1 мг/мл /-лизина, содержащегося в жидкости для выращивания культуры.

Количество /-лизина, накопившегося в среде для выращивания культуры под воздействием различных штаммов Brevibacterium ammoniagenes, приведено в таблице.

Количество накопившегося /-лизина jaiJMA

№ 4948 АТСС 19350

(штамм, требующий треонин) № 518 АТСС 19351

(штамм, требующий фенилаланин № 5130 АТСС 19352

(штамм, требующий гистидин) № 5366 АТСС 19353

(штамм, требующий метионин) № 5313, АТСС 19354

(щтамм, требующий цистеин) № 5128 АТСС 19355

(штамм, требующий лейцин) № 5134 АТСС 19356

(щтамм, требующий изолейцин)

Предмет изобретения

Способ производства /-лизийа путем глубинного выращивания продуцирующих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей углеводы,, азотные, фосфорные соли и стимуляторы роста, с последующим отделением Клеток от культуральной жидкости. Например, фильтрацией и выделением /-Лизина из культуральной жидкости на ионообменных смолах, отличающийся тем, что, с целью расширения комплекса микроорганизмов, используемых для биосинтеза /-лизина, в качестве микроорганизмов-продуцентов используют один из штаммов АТСС № 19350, АТСС № 19351, АТСС № 19352, АТСС № 19353, АТСС № 19354, АТСС № 19355 и АТСС № 19356 рода Brevibacterium ammoniagenes.