СПОСОБ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИПИДОВ, Советский патент 1970 года по МПК C12N1/00 

Изобретение относится к технической биохимии и микробиологии и касается выделения иолимерпых веществ, а именно липидов, нуклеиновых кислот и белков из клеток микроорганизмов.

Микробиологическая клетка состоит из четырех осиовиых груип веи.естБ: лииидов, белков, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Две из этих групп по своему химическому составу представляют большую ценность как основа для создания искусственной пищи: белки в виде различных пищевых форм (искусственная икра, искусствеииое мясо, круиы) и нуклеииовые кислоты после их ферментативного гидролиза до 5-мононуклеотидов в качестве иищевых добавок - интенсификаторов вкуса и запаха.

Известны способы извлечения отдельных компонентов клеток микроорганизмов, например нуклеиновых кислот, экстракцией солевыми растворами и белка экстракцией раствором щелочи. Ио эти методы не предусматривают комплексной обработки микробиологического материала так, чтобы каждая группа веществ извлекалась с максимальным выходом и в иаиболее чистом виде.

По предлагаемому способу микроорганизмы подвергают полному обезлшрпванию с одиовременной дезиитеграцией клеточных оболочек в среде органического растворителя в кавитационной мельнице. Из органического слоя выделяют лиииды. После иолного удаления органического растворителя из микробиологического дезиитегрированного материала, иапри.мер сущкой при 60-65°С, из него экстрагируют нуклеиновые кислоты растворами солей, например 10%-иым раствором NaCl, а из оставшейся пасты извлекают белок, например, экстракцией 0,2 н. раствором NaOH.

Предлагаемый способ позволяет разделить химические вещества микробиологической клетки на четыре основные группы: жировые вещества, белки, нуклеииовые кислоты и нолисахаридный остаток. Кроме того, дезинтеграция материала в кавитационной мельнице зиачительпо облегчает выделение отдельных веществ из клетки и позволяет получить ценное пищевое сырье в чистом виде. Пример. 6,5 г дезинтегрированного обезжиренного норощка клеток Candida tropicalis, выращенных на н-алканах, кнпятят 1,5 час в 50 .ил 10%-ного раствора NaCL После этого суспензию охлаждают до 40°С и иодщелачивают до рН 9,5 10%-ным раствором МаОП.

Сусиензию выдерживают 3 час, продолжая

охлаждение до комнатной темиературы, иосле

чего осадок отделяют на центрифуге и из него рованной соляной кислотой. Выпавшему осадку нуклеиновых кислот дают созревать не менее 8 час в холодильнике, после чего его отделяют на центрифуге, иромывают этанолом для допигментации и переводят снова в водный раствор, доводя рН до 7,0. В водный раствор нуклеиновых кислот добавляют небольшое количество хлороформа и встряхивают его на качалке 1 час для депротеинизации нуклеопротеидов, носле чего осадок белка отделяют на центрифуге, а прозрачный раствор нуклеиновых кислот (супериатапт) вливают в этанол, подкисленный концентрированной liCl. Выпавший осадок нуклеиновых кислот собирают на фильтре, промывают этанолом, затем эфиром и сушат на воздухе. Получают 0,54 г нуклеиновых кислот с содержанием основного иродукта 86% (выход 90%). Элементарный состав, %: N 15,5; Р 8.5. Элементарный соВыход белка став, %: N 15,6; Р нет, С 49,8; Н 7,21. Предмет изобретения 1. Способ последовательного выделения липидов, нуклеиновых кислот и белков из клеток микроорганизмов, отличающийся тем, что микроорганизмы обезжиривают дезинтеграцией в кавитационной мельнице в присутствии органического растворителя, из органического слоя выделяют липиды, твердый остаток сушат и экстрагируют из него нуклеиновые кислоты растворами солей, из оставшейся пасты шелочной экстрагсцией изВоТекают белки. 2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что для экстракции нуклеиновых кислот используют 10%-ный раствор поваренной соли. 3. Способ но пи. I-2, отличающийся тем, что для экстракции белков используют 0,2 н. раствор щелочи.