СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРЕАТИНКИНАЗЫ Советский патент 1970 года по МПК C12N9/12 

Известны способы получения креатинюнназы путем экстракнии мышц кролика хлористым калием, осаждения балластных белков, тепловой денатурации, отделения осадка с -последующим диализом надосадочной жидкости и кристаллизации целевого лродукта.

По предлагаемому способу падосадочную жидкость охлаждают и обрабатывают освобожденным от тяжелых металлов этанолом до достижения концентрации 70%. Это позволяет ЦОБЫСИТЬ качество фермента и упростить технологию его получения.

Для получения креатинкиназы мышцы кролика гомогенизируют и экстрагируют 0,01 М раствором хлористого калия. Э-кстракт отделяют от осадка центрифугированием, подщелачивают аммиаком до рП 9,0, добавляют 5,3 г «а 1 л экстракта хлористого аммония для осаждения катионов кальция и магния и затем осаждают балластные белки этанолом. Для осаждения берут спирт-ректификат, обрабатывают его едким натром (5 мл 50%-кого раствора на 1 л) для удаления перекисей, перегоняют и затем встряхивают в течение 1 час с катионитом дауэкс 50х1 в водородной форме (20 г сырого катионита «а 1 л спирта) для удаления примесей тялжлых металлов. После осан дения балластных белков смесь нагревают до 20°С, оставляют на 2 час при Перемешивании и отделяют осадок центрифугированием при температуре минус 5 плюс 2°С. Надосадочную жидкость оставляют на ночь В холодильнике, и если фильтруют через бумажный фильтр. Для осаждения фермента полученный раствор охлаждают до О -минус 5°С и медленно добавляют охлажденный до минус 5 - минус 10°С этанол до концентрации 70% при постоянном перемещивании. Смесь оставляют на 2 час, после чего выпавший осадок фермента отделяют центрифугированием в течение 15 мин при плюс 2 - минус 5°С и растворяют в небольшом количестве 0,01 М глицинового буферного раствора (рН 9,0). Диализ для удаления спирта производят при О-4°С в течение 20 час против глицинового буферного раствора. В случае появления осадка раствор фермента центрифугируют и получают прозрачный бесцветный раствор, содержащий 20- 25 мг/мл препарата с .активностью 250 ед/мг.

Предмет изобретения

Способ получения креатинюииазы путем экстракции мыщц кролика хлористым калием, осаждения балластных белков, тепловой денатурации, отделения осадка с последующим диализом надосадочной жидкости и кристал3ЛйзацИи целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения качества фермента и упрощения процесса, надосадочную 4 жидкость охлаждают и обрабатывают освббожденным от тяжелых металлов этанолом до достижения концентрации 70%.