Изобретение относится к области микробиологических исследований, а именно к способам выделений Escherichia соИ и Bacterium citrobacter из молока, молочных продуктов, смывов с доильной аппаратуры и молочной посуды.
Известный способ для определения колититра молока и молочных продуктов, применяемый в настоящее время, заключается в следующем. Посев исследуемых проб на среду Кесслера (выращивание 24 час), последующий пересев со среды Кесслера на среду Эндо - 24 час, затем высев подозрительных по цвету и форме колоний на мясо-пептонный бульон (МПБ) -3 час, с МПБ в случае чистой культуры (после микроскопии) - высев на бульон с лактозой и индикатором Андрадэ и .в пробирки со средой Симмонса или Козера - 24 час.
В случае роста на МПБ неоднородной культуры, что часто бывает при «двойных, но монолитных внещне колониях на среде Эндо, результат исследования задерживается еще на одни сутки для выделения грамм-отрицательных палочек.
ваниями молока и молочных продуктов, которые являются скоропортящимися. Во-вторых, трудоемкость способа, заключающаяся в многоэтапности с больщим количеством питательных сред (пять), мещает щирокому использованию его в практических и научно-производственных лабораториях. II. в-третьих, при этом способе не возмон но дифференцировать Escherichia соИ от Bacterium citrobacter в случае их одновременного роста на МПБ.
По предлагаемому способу выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, состоящей из пептона, лактозы,
поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды, предпочтительно в течение 4- 20 час при температуре 42,5-43,5°С, а идентификацию посевов ведут по изменению цвета
среды в ярко-зеленую окраску (положительная реакция).
Для дифференциации Eschericha соИ от Bacterium citrobacter из посевов с положительной реакцией осуществляют высев штрихом иа
секторе чащек Петри со средой Симмонса с последующим выращиванием культур при температуре 37°С.
Предлагаемый способ заключается в следующем.
1сследуемые пробы разводят стерильной водой 1 : 10 и выше, после чего высевают на элективЕгую и дефференцирующую среду, состоящую из пептона, лактозы, поваренной соли, алкнларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды.
Пробирки с посевами ставят в термостат при 42,5-43,5°С на 4-20 час в зависимости от бактериального загрязнения исследуемых проб. При наличии Escherichia соИ от 100 млн. до 10 тыс. бактерий в 1 мл рост наблюдается через 4-8 час. На среде растут и изменяют цвет только бактерии Escherichia соИ и Bacterium citrobacter.
Учет реакции. Если .в засеянных пробирках цвет среды не изменился, то это свидетельствует об отсутствии Escherichia coli и Bacterium citrobacter. Изменение цвета среды в ярко-зеленый говорит о наличии Escherichia coli и Bacterium citrobacter или одной из них.
При необходимости дифференциации Escherichia coli от Bacterium citrobacter из пробирок с измененным цветом производят посев на среду Симмонса, которую накануне разливают тонким слоем в чашки Петри и подсушивают. Каждую чашку делят не более чем на четыре сектора. Пробирки с посевами, предназначенными для высева, перемешивают вращением между ладонями и высевают платиновой петлей (петлю освобождают от излишней средыкапли встряхиванием) штрихом строго по сектору. Чашки с посевами инкубируют 18 - 20 час при 37°С. При росте Bacterium citrobacter среда из оливково-зеленой становится ярко-синей. Escherichia coli на среде Симмонса не растут.
При смешанной культуре (т. е. в пробирке одновременно растут Bacterium citrobacter и Escherichia coli) на секторе наблюдаются редкие ко.тонии (не сплошной рост по штриху)
с изменением цвета среды также в ярко-синий (это говорит о наличии Bacterium citrobacter) и обязательно на этом секторе участки без роста и изменения цвета среды (это говорит о наличии Escherichia coli). Таким образом, предлагаемый способ является быстрым, дешевым, он прост в выполнении и высокочувствителен, так как позволяет сократить сроки исследования с 3-4 суток до 18-48 час в зависимости от количества бактерий Escherichia coli и Bacterium citrobacter в исследуемых пробах и и обнаруживать их до 1 микробной клетки в 1 г продукта.
Предмет изобретения
1.Способ выделения Escherichia coli и Bacterium citrobacter из молока и молочных продуктов, предус.матривающнй разведение исследуемой пробы, посев и выращивание на питательной среде посевного материала при термостатировании с последующей идентификацией посевов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и удещевления способа, а также повышения его чувстБ 1тельности, .зыращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, состоящей из пептона, лактозы, поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды, а идентификацию посеВОВ ведут по изменению цвета среды в яркозеленую окраску (положительная реакция).
2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью дифференциации Escherichia coli от Bacterium citroBacter, из посевов с положительной реакцией осуществляют высев щтрихом на секторы чащек Петри со средой Симмонса с последующим выращиванием культур при температуре 37°С.
3.Способ по п. , отличающийся тем, что в процессе выращивания посевного .материала
температуру поддерживают равной 42,5 - 43,5°С, а выращивание осуществляют в течение 4-20 час.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ESCHERICHIA COLI И BACTERIHM C1TROBACTER В МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХПРОДУКТАХ | 1970 |
|
SU283154A1 |
Штамм 85-продуцент -аспарагиновой кислоты | 1976 |
|
SU644833A1 |
МОДИФИЦИРОВАННАЯ СРЕДА КЕССЛЕР ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БАКТЕРИЙ ГРУППЫ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ | 2000 |
|
RU2202618C2 |
Штамм для идентификации -плазмид | 1979 |
|
SU786329A1 |
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ, АССОЦИИРОВАННОЙ ПРОТИВ ЭШЕРИХИОЗА, СТРЕПТОКОККОЗА И СТАФИЛОКОККОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2013 |
|
RU2538158C1 |
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА LACTOBACILLUS ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА | 2001 |
|
RU2193060C1 |
ПРОБИОТИК ЛАКТОМИКРОЦИКОЛ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ И ОТКОРМА БРОЙЛЕРНОЙ ПТИЦЫ | 2004 |
|
RU2268925C2 |
Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота | 2018 |
|
RU2707289C1 |
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ АССОЦИИРОВАННОЙ ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА, САЛЬМОНЕЛЛЕЗА И ЭНТЕРОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ НУТРИЙ | 2006 |
|
RU2338554C2 |
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА Shewanella | 2010 |
|
RU2435845C1 |
Даты
1970-01-01—Публикация