АН СССР и Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков Советский патент 1971 года по МПК C12N9/48 

Изобретение относится к области микробиологии и касается способов получения протеолитического комплекса.

Известны способы получения протеолитического комплекса типа проназы из культуральной жидкости продуцента антибиотика; протеолитического комплекса из клеток мицелия актииомицетов после их разрушения механическими средствами; комплекса различных ферментов из клеток мицелия актиномицетов после их разрупления автолизом с последующей экстракцией водой. Однако эти способы достаточно сложны.

Целью изобретения является предложение простого способа получения протеолитического ферментного комплекса с использованием отходов антибиотической промышленности. Для этого культуральную жидкость перед отделением мицелия обрабатывают при рН 7,4-7,7 хлористым кальцием и двузамещенным фосфатом аммония. Целевой продукт извлекают экстракцией мицелиальной массы 0,5 М раствором хлористого натрия.

Пример. К культуральной нчидкости штамма-продуцента стрептомицина, полученной после 150 ч ферментации в количестве 10 л, добавляют 40 г безводного хлористого кальция и 100 г двузамещенного фосфорнокислого аммония. Значение рН устанавливают на уровне 7,4-7,7 добавлением аммиачной воды. После 40 мин выдержки мицелий отделяют фильтрованием, промывая его 4 л умягченной воды. Из нативного раствора известным способом получают стрептомицин, а осадок мицелия с протеолитической активностью 1,05 ед/мл при концентрации сухого веш,ества 45 мг/мл экстрагируют 8 л 0,5 М раствора хлористого натрия при перемешивании и комнатной температуре в течение 1 час. После отделения осадка фильтрованием получают экстракт с протеолитической активпостью 0,6 ед/мл. К этому экстракту постепенно при перемешивании добавляют 3 объема изопропанола, оставляют на 3 час, отделяют выпавший осадок сепарацией и добавляют к нему 0,7 л дистиллированной воды. Получают суспензию с концентрацией сухого вещества 16 мг/мл и протеолитической активностью 5,12 ед/мл или 320 ед/г сухого вещества.

Предмет изобретения

Способ получения протеолитического комплекса типа проназы из мицелиальной массы продуцента антибиотика путем ее отделепия от культуральной жидкости с последующей экстракцией, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода фермента и упрощення процесса, культуральную жидкость перед отделением мицелия обрабатывают при рП 7,4-7,7 хлористым кальцием и двузамещенным фосфатом аммония, и целевой продукт извлекают экстракцией мицелиальной массы 0,5 М раствором хлористого натрия.