ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОВЕРХНОСТНОГО ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХФЕРМЕНТОВ Советский патент 1971 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к ферА ентной промышленности.

Известна питательная среда для поверхностного выращивания продуцентов пектолитических ферментов, например Aspergillus foetidus, содержащая пщеничные отруби и свекловичный жом при рН 4,9-5,05.

Однако отруби злаковых культур не являются оптимальной средой, так как синтез пектинрасщепляющих ферментов стимулируется наличием в питательной среде пектиновых веществ.

Цель изобретения-получение комплекспого ферментного препарата, содержащего высокоактивные пектолитические ферменты.

Для этого в питательную среду дополнительно вводят аммонийные соли серной или соляной кислот, причем эти комнопенты содержатся в следующих соотношениях (в вес. %): пшеничные отруби 64-74; свекловичный жом 25-35, аммонийные соли 1.

Перечисленное сырье в указанных соотношениях смешивают, увлажняют до влажности 60-62%, стерилизуют при 1 атм в течение 1 час.

Охлажденную до 35-37°С питательную среду при рН 5,1-5,5 засевают конидиями гриба Aspergillus foetidus. Культивирование проводят при 28-32°С, максимальное накопление ферментов наблюдается через 38-

4(Jшс. Из культуры плесневого гриба Aspergillus foetidus (рН 4,95-5,05) получают водную диффузионную вытяжку в количестве 350% от веса абсолютно сухой культуры. Выделение комплексного препарата ферментов проводят путем осаждения ферментов из диффузионной вытяжки этиловым сниртом при концентрации его в смеси 73-74%. Выход препарата составляет 6,5-7,5%. Активность получаемого препарата составляет 29000- 36000 ед/г.

В фер1 1ентпых препаратах, полученнь х этим способом, повышена активность нектинрасценляющих ферментов на 300 - 360% (29000--36000 ед/г против 9000-10000 ед/г). Новый высокоактивный нреиарат характер зуется богатым набором ферментов: кислотоустойчивая протеиназа (25-35 ед/г), мацерирующие ферменты (2000-2200 ед/г) и др.

Пример 1. Культивирование в лабораторных условиях: 30 г свекловичного жома, 69 г пшеничных отрубей и I г сернокислого аммония (NH.i)2SO4 или солянокислого аммония (.|С1) смешивают и увлажняют 130 мл водопроводной воды до V 60-62%.

Питательную среду стерилизуют в течение 1 нас при 1 атм. После охлаждения питательную среду засевают споровой суспензией гриба Aspergillus foetidus. Культивирование ироводят поверхностным способом в кюветах на

200 г питательной среды при 30°С в течение 38-40 час. Начальное значение рН питательной среды 5,1-5,4, конечное-5,0.

Из полученной культуры гриба ферменты извлекают путем экстракции при соотношении водопроводной воды и абсолютно сухой культуры 4,5 : 1 в течение 1 час и при 30°С.

Комплексный ферментный препарат выделяют из экстракта путем осаждения этиловым спиртом при крепости смеси 73-74% и 5°С. Осадок отделяют на центрифуге при 3000 об/мин. В культуре активность пектолитических ферментов-3897,0 ед/г. В высушенном препарате активность пектинрасшепляющих ферментов 36192,0 ед/г, мацерируюш,ая активность 2200 ед/г, кислая протеиназа 25 ед/г.

Выход препарата 7,5%.

Пример 2. Культивирование в полузаводских условиях: 21,0 кг свекловичного жома, 48,3 г пшеничных отрубей и 0,7 кг сернокислого аммония смешивают и смесь увлажняют до W 60%.

Полученную питательную среду стерилизуют в автоклаве в течение 1 час при 1 атм. Охлажденную питательную среду (рН среды 5,6) засевают споровым посевным материалом гриба Aspergillus foetidus в количестве 0,3%.

Культуру выращивают на кюветах в растительных камерах в течение 38-40 час при 28-30°С, рН готовой культуры -4,9.

Ферменты извлекают из культуры плесневого гриба водой диффузионным способом, при отборе диффузионной вытяжки 300- 350%. Выделение комплексного препарата

ферментов из поверхностной культуры гриба

Aspergillus foetidus проводят осаждением

этиловым спиртом при крепости смеси 73-

74%.

В результате из 46,4 кг культуры плесневого гриба Aspergillus foetidus с активностью пектинрасш,епляюш,их ферментов - 2607 ед/г получено 3,3 кг комплексного сухого препарата с активностьх ед/г; пектинрасшепляюших ферментов 33194, кислой протеиназы 33, мацерируюших ферментов 2000.

Выход препарата составил 7%.

Предмет изобретения

Питательная среда для поверхностного выращивания продуцентов пектолитических ферментов, например Aspergillus foetidus, содержащая пшеничные отруби и свекловичный жом, при рН 4,9-5,05, отличающаяся тем, что, с целью получения более активных ферментов, в питательную среду дополнительно вводят аммонийные соли серной или соляной кислот, причем вышеуказанные компоненты содержатся в следующих соотношениях (в вес. %): пшеничные отруби 64-74, свекловичный жом 25-35, аммонийные соли 1.