СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОКОРТИЗОНА Советский патент 1964 года по МПК C07J5/00 

Известны способы получения гидрокортизона с ПОМОЩЬЮ культуры гриба Absidia OrchidiS на среде, содержащей кукурузный экстракт и глюкозу.

При этих способах в качестве исходного продукта используют вещество «S Рейхштейна, которое обычно получают омылением его ацетата с использованием металлического натрия. Выход гидрокортизона при его получении из вещества «S Рейхщтейна не превышает 50% от теоретического количества.

Описываемый способ отличается от известных тем, что микробиологической трансформации подвергают ацетат вещества «S Рейхштейна. Это позволяет увеличить выход целевого продукта и упростить процесс его получения.

Посевной материал выращивают иа среде, содержащей 5% глюкозы, 2% пептона и 0,3% кукурузного экстракта (на сухое вещество) при температуре 27-28°С в течение 48 час.

Процесс микробиологического превращения ацетата вещества «S Рейхштейна в гидрокортизон проводят на среде, содержащей 1,1% кукурузного экстракта (на сухое вещество) и 2,5% глюкозы, с начальным значением ,2 -5,8.

снабженномпропеллерной мешалкой

(90 об/мин), барботером для подачи воздуха, обогревом, отборником проб, воздушником, штуцером для введения стероида, загрузочным и выгрузочным люками. Исходные споры культуры Absidia Orchidis выращивают на картофельном агаре или пщене на матрацах при 27°С в течение 7 дней. Выращенные споры в асептических условиях заливают стерильной

водой в количестве 200 мл на матрац и помещают в 14 литровых колб с 200 мл стерильной среды в количестве 2,6- Шэ спор на литр среды. В состав среды входит 5i% глюкозы, 2% дептона и 0,3% кукурузного экстракта (на сухое вещество). Засеянные колбы помещают на качалку (200 об/мин) и выращивают культуру при температуре 27-28°С в течение 48 час.

Микробиологическое превращение ацетата вещества «S Рейхштейна в гидрокортизон

проводят на среде, содержащей 1,1% кукурузного экстракта (на сухое вещество) и 2,5% глюкозы. В ферментер заливают 70 л указанной среды и стерилизуют ее при 118-120°С в течение 30 мин. Посевной материал в виде

двухсуточного мицелия асептически вводят в количестве 2800 мл, выращивают в течение 36-38 час при непрерывной подаче стерильного воздуха (1 объем на 1 л среды в минуту) и температ ре 26-27°С. Мешалка работает в

ронней микрофлоры в 32-часовую культуру вводят 1,5 г ацетата вещества «S Рейхштейна, растворенного в 90 мл горячего (60°С) этанола с целью адаптации культуры к стероиду. Затем смесь разбавляют 30 л стерильной воды и вводят 6,5 г стероида в 390 жл этанола (60°С), через 4 час- 16,5 г стероида в 990 мл этанола, еще через 5 час 16,5 г стероида в 990 мл этанола и в заключение еще через 5 час 13,5 г стероида в 810 мл этанола. Через 10-12 час после введения последней порции ацетата вещества «S Рейхштейна из ферментера отбирают пробу для хроматографического анализа на присутствие ненрореагировавшего исходного продукта. В зависимости от качества кукурузного экстракта процесс ферментации заканчивается через 24-48 час. Содержимое ферментера переносят на друкфильтр, отжатый мицелий промывают водой, а культуральную жидкость вместе с промывными водами экстрагируют хлороформом.

Хлороформные экстракты упаривают досуха и из полученной смеси гидрокортизона и вещества эпи-F выделяют гидрокортизон кристаллизацией из метанола. После трех кристаллизаций получают 24,4 г гидрокортизона с т. пл, 209-215°С.

По данным количественного анализа превращение ацетата вещества «S проходит с общим выходом 85% (62% гидрокортизона и

38% вещества эпи-F), из которого получают кортизон-ацетат.

Предмет изобретения

Способ получения гидрокортизона с помощью культуры гриба Absidia Orchidis на среде, содержащей кукурузный экстракт и глюкозу, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и упрощения процесса, микробиологической трансформации подвергают ацетат вещества «S Рейхштейна.