СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ЛИСТЕРИЙ Советский патент 1973 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к способам культивирования микроорганизмов.

Известны способы выращивания листерий на мясо-нептонном бульоне, бульоне Хоттиигера, мясо-нептонно-печеиочно-сахаро-глицериновом бульоне и мясо-пентон-но-печеночносахарОГли1,гриновом агаре.

Однако эти питательные среды дают сравнительно ь-евысокое накопленне бактериальной массы.

Цель изобретения-увеличение накоплення бактериальной массы в питательной среде.

Для ocyп ccтвлeния предложенного сиособа в мясную питательную среду вводят соед1п:ения, выбранные из ряда органических кислот (лимонная, малеиновая, малоиовая, трансаKOHJtTOBan и пировнногради:ая).

Способ осуидествляется следуюишм образом. В стерильные колбы с питательной средой (МПИСГБ и МППСГА) перед засевом культуры, например Listeria monocytogenes штамм У ЗНИВИ, стерильно вносят добавки органических соединений в следующих концентрациях (иа 100 мл среды), %: лимонио.кислого иатрия 0,7-2,7; малеиновой кислоты 0,4-1,2; малоновой кнслоты 0,4-1,2; трансаконитовой кислоты 0,7-2,7; ннровнноградиой кислоты 0,45-0,90.

Добавки органических кислот готовят следующим образом: I) 33%-ный раствор лимоннокислого 3-замепленного - 20 г натрня ЛИМОН1НОКИСЛОГО (ч.д.а илн х.ч.) растворяют в 40 мл дистиллированной воды; 5 2) 2070-ный раствор малеиновой кислоты- 10 г малеиновой кислоты растворяют в 20 мл дистиллированной воды и нейтрализуют примерно 20 мл 30%-пой NaOH до нейтральной реакции (по индикаторной бумаге);

0 3) 20%-ный раствор малоновой кислоть- - 10 г малоновой кислоты растворяют в 20 мл дистиллирован-ной воды и нейтрализуют примерно 20 мл 30%-ного раствора NaOH до нейтральной реакции;

5 4) 33%-ный раствор трансаконнтовой кислоты-10 г трансаконитовой кислоты нейтрализуют примерно 24 мл 30%-ного раствора МаОН до нейтральной реакцни; 5) 43%-ный раствор пировиноградной кислоты - 30 мл пировиноградной кислот) н;ейтралнзуют примерно 40 мл 30%-ного раствора до гейтральной реакции.

Все растворы кислот стерилизуют в течение 30 мин при 0,5 атм.

5 Культуру лпстерий засевают во флаконы из расчета мл культуры н.а 100 мл среды. Культивирование проводят при 37° С в течение 22-24 час. Сравнительные определения накопления

0 бактериальной массы листерий в контроле и флаконах с добавками органических кислот показали увеличение накопления этой массы в среднем в 2-2,5 раза. Максимальное накопление биомассы наблюдается при концентрадиях добавок, приведенных в таблице.

Примечание. Е-экстинкция и ДЕ-увеличение экстинкции Пример 1. Во флаконы с МППСГБ пе- 25 ред культивированием листерий добавляют стерильно 20%-ный раствор малеиновой кислоты из расчета 6 мл раствора на 100 мл среды (1,2%). В полученную среду вносят 1 мл бульониюй культуры листерий. После культи- 30 вирования в течение 24 час при 37 С определяли оптическую плотность выросшей культуры на нефелометре ФЭК-М (кювета 5 мм против контроля состоящего из 5 Л1Л МППСГБ и 0,3 мл 20%-ного раствора малеиновой кис- 35 лоты (1,2%). Полученную оптическую плотность сравнивали с оптической плотностью контрольной среды без добавок. Контрольную культуру колориметрировали против МППСГБ без до- 40 бавок: Е - опыта - 0,757 Е контроль - 0,284 ДЕ-0,473, т. е. добавление в МППСГБ 1,2% малеиновой кислоты увеличивает накоп- 45 ление биомассы на 166,6% или в 2,66 раза. Пример 2 для трансаконитовой кислоты. Во флаконы с МППСГБ перед культивированием листерий добавляли стерильно 33%ный раствор трансаконитовой кислоты из 50 расчета 4 мл раствора на 100 мл среды (1,32%). В полученную среду вносили 1 мл бульовной культуры листерИЙ. После культивирования в течение 24 час в термостате при 37° С онределяли оптическую плотность вы- 55 росшей культуры на нефелометре ФЭК-М (кювета 5 мм против контроля, состоящего из 5 мл МППСГБ и 0,2 мл 33%-Hioro раствора трансаконитовой кислоты (1,32%). Полученную оптическую плотность сравнивали с 60 оптической плотностью контрольной среды без добавок, на которой листерий выращивались в тех же условиях. Контрольную культуру колориметрировали против МППСГБ без добавок,65 по сравнению с контролем. Е опыта -0,610 контроля - 0,284 ДЕ 0,326, т. е. добавление в МППСГБ 1,32% трансаконитовой кислоты увеличивает накопление биомассы на 114,8% Пример 3. для пировипоградной кислоты. Во флаконы с МППСГА перед культивированием листерий добавляли стерильно 43%ный раствор пировиноградной кислоты из расчета 2,1 мл на 100 мл среды (0,91%). Затем в среду вносили 1 мл бульонной культуры листерий. После культивирования в течение 24 час в термостате при 37° С определяли оптическую плотность выросшей культуры на нефелометре ФЭК-М (кювета 5 мм) против контроля, состоящего из 5 мл МППСГА и 0,1 мл 43%-ного раствора пировиноградной кислоты (0,91%). Полученную оптическую плотность сравнивали с оптической плотностью контрольной среды без добавок, на которой листерий выращивались в тех же условиях. Контрольную культуру колориметрировали против МППСГА без добавок: Е опыта - 0,462 Е контроля - 0,250 ДЕ 0,212, т. е. добавление в МППСГА 0,91% пировииограднюй кислоты увеличивает накопление биомассы н;а 84,8%. Предмет изобретения 1.Способ выращивания листерий, включающий культивирование их на мясных питательных средах, отличающийся тем, что, с целью увеличения накопления бактериальной массы листерий, в питательную среду вводят соединения, выбранные из ряда органических кислот, таких как лимониая, малеиновая, ма-лоновая, трансакопитовая и пировиноградная, 2.Способ по п. 1, отличающийся тeм 3 что органические кислоты берут в следующих концентрациях из расчета на 100 мл среды. в %.: Лимоннокислый натрий 0,7-2,7 6 Малеиновая кислота0,4-1,2 Малоновая кислота0,4-1,2 Трансаканитовая кислота0,7-2,7 Пировиноградная кислота0,45-0,90