Способ получения витамина е Советский патент 1979 года по МПК C07D311/72 A61K31/355 A61P3/02 

I

Изобретение относится к области попученв я лекарственных препаратов.

Известен способ получения витамина Е из растительного сырья, например на 1%рен пшеникы заключающийся в том, что исходный материал экстрагируют смесью хлороформ-метанол (2:1), омыпяют хлороформную фракцию, экстрагируют иепевой продукт каоктаном, экстракт вьшаривают, остаток растворяют в хлоро- форме Н используя сефадекс UH-20., выделяют Активные фракции. Выход продукта недостаточно вьюок - 0,ОО9 мг/г от сухого веса сьфья.

Цель изобретения-повышение выхода витамина Е нз сырья.

Это достигается тем, что в качестве ИСХОДНОГО сырья используют культуры микроорганизмов, например рода Ectotlriorhodospirde иди TlhodopseudomonoB, выращенные при допошртшьйом освещении в погарифмической пи стационарной фаза роста светом спектрального диапазона 270-800 нм и интенсивностью не

более 10 эрг/см.с в течение от 10 с до 48 ч, и выделяют целевой продукт после разрушения клеток через интервапы времени от 1 мин до 48 ч после прекращения освещения.

П р.и м е р 1. rijpnypHHe серные бактерии EctottiiorliQdospifd stioposiinViovii выращивают на среде Ларсена,. имеющей следующий состат, вес,%:

мн,,се.

ОД

ОД

0,05 сЬ сс.

0,01

ОД

Nace, Na 5-9H5,0

0,1 НаНСО, 0,4

Fece bHgO 0,003

CHjCOONa 0,2

гЭ Микроэлементы 0,1-10

ИоО

10О

Культивирование ведут при ЗО С рН среды 8,0-8,2, в анаэробных условиях при освещении светом от лампы накаливання 60 Вт „ интенсивностью 2-10 эрг/см с, В конлв логарифмической фазы (24-30 ч) роста бактерии культивируемые в кварцевых сосудах емкостью 0,6 п, подвергают действию дополнительного света спектральной области 330-690 нм от лампы БУФ-30 в сочетании со светофильтром интенсивностью 1О50 эрг/см , с в теЬенйе 12 ч. После воздействия дополнительного света бактерии на 2 ч помещают в исходные условия, после чего клетки осаждают на центрифуге, разрушают ультразвуком 20000 кГц в течени 4 мин. Дезинтегрированные клетки подвергают экстракции смесью хлороформ метанол (2:1) в течение 20 мин на холоде 4 С на качалке. Центрифугированием 4000x20 мин разделяют фракции. Нужную фракцию (в хлороформе) отбирают; и частично рьшаривают под вакуум при 30 С. К раствору добавляют пирогаллол и КОН. ПроизБод$гг омыление, дл чего раствор КИПЯТЯТ 3 мин, на делительной воронке отделяют фракцию неомыляемьк пипидов, растворяя их в изооктане. Эту фракцию отделяют, вьша- ризают и растворяют в хлороформе. Про бу в объеме ОД мл запускают в хрома тографическую колонку, каполненкую Sef сЗ&ХLH-20. Происходит разделение фракций неомыляемых липидоз на от дельные компонентьи Отбирают нужную фракцию, содержащую витамин Е ( сС-то коферол) и лроизЬодят количественную оценку выхода продукта. В данном режи ме выход витамина Е составляет 1,2 м г сухого веса. Идентификацию витамина Е, , например dL -токоферола проводят на основании данных тонкослой вой хроматографии, гедь-фильтрации и УФ-спектров поглощения. Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках SHufo - (Чехословакия) в хлороформе. Для оС-токоферола R 0,6. Гельфильтрацию осуществляют на колонке (1,0x60 см) с Seplnodexl.H-20 (Швеция), подвижная фаза - хпороформ. Величина объема выхода d -токоферо ла 30,5-31,0 мл. Спектр поглощения характеризуется одним четким максимумом при JV295 нм. Во всех случаях ис пользуют синтетический oL -токоферол в качестве свидетеля. П р И--М е р 2. KyjrbTypy бактерий BctotriiorlTodosp-hq stioposhmkovii выращивают по примеру I на стационарной фазе (40-50 ч) роста, культуру освещают дополнительным светом спектральной области 330-360 нм в течение 24 ч интенсивностью 610 эрг/см с. Через 1 ч после прекращения воздействия дополнительным светом бактерии осазвдают, дезинтегрируют по примеру 1, Аналогично проводят экстракцию липидов и разделение их на хроматографической колонке, В этих условиях выход витамина Е составляет 0,9 мг на 1 г сухого веса. Идентификацию витаминй проводят по примеру 1. Примерз. Бактерии культивируют как указано в примере 1, Культуру освещают вспьпикой дслолнйтеггьного света спектрального диа1азона ЗО . 100О нм от лампы ИФП йООО i а-геасавностью Ю эрг/см с ь и-еченЕе 1О с. Вьзделение фракжн, содержащей витами Е проводят спустя 10 мин после освещения дополнитзльй.ым светом. В этих услсзЕяя fir,vi::,,u Витамина Е составляет 0,.ij. iv/f йе; 1. i- сухого веса. 1 р н 1- е р 4, Бактерии культивирую г по примеру 1. Освещение дополнительным светом проводят от импульсного источника Корона- А 337 нм, длительность вспьпики , интенсивность 10 эрг/см-с, частота следования вспышек 100 Гц, длительность облучения 10 мин. Выделение фракции, содержащей витамин Е Проводят спустя 2 ч после, прекращения освещения дополнительным светом. Выход витамина Е составляет 0,0 мг на 1 г сухого веса. Пример. б.Цактерии Rhodoftseudomonoj fp- (щтамм П ) выращивают на среде Ларсена-, описанной в примере I по Методике, изложенной в этом же примере. Культуру бактер{й освещают на логарифмической стадии роста светом спектрального состава 330-630 нм интенсивностью 10 эрг/см-с в течение 20 ч. Выделение фракции, содержащей витамин Е, проводят спустя 4 ч после прекращения дополнительного освещения. Выход витамина Е составляет 0,8 мг на 1 г сухого веса. Формула изобретения Способ получения витамина Е экстракцией исходного сырья хлороформметанольйой смесью и выделения и, омыленного кстракта хроматографическими метода-

5 430678

МИ, отличающийся тем, что,ческой или стационарной фазе роста свес келью повьпнения выхода целевого про-том спектрального диапазона 270-800 нм

дукта, в качестве исходного сырья ис-и интенсивностью не более 10 эрг/см-с

пользуют культуры микроорганизмов, на-в течение от 10 с до 48 ч, и выделяют

првмер рода Ectoiliiorhodospitae или целевой продукт после разрушения клеток

Rtiodopeeudomohos, выращенные причерез интервалы времени от 1 мин до

Дополнительном освещении в погарифми-48 ч после прекращения освещения.