СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ Советский патент 1974 года по МПК C12N9/24 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен способ получения литических ферментов путем культивирования актиномицетов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли.

С целью повышения активности литических ферментов по предлагаемому способу используют актиномицеты, относящиеся к виду griseinus, а культивирование осуществляют нри 43-45°С. При этом из актиномицетов griseinus используют штамм 11.

В 30-литровый ферментер заливают 16 л водопроводной воды с солями, г:

К2НР0432

MgSO4-7H2O0,8

(NH4)2SO416

СаСОз16

Дрожжи64

Дрожжевой автолизат160.

Отдельно заваривают 160 г растворимого крахмала в 1 л воды и заливают в ферментер. Затем среду стерилизуют в течение 30 мин при 120+5°С, после чего простерилизованную среду охлаждают до 45±3°С; рН среды составляет 6,0+0,1; объем среды 16 л. Среду засевают суспензией культуры Actinomyces griseinus-11, выращивают в течение суток при 43-45°С на этой же среде. Ферментацию ведут в течение 18 чяг при 44±1°С с постоянным неремешиван}1ем 300 об/мин и подачей воздуха 1,5 объема на 1 объем среды в 1 мин. По окончании ферментации активность ферментов, растворяющих клеточную оболочку дрожжей в культуральной жидкости, составляет 8000 ед/мл.

Активность литических ферментов в культуральной жидкости проводят по способу Tabata

ЛА,(-7-;Мх100Х.

/t

где ЛА - литическая активность; f - степень разбавления ферментного препарата;

йо - начальная оптическая плотность; dt - оптическая плотность через некоторое время;

d-E - разница оптических плотностей контрольного образца (до и после реакции), t - время инкубации 60 мин. Данный щтамм выделен из краснодарских почв и имеет следующие признаки.

Морфология. Спороносцы неспиральные, короткие, расположены метелками, споры палочковидные. Культура бесцветная, пигментов и бурого вещества не образует. Воздушный мицелий темно-серый.

Синтетическая среда. На нитратной среде с сахарозой рост хороший, колонии и

среда бесцветные. Воздушный мицелий темносерый.

На нитратной среде с сахарозой рост хороший, колонии и среда бесцветные, воздушный мицелий серый.

Органическая среда. На крахмальном агаре рост обильный, колонии и среда не окрашены. Воздушный мицелий серо-оливковый. На ломтиках картофеля колонии бесцветные с желтоватым оттенком. Среда окрашена и не буреет. Желатину разжижает быстро, молоко свертывает и нептонизирует, крахмал гидролизует быстро. Восстанавливает нитраты. Тирозиназа положительная.

Среда Треснера-Данга чернеет.

Отношение к углеводам. Ассимилирует глюкозу, глицерин, сахарозу, ксилозу, арабинозу, рамнозу. Антагонизм проявляет к грамположительным и грамотрицательным бактериям. Подавляет рост некоторых грибов и дрожжей.

Предложенный штамм Actinomyces griseinus в отличие от известных обладает повышенной способностью к биосинтезу литических ферментов, обладаюш,их широким спектром действия, а именно на клеточные стенки дрожжей, вырашиваемых как на углеводной, так и на углеводородной среде. Кроме того, комплекс литических ферментов актиномицета состоит из активных манноназ и глюканаз, определяющих его каталитические свойства.

Предмет изобретения

1.Способ получения литических ферментов путем культивирования актиномицетов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью повышения активности ферментов, используют актиномицеты, относящиеся к виду griseinus, а культивирование осуществляют при 43-45°С.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что из актиномицетов вида griseinus используют штамм 11.