Штамм астINомусеS RUтGеRSеNSIS N88-продуцент ферментов Советский патент 1983 года по МПК C12N1/00 C12P1/06 

Изобретение относится к микробиологической промьппленности- и касается нового штамма - продуцента ферментов, лизирующих клеточ.ные стенки микроорганизмов, используемых в пищевой промыитленности, меди цине, сельском хозяйстве. Йзвестер штамм роди Actinomyces а именно Actinomyces ciherosus За - Продуцент литических ферментов l Недостатком известного штамма является невысокая литическая акти нбсть продуцируемых ферменто1в. Целью изобретения является полу чение штамма микроорганизмов - про дуцента ферментов, лизирующих клет .ные стенки микроорганизмов, облала ющего высокой литической активност Предлагаемый штамм выделениз ПОДЗОЛИСТЫХ; почв южной заокской части Московской области. -Из вьщеленных многочисленных , актиномицёто в процессе стабилизирующего отбора отобран штамм Actinomyces rutgerse sis №88 как продуцент комплекса лизирующих ферментов, Лизирующее действйёна дрояйки и другие микроорганизмы проверяли методом агаризованных блоков на среде состава, г/л: KNO - 1,0; К2НРО4 0,5; NaCl - 0,5; MgS04 7Н2О - 0,5 CaCOj - 0,5, кормовые дройсжи 5,0, агар-агар - 20,0. Штамм Actinomyces rutgerservs i S №88 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под № 592 и во ВНИИ прикладной эмзимологии под № 151. Щтайм отлиааётся (3 уже , йэПВ ётййх; продуцентов лизирующих ферментов своими морфологическими, фйзиЪлогй ческими и культуральными признаками. - , . , , Штамм имеет следуюШую характе pHi:rf«K i. ;; /- ., . Морфологические признаки. Культуры бурые, воздушный мицел . серый или темно-серый. Средняя тол шина гиф 0,6-0,8 мк. Спороносцы Vi искривленные, иногда с неполными спиралями. СЛоры овальные и продол говатыё. Поверхность спор гладкая. Культуральные признаки штамма Actinomyces rutgersensis №88 на пе вые сутки роста. Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентой, г/л: кукурузный экстракт - 10,0 (по сырому весу), глюкоза - 5,0, NaCl - 5,0, {NN4)2804 - 3,5; CaCOj - 5,0/ Крак мал нерастворимый - 15,0; агар-ага 20,0. Воздушный мицелий отсутствуе субстратный мицелий бледно-медовый Кукурузная среда, состоящая из ВледутоМих компонёнтовV г/л: кукурузный экстракт - 10,0, NaCl - 3,0 ДМН4и504 - 3,0; СаСО- - 2,5; крахм нерастворимый - 10,0; агар-агар 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бле:Дно-медовый. Овсяная среда с дрожжевым экстрактом. Рост воздушного мицелия обильный, цвет соломенно-желтый .(ЛЗ), субстратный мицелий желтоватый. Среда Гаузе, состоящая из следующих компонентов, г/л; крахмал нерастворимый .- 2,0, MgS04 0,5; NsCl - 0,5, КМО - 1,0; К2НРО | 0,5, FeSO,- 0,01, агар-агар - 20,0. Воздушный мицелий отсутствует , субстратный мицелий бесцветный. Среда Ваксмана с глицерином. Воздушный мицелий белесый, субстратный мицелий бесцветный. Среда СР-1 с глюкозой следующего состава, г/л: СаСО - 0,7; KNO 0,7/ MgS04 7Н20 - 0,35 NaCl 0,35; К2НР04 - 0,53; РеЗОд - следы} глюкоза - 14,0; агар-агар - 20,0. Воздушныймйцёлий отсутствует, суб,обратный мицелий бесцветный. Сусло - агар.. Воздушный миЦелИй отсутствует, субстратный мицелий бесцветный. . Физиолого-биоз-симическнё свойства. Крахмал не гидролизует, желатину разжижает умеренно, молоко энергично свертывает на -четвертые сутки и слабо пептонизирует на 30-ые сутки. Меланоидных пйгйентов не образует.. Потребляет: глюкозу., арабинозу, .ксилозу, маннит, фруктозу7 не потребляет.: инозит, сахарозу, рамнозу и раффинозу. Антагонистические свойства. Обладает антагонйстйческими свойствами по отношению к дрожжам и бактериям родов Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Mi croc осей s , Пример. В Качестве посевного материала при.выращивании продуцента в колбах использовали семисуточную культуру Actinomyces rutgersen sis №88, выращенную на стандартной кукурузной среде №2 следующего состава, г/л: кукурузный экстракт -10,0, глюкоза 5,0; NaCl - 5,0; ( 3,5/ СаСО-} - 5,0, крахмал нерастворимый - 15,0; агар-агар - 20,О при 28-30°С, Споры смывали с косяка 15 г/ш дистиллированной стерильной воды, и в каждую колбу, вносил.и.по 3 мл споровой суспензии ( . спор в 1 мл )i. Для глубинного культивирования использовали среду следующего состава, г/л: К2НР04 - 2,5; МдЗОд-ТН О 1,0, NH4.C1 - 0,62;пекарские дрожжи - 2,5; соевая мука - 10,0; дрожжевой автолизат - 1 мл. Компоненты питательной среды растворяли в дистиллированной воде в вышеуказанной последовательности, рН среды перед стерилизацией 7,5. Культивирование вели в 750 милли метровых качалочных колбах по 50 мл среды в каждой колбе. Среду в колбах стерилизовали при 1,3 атм в течение 40 мин. Продолжительность культивирования 24-30 ч на круговых качалках при 220 об/мин. Литическую активность определяли турбидиметрическим методом. К 1 мл субстрата (суспензии дрожжей Candid добавляли 1 МП трис-буфера 0,2 М пр рН 7,0-7,2 и 2 мл культуральной жидкости или ферментного раствора, разведенного так, чтобы за 1 ч инкубации при .40с оптическая плотнос реакционной смеси измеряли до и пос ле инкубации (начальная экстинкция должнёи быть в пределах 0,7-0,8) на ФЭК-56 при длине волны 537 мм в кювете 1 мм с расстояниями между стенками. Расчет проводили по формуле; % лизиса субстрата . :1§. QQ где А - начальная экстинкция, В - конечная зкстинкция, Перечисление % лизиса субстрата на единицы лизирующей активности на мл культуральной жидкости: Лизирующая активность % лизиса разведение ед/мл, Д где Д - количество ферментного раствора в реакционной смеси. Штамм Actinomyces rutgersensis № 88 начинает синтезировать лизирующие ферменты через 24 ч культивирования и достигает максимума литической активности через 30 ч. Культуральная жидкость из Act. rutgersensis № 88 при разведении в 10 раз лизирует Candida utilts на 40-45%, Sacch. cerevfsiaeHa 30-35% , Escherichia coM - на 50-60.%, Microc. iуsodeichicus на 45-55%, Pseud. |fluorescens на 34-45%, Вас. subtt1 i s - на 40-50%. Выход ферментного препарата 17 г на 1 л культуральной, жидкости. Активность 20000-22000 ед/г (по отношению к дрожжам рода CandidaJj Лизирующий ферментный препарат из Асtinomyces гUtgersensiS № 88 содержит, мл/г: растворимых белков - 200-220, аминного азота 7,0-7,5, редуцирующих Сахаров - 4547. ;

ШТАММ ACTINOMYCESRUTGER - SENS IS №88 - ПРОДУЦЕНТ Ф'ЕРМЕНТОВ, ЛШИРУЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ МИКРООРГАНИЗМОВ,' штамм хранится во. Всесоюзной коллекции микроррганизмой под № 592 и депонирован Б музее'чистых культур В.НИН прикладной энзимо- логии под № 151 оМорфологические признаки.Культуры бурые, воздушный мицелий серый или темно-серый. Средняя толщина гиф 0,6-0,8 мк. Спороносцы искривленные, ;иногда с неполными спиралями. Споры овальные и про- • долговатые. Поверхность спор гладкая. , •Культуральные признаки.Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентов, г/л: кукурузный экстракт -. 10,Of глгоко- : за - 5,0; Naff - 5,0; (NH^}2St)4 -3,5, СаСО,^- 5,Ojкрахмал нерастворимый - 15,0; агар-агар - 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бледно-медовый.Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентов г/л: кукурузный экстракт - 10,0, MaCl - 3,0, (NH^^jSO^. - 3,0, СаСОч 2,5,' ' • крахмал нерастворимый - 10,0', агар- агарг20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бледно- медовый.','Овсяная среда с дрожжевым экстрак- TW. Рост воздушного мицелия обильный, цвет соломеннотжелтый, субстратный г-шцелий желтоватый.Среда Гаузё, Состоящая из следующих компонентов, г/л: крахмал нерастворимый - 20,0, MgS04'7 НуО - О , 5 ; Na С 1 • - 0,5; KNO^~ -~ 1,0/ К^НРО^ - 0,5', FeS04 - 0,01, агар- агар - 20,0. Воздушный ?иицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Среда ВаксйаМа с"глицерином, воздушный мицелий белесый, субстратный мицелий бёсцветнь1й.Среда СР-1 с глюкозой следующего состава, г/л: СаСО-} -KNO^-0,7, MgS04-7H20 - 0,35J NaCl - 0,35,' KjHPO^ --0,53; FeSO^, - следы; глюкоза - 14,0, агар-агар - 20,0. Воз- . душный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Сусло-агар. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Физиологе - биохимические свойства.Крахмал не тидролизует, желатину разжижает умеренно, молоко энергично свертывает на четвертые сутки и слабо пентонизирует на 30-ые сутки. Меланоидных пигментов не образует.Потребляет: глюкозу, арабинозу, ксилозу, маннит и фруктозу..Не потребляет: инозит, сахарозу, рамнозу ' и раффинозу. • • •Антагонистические свойства.Обладает антагонистическим свой- . ствами по o^THomeHinq к дрожжам и ёак- 'териям родов Bacillus Escherichia, Pseudomonas, Microcpccus.(Лcr*^о4^-sjbo >&