Способ получения литических ферментов Советский патент 1974 года по МПК C12D13/10 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способу получения литических ферментов, используемых в пищевой промышленности, медицине, сельском хозяйстве.

Известен способ получения литических ферментов путем культивирования Actinomyces на питате тьной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли.

С целью увеличения активности литических ферментов по предлагаемому способу культивирование осуществляют Actinomyces, относящихся к виду cinerosus. При этом из Actinomyces, cinerosus. используют щтамм За.

Предлагаемый штамм Actinomyces cinerosus шт. 3 а. выделен в 1971 г. из торфяпоболотной почвы. Выделение провод на среде СР-1 (г/л) с дрожжами рода Candida в качестве единственного источника углерода при рН 7,0 и при 28-ЗОС. Выделенную культуру подвергают многократной очистке путем рассева на среде СР-1, хранят выделенный штамм на среде СР-1.

Штамм имеет следующую характеристику. Морфология.

Воздушный мицелий беловато-серый. Культура бесцветная, в среду пигмент не выделяет. Спороносцы спиральные, растянутые

с 3-5 завитками. Споры овальные с гладкой

поверхностью.

Культуральные и физиологические свойства.

Среды СР-1, Чапека, на картофеле - рост хороший, воздушный мицелий беловато-серый. На крахмал-аммиачном агаре рост хороший, воздушный мицелий беловато-серый. Желатину разжижает быстро, молоко пентонизирует, на клетчатке растет умеренно, нитратов не восстанавливает, крахмал гидролизует умеренно.

Ассимилирует глюкозу, маннозу, сахарозу, галактозу, крахмал. Не усваивает арабинозу, мальтозу, фруктозу, инозит, лактозу, рамнозу, маннит, цитрат натрия, ацетат натрия.

На предлагаемой питательной среде следующего состава, %:

Соевая мука1

Пекарские дрожжи0,25

NH4C10,06

К2НРО40,25

Mg-S040,01

Дрожжевой автолизат0,01

образует литические ферменты, лизирующие кормовые дрожжи Candida utilis на 60-65% при разведении культуральной жидкости в 3 раза.

Способ осуществляют следующим образом. В водопроводную воду вносят следующие компоненты, %:

Соевую муку1

Пекарские дрожжи0,25

Двузамещенный фосфорнокислый калий0,25

Хлористый аммоний0,06

Сернокислый магний0,01

Дрожжевой автолизат0,01.

Полученную питательную среду стерилизуют и в качестве посевного материала используют четырехсуточную культуру Actinomyces cinerosus штамм За, выращенную на агаризованной среде СР-1, г/л:

СаСОз0,7

KNOs0,7

MgSO40,35

NaCl0,35

FeSO4Следы

Агар18,00

Культивирование антиномицета ведут глубинным способом при 28-30°С в течение 30-42 час. При этом среда аэрируется 6-7-ю объемами воздуха на 1 объем питательной среды. После культивирования мицелий отделяют центрифугированием при 3000 об/мин. Литическую активность ферментов определяют следующим образом.

К 1 мл суспензии дрожжей прибавляют 1 мл трис-буфера 0,067 М при рН 7,0 и 2 мл культуральной жидкости или ферментного раствора. Исходную оптическую плотность реакционной смеси доводят до экстинции 0,7-0,8 и определяют ее изменение на ФЭК-56, при л 537 мм в кювете с расстоянием между стенками 1 мм после инкубации при 40°С в течение 1 час.

Активность литических ферментов выражают в процентах снижения оптической плотности (ОД) по формуле:

ОД нач- ОД кон

од

-X 100

од „ач

Предмет изобретения

1.Способ получения литических ферментов путем культивирования Actinomyces на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности ферментов, культивирование осуществляют Actinomyces, относящихся к виду cinerosus.

2.Способ по п. I, отличающийся тем, что из Atinomyces cinerosus используют штамм За.