Штамм 50311а-продуцент о-дифенолоксидазы Советский патент 1974 года по МПК C12D13/10 C12K3/00 

1 .

Изобретеиие относится к микробиологической иромыншенности и касается нолучения нового И1тамма Penicillium adametzii Lai 5031 la, используемого для получения фермента о-дифеиилоксидазы.

Предлагаемый штамм может быть использован при очистке сточных вод от лигнина и его производных, для получения мономеров лигнина, например ванилиновой, п-оксибензойной, сиреневой и других ароматических кислот и мономеров.

Известен штамм Penicillium adametzii Lai 50311.

Предлагаемый штамм получай из штамма Penicillium adametzii Lai 50311 многоэтапной адаптацией к трудноусвояемому сульфатному лигнину ОСИПЫ и имеет следуюшую характеристику.

Морфология. Органическая среда. Суслоагар. Мицелий бесцветный, дерновинки зеленые, колонии снизу сине-зеленые с белыми краями шириной 1-2 мм. Для выращивания используется следующая жидкая лигнинсодержащая среда, г/л:

Сульфатный лигиин осины5,0

Nn4NO32,5

КП2Р041,5

MgSO4-7H2O0,5

FeSO4-7H2O0,01.

Коиидиеносцы бесцветные, одномутовчатые, размером 40-Ь 100X2,54-3,0 мкм, стеригмы размером 8X2,5-2,7 мкм, сближенные но 5-7 Б мутовке. Конидии щиповндные, круглые, в диаметре 2,5-3,0 мкм. Оболочка и ншны темно-корнчневого цвета.

Биохимические свойства. Штамм гидролнзует до 100% сульфатный лигнин осины на 60 сутки роста до ароматических кислот,

спиртов, фенолов (например, ванилиновый, га-оксибензойный, сиреневый, ванилинового спирта и фенола в зависимости от суток роста). Распад лигнина осуществляется на 3- 5 сутки.

Отношение к источники углерода. При росте на среде Чапека, содержащей в качестве нсточника углерода сульфатную целлюлозу ОСИПЫ, целлюлоза не разлагалась.

В дальнейшем изобретение поясняется примером получепия лигнинразрушающего фермента о-дифенолоксндазы при поверхностном способе культивирования продуцента-микромицета Penicillium adametzii Lai 5031 la. С 5-ти суточной культуры Penicillium adametzii Lai 5031 la, выращенной на сусло-агаре, производят смыв спор стерильной, водопроводной водой. Полученной споровой суспензией производят засев матрацов, содержащих по 200-250 мл лигнинсодержащей среды.

Л атрацы термостатируют при 27±2°С в тсчение 8-10 суток. Ферментный препарат получают отделением мицелия гриба от культуральной жидкости на фильтре. Концентрируют фильтрат на вакуум-выпарной установке или (вакуум-сушильном шкафу) до 1/10 первоночального объема. В концентрированной культуральной жидкости определяют активность о-дифенолоксидазы по окислению п-крезола колориметрическим методом на ФЭК-56М.

Активность определяют следующим образом.

К 1 мл культуральной жидкости прибавляют 0,5 мл 0,1М раствора га-крезола, 2,5 мл фосфатноцитратного буфера при рН 6,0. Через 1 час производят колориметрирование. Расчет содержания фермента производят по формуле

л-- Со,

-Со

Сх - искомая концентрация окисленного фенола и соответственно активность, мг/мл;

fx - оптическая плотность исследуемого раствора;

ЕО - оптическая плотность используемого фенола;

Со - концентрация используе лого субстрата, мг/мл.

Активность о-дифенолоксидазы, продуцируемой Penicillium adametzii Lai 5031 la - 0,05-0,1 мг/мл.

Предмет изобретения

Штамм Penicillium adametzii Lai 5031 la - продуцент о-дифенолоксидазы.

Морфология. Органическая среда. Суслоагар. Л ицелий бесцветный, дерновинки зеленые. Колонии снизу сине-зеленые с белыми краями шириною 1-2 мм. На жидкой среде, содержащей, г/л:

Сульфатный лигнин осины5,0

NH4N032,5

КН2РО41,5

MgSO4-7H2O0,5

FeSO4-7H2O0,01

конидиеносцы одномутовчатые размером 40-f-100X2,5-3,0 мкм, стеригмы размером 8X2,5-2,7 мкм, сближенные по 5-7 в мутовке. Конидии шиловидные, круглые, в диаметре 2,5-3,0 мкм. Оболочка и шипы темно-коричневого цвета.

Биохимические свойства. Штамм гидролизует до 100% сульфатный лигнин осины на 60 сутки роста до ароматических кислот, спиртов и фенолов.

Распад лигнина осуществляет с 3-5 суток.

Отношение к источнику углерода. При росте па среде Чапека, содержащей в качестве

источннка углерода сульфатную целлюлозу

осины, целлюлозу не усваивает.