Штамм @ @ 20171-продуцент @ -галактозидазы Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 C12N9/38 C12R1/80 

а

СП

4

VI

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм микроскопического гриба, который может быть использован для получения фер1|«нта/J-галактозидаэы, применяемого в пищевой, молочной промышленности и медицине для гидролиза молочного сахара - лактозы.

Известен штамм Curvularia inaequalis 75, обеспечивающий активность -галактозидазы 2-4 ед/мп. fl

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является штамм Curvularia inaequalis 75 - продуцент /i-галактозидазы, обеспечивающий активность фермента 2-4 ед./мл, Штамм культивируют при 28 °С в течение 2-5 сут глубинным способом. При выращивании на .полусинтетической ереде с лактозой в культуральную жидкость выделяется 92 ед./л/ 36 ед. остается в мицелии 2.

Одна.ко известный штамм обладает следугадими существенными недостатками,

Во-первых, изменяет свойства при хранении, ослиэняется, не обеспечивает стабильной активности , требует для биосинтеза фермента очень узкий диапазон рН 2,9 - 4,3, не пригоден для выращивания в поверхностных условиях.

Кроме того, штамм обладает низкой активностью jb -галактозидазы в культуральной жидкости, выделяет в нее около 60% всего образующегося фермента, остальная активность остается внутри клетки.

Целью изобретения является новый штамм Penicillium canescens 20171 продуцент /1 -галактозидазы.

Предлагаемый штамм микроскопического гриба Penicillium canescens 20171 выделен из почв Украинского государственного степного заповедни ка (Донецкая область), подвергнут рассеву с выделением моноконидиальной культуры, многократным пассажем на агаризованном восьмибаллинговом сусле и на агаризованной среде, Чапе ка с лактозой, а также хранению в

течение 7 лет.

Морфологические признаки, штамм

атоксичный, быстрорастущий, характеризуется хорошим спороношением при выращивании на агаризованных

средах. Мицелий хорошо развит, септированный, бесцветный. Конидиенос1ул 430-450 мкм длиной и 3,0-3,2 в диаметре отходят от войлочного мицелия, оболочка четко шероховатая Кисточки двухъярусные, растопыренны состоят из веточек (метуль}, несущи мутовки фиалид. Имеются и одномутовчатые кисточки; МетулИ длиной 13 ,17 и диаметром 2,0-2,8 мкм, сте

ригмы (фиалиды) 7-8x2,3 мкм. Конидии 2,0-2,2 мкм в диаметре, шаровидные, в молодом возрасте с гладкой оболочкой, в старом - шероховатые, образуются в цепочках, соединяющихся в колонки; с возрастом колонки становятся растопыренными.

Культуральные признаки. Штамм хорошо растет на искусственных средах {сусло-агаре, картофельно-глюкозном агаре, картофельном агаре) и синтетических агаризованиых средах (среда Чапека, Сабуро, РоленаТома, агаризованной среде с лактозой).

На среде Чапека колонии войлочнопушистые, дымчато-зеленовато-серые, с обратной стороны желтовато-оранжевого цвета, на 12-14-и день приобретают темно-коричневый тон.

Наблюдается следующий линейный рост колоний на агаризованных средах по дням.

Среда Чапека: 5-й день - 30 мм, 10-й день - 45 мм сусло-агаровая среда: 5-й день - 45 мм, 10-й день 68 MMt среда Ролена-Тома: 5-й день 40 мм, 10-й день - 58 мм; картофельно-глюкозная среда: 5-й день 38 мм, 10-й день - 58 мм; среда Сабуро: 5-.и день - 36 мм, 10-й день 56 мм; агаризованная среда с лактозой: 5-й день - 35 мм, 10-й день - 62 мм.

На отрубях растет хорошо.

Отношение к углеродному питанию: усваивает лактозу, сахарозу, глюкозу, галактозу, мальтозу, фруктозу, арабинозу, крахмал, инулин, сорбит, маннит и др.; этанол и метанол слабо.

Отношение к азотному питанию: хорошо усваивает нитратный, нитритный азот, лучше аммонийныйV из органических источников азота ассимилирует пептон, мочевину, кукурузный экстракт и др.

Отношение к кислороду: облигатный аэроб.

Отношение к температуре: мезофил, оптимальная температура роста 28 30° С.

Отношение к кислотности среды: растет в широких пределах рН 2 ,0 9,0.

Штамм Penicillium canescens 20171 выращивали на среде прототипа, содержащей, г/л: лактозу 30, , 3, КзНРО 1, MgS04-7H20 0,5, КС1 0,5, кукурузный экстракт 10 мл/л,- с начальным рН среды 4,1 - 4,3 в аэробных условиях ПРИ28 °С в течение 66-70 ч, активность/i--галактозидазы в культуральйой жидкости составила 0,56 ед./мл, активность в мицелии не превышает 2% от активности в культуральной жидкости.

3 1065476 4

При выращивании Ponicillium с а-ладает повышенной способностью к

nescens 20171 на комплексных средах,биосинтезу целевого продукта -гасодерхсащих соевуй муку, активностьлактозидазы, устойчивым ростом в

/3-галактозидазы в культуральнойшироком диапазоне начальной кислотжидкости достигает 18-20 ед./мл,нести среды (рН 2-9), пригодностью

Проверкой, проведенной в течение5 для.поверхностного культивирования.

года, установлено, что при храненииМикроскопический гриб Penicillium

и пересевах уровень ферментативнойcanescens 20171 представляет .собой

активности Penicillium canescensновый штамм - продуцент -галакто20171 не снижается.зидады со стойкими морфологическими

Таким образом, выделенный новый10 и,биохимическими признаками и свойсТ

штамм по сравнению с прототипом об-вами.

Шгамм Penicillium canescens 20171. (Всесоюзная коллекция промышленных культур микроорганизмов ВНИИгенетика, регистрационный номер ЦМПМ F- 178) - продуцент р-галактозидазы. (Л С