Штамп плесневого гриба -т-продуцент целлолитических ферментов Советский патент 1977 года по МПК C12K1/00 C12D13/10 

1

Изобретение относится к микробиологии, в частности к новым штаммам плесневого гриба, используемого для гидролиза целлюлозосодержащих растительных субстратов при силосовании грубых кормов в производстве спирта, а также для получепия сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности.

Известны различные штаммы плесневых грибов, применяемых для гидролиза целлюлозосодержащих растительных субстратов, например, штамм Trichoderma veride Ген-К-910-продуцент целлолитических ферме тов I.

Наиболее близок к изобретению известный штамм плесневого гриба Trichoderma lignorum 6с-24, используемый для биосинтеза целлолитических ферментов 2.

Известные штаммы обладают невыгодной активностью целлолитических ферментов и обильным конидиеобразованием, что приводит к загрязнению окружающей среды и ухудшает условия работы.

Цель изобретения - получение штамма с повышенной активностью целлолитических ферментов и слабым конидиеобразованием, обеспечивающим, следовательно, увеличение выхода конечных продуктов гидролиза.

Штамм плесневого гриба Trichoderma specics Т-продуцент целлолитических ферментов выделен из иочвы и хранится в коллекции культур Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПА1Р-83.

Активность целлолитических ферментов штамма стабилизирована при длительном культивировании на агаризованной среде с таурином (2-аминоэтансульфоновая кислота) с концентрацией 0,001%.

Штамм Trichoderma species Т-продуцент целлолитических ферментов культивируется в поверхиостиых условиях на стерильной, твердой, увлажненной до 64-65% питательной среде.

Активность целлюлозы Сгфермента в готовой культуре составляет 400-500 ед/г сухой культуры.

Активность целлюлозы d определяют по гидролизу фильтровальной бумаги по известной методике.

В готовой культуре за 48-60 ч роста конидии почти отсутствуют.

Морфологические признаки. Мицелий бесцветный, распростертый. Растет дерновинкой или паутинообразно. Дерновннки подушковидные, выпуклые, сначала белые, потом желтозеленые и темно-зеленые. Конидиеносцы в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицелия, большей частью вильчато- или тройчаторазветвленные, бесцветные. Стеригмы бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные мзтовками по 2-3 или одиночные размером 6,5-13,5x3,5-4 мкм. Конидии овально-шаровидные в диаметре 3,5-5,0 (5,5) мкм, собранные в головки, в массе белые, желто-зеленые или темно-зелеиые.

Культуральные признаки. Синтетическая среда Чапека с сахарозой. Посевы уколом. Через 7 суток роста при температуре 28- 30°С колонии распростертые, рост неоднородный, иногда дерновинкой. Диаметр колоний 9-10 см. Вначале развивается бесцветный стелягцийся мицелий. Воздушный мицелий тонкий, слегка приподнятый, бесцветный. Конидии в виде зеленых и белых подушечек, расположенных в центре. Среда окрашивается в ярко-желтый цвет, образует желтый пигмент, который диффундирует в среду.

Сусло-агар (4,8 баллинга + 1 % измельченной фильтровальной бумаги). Колонии распростертые, через 4-5 суток роста при температуре 28-30°С до 70 мм. Воздушный мицелий прижатый, ииогда паутииистый, рост неоднородный, иногда дерновинкой. На 5-6-е сутки роста по краям появляются конидии, доходящне до центра колонии, вначале светлые, затем с зеленоватым оттенком. Обратная сторона агара окрашена в ярко-желтый цвет. Образует желтый пигмент, который диффундирует в среду.

Среда состава, %: измельченная фильтровальная бумага-1; (NH4)2SO4 - 0,15; NaNOs -0,15; КН2Р04 -0,15; MgSO4-7H20- 0,05; 10%-ный экстракт пшеничных отрубей 300 мл; водопроводная вода до 1 л плюс 2% агара. Посев уколом. Колонии распростертые, мицелий иногда паутинистый, иногда дерновинкой. Конидии появляются на 4-5-е сутки по краям, затем разрастаются но всей колонии. Обратная сторона окрашена в слабожелтый цвет.

Синтетическая среда Чапека с крахмалом (среда Гаузе-1). Посев уколом. Через 10- 12 суток роста при 28-30°С диаметр колоний 4-5 мм, в месте укола на 12-15-е сутки образуются конидии в виде редких белых или бледно-зеленых с желтоватым оттенком нодушечек. Среда окрашивается в интенсивно-желтый цвет.

Ломтики картофеля. Посев штрихом. Через 14-15 суток роста при 28-30°С колония закрывает всю поверхность ломтика - сплошпая кочковатая дерновинка, окрашенная в светло-зеленый цвет с отдельными участками темно-зеленого или светло-желтого цвета, конидиеобразование обильное, субстрат с обратной стороны интенсивно окрашен в ярко-желтый цвет.

Физиологические признаки. Отношение к источникам углерода. Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, сахарозу, глицерин.

Клетчатку гидролизует до глюкозы, крахмал гидролизует очень слабо.

Отношение к источнику азота. Питраты восстанавливает к 30-ти суткам инкубирования.

Желатину не разжижает за 30 ч инкубации.

Молоко пептонизирует очень слабо при рН

Формула изобретения

Штамм плесневого гриба Trichoderma species Т-продуцент целлолитических ферментов, хранится в коллекции культур Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМР-83.

Морфологические признаки. Мицелий бесцветный, распростертый. Растет дерновинкой или паутинообразно. Дерновинки подушковидные, выпуклые, сначала белые, потом желтозеленые и темно-зеленые.

Конидиеносцы в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицелия большей частью вильчато- или тройчаторазветвленные, бесцветные. Стеригмы бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные мутовками по 2-3 или одиночные размером 6,5-13,5X3,5-4,0 мкм. Конидии овально-шаровидные, в диаметре 3,5-5,0 (5,5) мкм, собранные в головки, в массе белые, желто-зеленые или темно-зеленые. Культуральные признаки. Синтетическая среда Чапека с сахарозой. Посевы уколом, через 7 суток роста при температуре 28-30°С колонии распростертые, рост неоднородный, иногда дерновинкой. Диаметр колоний 9- 10 см. Вначале развивается бесцветный стеляидийся мицелий. Воздушный мицелий тонкий, слегка приподнятый, бесцветный. Конидии в виде зеленых и белых подушечек, расположенных в центре. Среда окрашивается в яркожелтый цвет, образует желтый пигмент, который диффундирует в среду. Сусло-агар (4,8 баллинга + 1 % измельченной фильтровальной бумаги). Колонии распростертые, через 4-5 суток роста при температуре 28-30°С до 70 мм. Воздушный мицелий прижатый, иногда паутинистый, рост неоднородный, иногда дерновинкой. На 5-6-е сутки роста по краям появляются колонии, доходяш,ие до центра колонии, вначале светлые, затем с зеленоватым оттенком. Обратная сторона агара окрашена в ярко-желтый цвет. Образует желтый пигмент, который диффундирует в среду.

Среда состава, %: измельченная фильтровальная бумага 1; (NH4)2SO4 0,15; NaNOs 0,15; КН2РО4 0,1; MgS04-7n2O 0,05; 10%-ный экстракт из пшеничных отрубей 300 мл, водопроволчная вода до 1 л плюс 2% агара. Посев уколом. Колонии распростертые, мицелий иногда паутинистый, иногда дерновиикой. Колонии появляются на 4-5-е сутки по краям, затем разрастаются по всей колонии. Обратная сторона окрашена в слабо-желтый цвет.

Синтетическая среда Чапека с крахмалом (среда Гаузе-1). Через 10-12 суток роста при температуре 28-30°С диаметр колоний 4-5 мм, в месте укола на 12-15-е сутки образуются копидин в виде редких белых или бледно-зеленых с желтоватым оттенком подушечек. Среда окрашивается в интенсивно-желтый цвет.

Ломтики картофеля. Посев штрихом. Через 14-15 суток роста при температуре 28-30°С колония закрывает всю поверхность ломтика - сплошная кочковатая дерновинка, окрашенная в светло-зеленый цвет с отдельными участами темно-зеленого или светло-желтого цвета, конидиеобразование обильное, субстрат с обратной стороны интенсивно окрашен в ярко-желтый свет.

Физиологические признаки. Отношение к источникам углерода. Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, caxapoзз глицерин.

Клетчатку гидролизует до глюкозы. Крахмал гидролизует очень слабо.

Отношение к источнику азота. Нитраты восстанавливают к 30-ти суткам инкубирования.

Желатину не разжижает за 30 ч инкубации.

Молоко неитонизирует очень слабо при рН 7-8.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Авторское свидетельство СССР №399522, кл. С 12D 13/10, 1971.

2.Авторское свидетельство СССР № 482494, кл. С I2D 13/10, 1975.