Способ выделения лецитиназного ферментного комплекса Советский патент 1975 года по МПК C12D13/10 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности -к выделению ферментов, являющихся побочной продукцией биосинтеза бактерий Bacillius thuringiensis.

Известен способ выделения лецитияазного ферментного комплекса путем фракционирования его сульфатом аммония, отделения образующегося осадка и его промывки.

С целью упрощения выделения ферментного лецитиназяого комплекса из культур.альной Жидкости Bacillius thuringiensis, являющейся отходом ироизводства бактериальных инсектицидов, по предлагаемому способу перед фракционированием сульфатом аммония к культуральной жидкости при перемешивании добавляют 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, выпадающие при этом в осадок белки отделяют, промывают и фракционируют сульфатом аммония -в фосфатном буферном растворе при рН 7,5-8,0.

Пример. Культуры Baciillus thuringiensis 4 сертипа выращивают в течение 3-4 суток в объеме 200 мл мясо-пептонного бульона «а колбочной качалке при 30-35°С. Микробные клетки отделяют от культур альной жидкости центрифугированием в течение 10-15 мин при 2-3 тыс. об/мин.

Белки культуральной жидкости осаждают на холоде 5%-ным раствором трихлоруксус в каждом случае берут навеску в 6 мг. Исходная активность культуры бактерий составляет 0,1-Ii2 мг % 30 РаОв.

ной кислоты, который прибавляют ыебольшиМи порциями при перемешиваняи жидкости. В зоне рН 4,0-3,5 появляются белые или слегка желтоватые хлопья белка, со временем выпадающие в осадок. Последний от надосадочной жидкости отделяют центрифугированием и промывают дистиляированиой водой. Промытый осадок фракционируют сульфатом аммония ИЗ буферных растворов.

Осадок белков отделяют центрифугированием и промывают дистиллированной водой.

В таблице приведены результаты определения активности лецитиназных ферментных комплексов, выделенных фракционированием сульфатом аммония из различных буферных растворов.

Таким образом иаибольшее количество лецитиназы концентрируется во П и П1 фракциях фосфатного буферного раствора, которые соответствуют 20-30% насыщению сульфлтом аммония.

Выход лецитиназного ферментного комплекса составляет 0,5-0,6 г на 1 л культуральной жидкости.

Предмет изобретения

Способ выделения лецити.назйого ферментного комплекса из культуральной жидкости, например, Bacillus thuringiensis путем фракционирования его сульфатом аммония, отделения образующегося осадка и его промывки, отличающийся тем, что, с целью упрощения выделения лецитиназиого ферментного Комплекса из культуральной жидкости, являющейся отходом производства бактериальных инсектицидов, перед фракционированием к культуральной жидкости при перемешивании добавляют 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, полученный осадок

белков отделяют, промывают и фракционируют в фосфатном буфере при рН 7,5-8,0.