Способ получения человеческого интерферона Советский патент 1975 года по МПК A61K27/00 

на 1 мл среды 199, содержащей 5-10% плазмы (или сыворотки) и вышеуказанное количество антибиотиков, и инкубируют при 37°С 18-20 час. По окончании инкубации клетки отделяют центрифугированием при 1500- 2000 g в течение 15 мин, осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость повторно центрифугируют. К очищенной жидкости добавляют 10-20%-1ный pacTBQp соляной «ислоты до рН 2,2-2,4 и выде|рживают не менее 4-5 суток, при 4°С, после чего отбирают образцы для контроля- стерильности, токсичности и активности. Стерильность контролируют высевом 1 мл раствора на бульон с тиогликоллатом и бульон Сабуро. После 10 суток инкубации бульан с тиогликоллатом при 37°С и бульон Сабуро при 20°С посевы должны оставаться стерильными. Вирусологическую сте|рильность определяют введением по 0,2 мл жидкости в пробирки с 3-суточной культурой журвных фибробластов и в аллантоисную полость 10дневных куриных эмбрионов. Через 3-4 суток культивирования при 37°С при наблюдении под микроскопом в монослое клеток не должно быть признаков цитопатического действия, а аллантоисная жидкость не должна соде|ржать гемагглютининов. Противовирусную активность раствора определяют по задержке цитопатического действия вируса везикулярного стоматита, взятого в дозе 100 ТЦДзо в пе1рвичной культуре клеток кожно-мышечной ткани 10-12-недельных эмбрионов человека или в перевиваемой культуре диплоидных клеток человека. Титр противовирусной активности должен составлять не менее 32 ед/мл в культуре фибробластов и не менее 250 ед/мл в культуре диплоидных клеток. Определение токсичности проводят в монослойной культуре клеток кожно-мышечной ткани эмбрионов человека, причем через 2-3 суток инкубации при 37°С не должно быть никаких признаков дегенерации монослоя, а морфология клеток должна оставаться неизменной.

Весь цикл приготовления интерферона и его контроля занимает 14-20 дней. За это время получают результаты дополнительных исследований крови (реакция Вассе1рмана и две осадочные реакции, посев крови на бактериологическую стерильность). В случае отрицательных реакций полученный интерферон пропускают через молекулярные разделители (например, Сефадкс Г-25 «грубый), разливают в сте|рильные ампулы и замораживают при температуре . Затем из ампул откачивают воздух и подопревают до 30-35°С в течение 48-72 час. После высушивания ампулы запаивают под вакуумом. Остаточная влажность не должна превышать . Готовую продукцию вновь контролируют на безвредность и вирусологическую стерильность, токсичность, а также безвредность путем внутрибрюшинного введения белым мышам весом 10-12 г по 0,5 мл раствора препарата. При наблюдении в течение 5 суток мыши должлы оставаться здчровыми. Кроме того, контролируют физические свойства: растворимость и остаточную влажность препарата.

Предмет изобретения

Способ получения человеческого инте1рферона путем заражения клеток вирусом интерфероногеном, инкубации с последующим выделением, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и расширения сырьевой базы для его получения, в качестве субстрата используют клетки костного мозга, взятого от трупа человека.