Способ прижизненной диагностики пневмоцистоза Советский патент 1975 года по МПК C12K1/00 A61B10/00 

1

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике паразитарных заболеваний.

Известен способ прижизненной диагностики пневмоцистоза нутем иммунофлюоресцентного исследоваНИЯ мокроты или слюны больных с последующей индикацией цист-антигенов в исследуемом материале.

Для повышения достоверности диагностики предлагается исследовать мазки из глубоких отделов дыхательных путей.

При осуществлении способа исследуют Л1азки слизи из глубоких отделов дыхательных путей детей и взрослых. У здоровых детей исследуемый материал забирают в амбулаторных условиях тампоном во время прямой ларингоскопии, у больных детей - в условиях стационара с применением фторотанового наркоза, у взрослых - после ингаляции водяного пара в течение 3-5 мин. Мазки подсущивают на воздухе и фиксируют смесью Никифорова в течение 20 мин. Реакцию флуоресцирующих антител ставят в непрямом варианте.

Схема постановки реакции: исследуемый препарат, содержащий антиген + диагностическая немеченая сыворотка (кроличья)+люминесцирующая сыворотка против глобулинов кролика.

Диагностическую сыворотку получают путем иммунизации кроликов антигеном из легкого ребенка, погибшего от нневмоцистозной пневмонии. Диагноз пневмоцистоза подтверждается клиническими, рентгенологическими данными, а также результатами патологоанатомического, гистологического и паразитологического исследования. Рабочее разведение сыворотки 1 : 500.

В качестве специфической оценки расценнвают свечение оболочки цист Pneumocystis carinii. Свечение трофозоитов в данных препаратах трудно отдифференцировать от неспецифического свечения элементов ткани, артефактов, поэтому его во внимание не принимают. Интенсивность свечения оценивают по 4-крестовой системе. Реакцию считают положительной при интенсивном ( + + + или + + + + ) свечении оболочки цисты. Равномерное бледно-зеленое или серо-зеленое свечение всей цисты считают неснецифическим и оценивают иа + + или +.

Одновременно с опытом ставят ряд контролей.

Реакцию считают положительной при наличии яркого свечения в первом контроле и при его отсутствии во всех остальных контролях.

Помимо специфической люминесценции отмечают также неспецифическую люминесценцию тканевых элементов препарата антигена,

за счет наличия нормальных гетерологичных,

3

тканевых и противобелковых антител в сыворотке кроликов, иммунизированных тканевым препаратом. Для контрастирования неспецифического свечения применяют бычий альбумин, меченный родамином.

Контрастное окрашивание производят на втором этапе обработки препаратов. При этом применяют смесь люминесцирующей антиглобулиновой сыворотки с альбумином, меченным родамином.

Для титрования компонентов смеси к специфической флуоресцирующей сыворотке, взятой с таким расчетом, чтобы ее концентрация в смеси была равна рабочему разведению, добавляют различные разведения люминесцирующето альбумина, а затем смеси наносят на мазки. Рабочим разведением альбумина считают такую его концентрацию, которая обеспечивает оранжево-красное или бурое неспецифическое свечение препарата и зеленое свечение цист Pneumocystis carinii.

Предмет изобретения

Способ прижизненной диагностики шневмоцистоза путем иммунофлюоресцентного исследования мазков слизи, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности диагностики, исследуют мазки из глубоких отделов дыхательных путей.