Способ диагностики туберкулеза Советский патент 1984 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к медицине преимущественно к средствам лабораторной дифференциальной диагностики туберкулеза. Известен способ диагностики тубер кулеза, включакщий приготовлениегистологического препарата, нанесение на него в равных объемах специфической нелюминесцирующей иммунной сыворотки и люминесцирующей сьгооротки против глобулинов животного, от которого получена нелюминесцирующая сыворотка. При наличии искомого антигена наблюдают специфическое периферическое свечение в люминесцентном микроскопе (НИФ) l . Однако известный способ недостаточно точен так как в срезах тканей или мазках, полученных из тканей больного, препятствием к реакции НИФ являются фиксированные в тканях И1чмуноглобулйны, блокирующие соответ ствующие искомые детерминаты антигена . Наличие же блокирующих агентов обуславливает недовыявление иско мого антигена, что даже в случае присутствия антигенной субстанции возбудителя туберкулеза в исследуемом патологическом материале она не дает спе1цифического стечения, что неизбежно ведет к ошибкам в диагнос тике, и туберкулез остается неидентифицированным там, где он присутствует. Кроме TorOj последовательное двухэтапное нанесение специфических иммунных сывороток на исследуемый препарат требует дублирования таких манипуляций, как инкубированиеs, промывка и высушивание препарата, что делает осуществление способа более громоздким. Цель изобретения - повьппение точ ности диагностики. Поставленная цель достигается тем что согласно способу диагностики туберкулеза, включающему приготовле ние гистологического препарата нанесение на него в равных объемах сп щ- фической нелюминесциругощей иммунно сыворотки и люминесцирующей сыворот ки против глобулинов того животного от которого получена нелюминесцирую щая сьгаоротка, препарат последовател но обрабатьгаают неразведенным 2-мер каптоэтанолом и Oi,1%-HbiM раствором пепсина а нелюштесгщрутдую и люми кесцирующую сыворотки вносят в виде смеси, имеющей концентрагдаю антител 2г1 соответственно. 0082 Пример 1. Больной Т,, 42 года. Поступил с жа,побами на боли в левом боку, одышку, кашель. Заболел остро в апреле 5 температура повысилась до 38 . Появились боли в боку. Диагностирована пневмония, при пункции жидкости не получено. Рентгенологически в левой половине грудной клетки в задне-наружном отделе обнаружена интенсивная овальная тень с вьтуклым двойным контуром. Установили левосторонний осумкованный плеврит. Реакция Манту с 2ТЕ отрицательная. Аспирационная пункция плевры: определены лимфоциты, мезотелиальные клетки. Больному произведена плевробиопсия: гистологически определены участки фиброзированной плевры с элементами продуктивного неспецифического воспаления с преобладанием гистиоцитов, заключение - хронический неспецифический осумкованный плеврит . В целях подтверждения неспецифической этиологии заболевания на мазках-отпечатках плевры больного была поставлена реакция непрямой иммунофлюоресценции (реакция НИФ) предложенным способом. Для этого берут три мазка, один опытный и два контрольных . Опытный мазок помещают в неразведенный 2-меркаптоэтанол так, чтобы последний полностью покрыл мазок, и вьдерживают в течение 10 мин при после чего высушенный препарат помещают аналогичным образом в Osl-ный раствор пепсина и выдерживают в нем в течение часа при кЪмнатной температуре . Затем на высушенный аппарат наносят заранее приготовленную смесь спе1Ц1фических иммунных сывороток и инкубируют обработанной таким образом мазок в течение 30 мин при 37 С. После чего мазок промывают водопроводной водой, высушивают на воздухе при комнатной темперутуре и просматривают в люминесцентном микроскопе. При этом наблюдали спе y фичecкoe (изумрудно-зеленое) свечение по периферии клетокj на основании чего сделали заключение о присутствии туберкулезного возбудителя в исследуемом материале. Окончательный клинический диагноз: туберкулезный осумкованньа1 плеврит. Одновременно для контроля специфичности реакции второй (контрольный) мазок обрабатывают смесью нормальной кроличьей сыворотки и люминесцирующей промьшшенной сыворотки против глобулинов кролика. При наблюдении мазка в люминесцентном микроскопе отмечали отсутствие специфического свечения . Для контроля самой промьшшенной сыворотки третий (контрольньй) мазок обрабатывают только промьшшенной люминесцирующей сывороткой. При просмотре мазка в люминесцентном микроскопе отмечали отсутствие специфичес кого свечения. В дальнейшем биопроба с плевральной жидкостью больного оказалась положительной, что подтвер дило туберкулезную зтиологию заболевания , Диагноз был также подтвержден динамическим наблюдением за больным и положительным эффектом от противотуберкулезного лечения. В данном случае предлагаемым способом была проведена дифференциальная диагностика туберкулёза и неспецифического воспалительного заболевания легких. .Пример 2. Больная П., 20 лет Перенесла острое респираторное заболевание с субфибрильной температурой по вечерам. К врачу не обращалась. При флюорографическом обследовании выявлены изменения в легких. Была госпитализирована с диагнозом диссеминированного туберкулеза легких. Противотуберкулезное лечение эффекта не дало. В дальнейшем проводилась дифференциальная диагностика между туберкулезом и саркоидозом Бека . При рентгенотомографическом обследовании в обоих легких диффузия мелкоочаговая диссеминация, незначительная деформация рисунка и его избыточность. Предполагается саркоидоз Бека. Реакция манту 2ТЕ отрицательная. Бронхоскопически: изменения со стороны бронхиального дерева не выявлены. Пункция внутригрудных лимфатических узлов нерезультативна: в пунктате кровь, лимфоидные элементы. В промывных водах бронхов микробактерии туберкулеза методом посева не выявлены. Больной был проведен торакоцентоз с биопсией правого легкого: в мазках-отпечатках легкого цитологически обнаружены единич ные эпителиоидные клетки, гистиоциты макрофаги. Данная цитограмма не позволила убедительно высказаться в пользу саркоидоза. В целях дифференциации туберкулеза и саркоидоза больная быпа обсле08 .4 дована предлагаемым способом. Для этого берут три мазка-отпечатка из плевры, один опытный и два контрольных. Опытный мазок помещают в неразведенный 2-меркаптоэтанол и вьщерживают в течение 10 мин при Д С, после чего высушенный препарат помещают в 0,1%-ный раствор пепсина и выдерживают в нем в течение часа. Затем на высушенный препарат наносят смесь специфических иммунных сывороток и инкубируют обработанньп мазок в течение 30 мин при 37°С. После чего мазок промьтают водопроводной водой, высушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе. При этом специфического свечения не наблюдали. В двух контрольных мазках свечение также отсутствовало. На основании этого туберкулез бып исключен. Несколько позже гистологические исследования показали наличие в биопсированной ткани легкого полей фиброза с единичными эпителиоидно-клеточными гранулемами в стадии фиброзирования без казеоза. На основании результатов обследования больной предлагаемым способом и предположительных данных морфологического исследования больной окончательно выставлен диагноз: саркоидоз Бека, легочная форма. В дальнейшем диагноз был подтвержден положительным клинико-рентгенологическим эффектом гормональной терапии: значительное рассасывание очаговых теней, улучшение общего состояния больной. В данном случае предлагаемым способом была проведена дифференциальная диагностика между туберкулезом и гранулематозным заболеванием - саркоидозом Бека. П р и м е р 3. Больной К., 43 года . При флюорографическом обследова- . НИИ выявлены изменения в 5„ правого легкого. С диагнозом: опухоль верхней доли правого легкого бып госпитализирован. При рентгенотомогр фичес-. ком обследовании в верхней доле правого легкого на границе 5i и bg обнаружен округлый однородный очерченный фокус р.2,5x2 см с тяжистым верхнемедиальным контуром. Трахея, главные и устья долевых бронхов проходимы. Природа патологического образования не ясна. В условиях искус ственного пневмоторакса проведена пункциокная биопсия. В пунктуате: цитологически опухолевые клетки не выявлены, определяется бронхиальный эпителий, макрофаги, единичные лимфоциты. В мокроте и промывных водах бронхов микробактерии туберкулеза методами бактериоскопии и посева не обнаружены. Опухолевые клетки в мокроте и промывных водах бронхов не выявлены. Больном была произведена TopKaoTONmH с торакоцентезом справа, биопсией легких с дренированием плев ральной полости. Гистологически в пределах биопсированной ткани участки плевро-пневмосклероза, очаговые лим1)оидноклеточные инфильтраты альвеолит. Цитологически: в мазках-отпечатках легкого обнаружены гистиоциты, макрофаги, лимфоидные элементы. В целях дифференциации туберкулеза и злокачественной опухоли больной бьш обследован предлагаемым способом Для этого берут мазки-отпечатки легких, один опытный и два контрольных. Опытный мазок помещают в неразведенный 2-меркаптозтанол и выдерживают в течение 10 мин при 4°Cj после чего высушенный препарат помещают в 0,1%ный раствор пепсина и вьдерживают в нем в течение часа. Затем на высушенный препарат наносят смесь специфических иммунных сывороток и инкубируфт обработанный таким образом мазок в течение 30 мин при После чего мазок промывают водопроводной водой и просматривают в люьшнесцентном микроскопе. При этом наблюдали яркое специфическое внутриклеточное свечение. В двух контрольных мазках свечение отсутствовало. На основании результатов обследования больного предлагаемым способом и дан ных клинико-рентгено;тогического обследования больному выставлен окончательный диагноз: туберкулема легко го. Впоследствии больной бьш проопе рирован и гистологически диагноз бьш подтвержден: гомогенная солятарная туберкулема легких. 1 В данном случае предлагаемым способом была проведена дифференциальна диагностика между туберкулезом и опухолью легкого (онкозаболеванием). При этом, специфическую, не мечен ную люминесцирующим красителеМг сыворотку к микобактериям туберкулеза получают от кролика по общепринятой методике. Вторая же сыворотка против 086 глобулинов кролика, меченная люминесцирующим красителем, выпускается промышленным способом. Смесь указанных сывороток приготавливают следующим образом. К спе1щфической нелюминесцирующей сыворотке микобактериям туберкулеза, полученной от кролика, в разведении, равном двойному титру, добавляют в эквивалентном количестве промышленную сыворотку с люминесцентным красителем в разведении, равном одному титру5 после чего полученную смесь инкубируют в течение 30 мин при . Приготовленная таким образом смесь сохраняет свои реактивные свойства н течение 7 дней. Это позволяет с учетом планируемых лабораторных исследований приготовить необходимое количество сывороточной смеси на неделю. Например, если в течение недели проходят обследование 24 больных, а на одного больного расходуют 0,5мл смеси (0525- -0,25) , то общий объем одноразово приготавливаемой смеси составляет 12 мл. Если рабочее разведение промышленной сыворотки составляет, например 1:32, то получаемую нeлю инecциpyющyFO сыворотку к микробактериям туберкулеза берут в разведении 1:16. Концентрация пепсина в растворе в том виде, в каком она указана в формуле изобретения, выбрана на основании данных, полученных экспериментальным путем (табл. 1), Как видно из табл. № 1, концентрация 0,1%-го, раствора пепсина является самой оптиматАЬНойэ при которой во всех заведомо положительных случаях получено специфическое свечение, В табл., 1 приведены испытания различных концетраций пепсина. Соотношение спегдафической иммунпой сыворотки к микробактериям туберкулеза к люминесцирующей сыворотки при 2:1 получено на основании экспериментальных данных (табл. 2). Как видно из табл. 2, соотношение частвующих в реакции сывороток в величине 2:1 является самым оптимальным, при котором во всех заведомо положительных 50 с.лучаях получено вкутриклеточноэ свечение, Предложенный способ в целях диффеpeнциaJ bKoй днагностикИ был апробирован у 50 больньКэ у которых диагноз туберкулеза стоял под вопросом.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА, включающий приготовление гистологического препарата, нанесение на него в равных объемах специфической нелюминесцирующей иммунной сыворотки и люминесцирующей сыворотки против глобулинов того животного, от которого получена нелюминесцирую- щая сыворотка, отличающийс я тем, что, с целью повышения точности диагностики, препарат последовательно обрабатывают неразведенным 2-меркаптоэтанолом и 0,1%-ным раствором пепсина, а нелюминесцирующую и люминесцирующую сыворотки вносят в виде смеси, имеющей концентрацию антител 2:1 соответственно.