Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты Советский патент 1975 года по МПК C07G7/26 

Изобретение относится к технологии получения биохимических препаратов.

Известен способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок рыб, по которому молоки последовательно гомогенизируют в присутствии буфера и детергента, прогревают при 60-75°С 15 мин, охлаждают до О-4°С, выдерживают 2-3 час при этой температуре, примесные белки осаждают хлороформом, а дезоксирибонуклеиновую кислоту - этиловым спиртом. Однако известный способ является трудоемким.

По предлагаемому способу прогревание проводят в течение 1-4 час, а очистку осуществляют сорбцией реакционной массы на кизельгуре с последующей элюцией целевого продукта.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. 100 г замороженных молок рыб гомогенизируют в 500 мл холодного цитратносолевого раствора в течение 3 мин при 8000 Об/мин. Гомогенат центрифугируют на центрифуге ПЛР-1 в течение 20 мин при 2500 об/мин и температуре -3°С. Надосадочную жидкость сливают, в осадке получают ядерный материал.

Осадок ядерного материала переносят в макроизмельчитель тканей РТ-1, заливают 350 мл цитратно-солевого раствора и гомогенизируют 1 мин при 4000 об/мин. Гомогенат

2

помещают в 10 л-ый аппарат, добавляют при перемещивании механической мещалкой 2,4 л цитратно-солевого раствора и 680 мл 6%-ного раствора додецилсульфата натрия, не прекращая перемещивания, нагревают до 60°С и выдерживают при этой температуре 1,5 часа. По окончании выдержки при работающей мещалке добавляют 4 л цитратно-солевой смеси, содержащей 29% поваренной соли и 4,8%

трехзамещенного цитрата натрия и продолжают помещивание еще 1,5 часа при 60°С. По истечении этого времени массу из аппарата сливают в кристаллизатор и охлаждают до -2 -4°С.

В смеситель емкостью 30 л помещают 4,8 кг кизельгура, охлажденную массу с предыдущей стадии, все перемещивают 3 мин так, чтобы вся охлажденная масса сорбировалась на кизельгур. Элюируют ДНК с кизельгура 4 л цитратно-солевой смеси, содержащей 14,5% поваренной соли и 2,4% трехзамещенного нитрата натрия, при перемещивании в течение 30 мин. Отделяют элюат от кизельгура фильтрацией на 50 нутч-фильтре

через слой бальтинга и фильтровальной бумаги. Элюацию повторяют 3 раза, элюаты объединяют.

В стакан помещают 1 л 96%-ного холодного этанола и приливают к нему 1 л элюата.

Смесь перемещивают осторожным перелива3нием из одного стакана в другой до тех пор, пока не сформируется нитевидный осадок ДНК. Сгусток осадка пинцетом переносят в стакан с 50%-ным этанолом, дважды тщательно ополаскивают и помещают в сборник,5 предварительно заполненный 7%-ным зтанолом. Выход ДНК составляет 3 г от загрузки (3% от веса загруженных молок). Характеристика ДНК.10 Молекулярный вес 15-10, содернсание белка 1,5%, гиперхромный эффект 41%, ширина плавления 5,1. 4878 -д 97 , . . 4 ,. Oopjviy.ла изобретения Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем гомогенизации молок рыб, обработки детергентом и буферным раствором, прогревания реакционной массы при 60-70°С, выделения и очистки целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, прогревание проводят в течение 1 - 4 час, а очистку осуществляют сорбцией реакционной массы на кизельгуре с последующей элюцией целевого продукта,