СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНОВОГО КОМПЛЕКСА Российский патент 1998 года по МПК A61K35/60 

Описание патента на изобретение RU2122856C1

Изобретение относится к получению биологически активных веществ, которые находят применение в медицине.

Известен способ выделения ДНК (Патент РФ 2026864, МКИ6 C 07 H 21/04), включающий обработку крови раствором хлорида триметилоктадециламмония в концентрации 0,5-1% в трис-HCl-буфере, солюбилизацию в 1-1,5 M растворе NaCl, и осаждении ДНК этанолом.

Известен способ производства натриевой соли ДНК из животного сырья (Патент РФ N 2005724, МКИ6 C 07 H 21/04). Способ включает измельчение и гомогенизацию в цитратно-солевом растворе, обработку гомогената детергентом и концентрированным раствором хлористого натрия, обработку реакционной массы ультразвуком с частотой 8-35 кГц и интенсивностью 0,2-2,0 Вт/см2, смешиванием ее с кизельгуром, при соотношении сорбент: реакционная масса 1:5-25, фильтрование с последующим концентрированием барофильгирацией, осаждение продукта этиловым спиртом и сушку осадка соли ДНК при 20-60oC.

Известен способ получения дезоксирибонуrлеиновой кислоты (Авт. свид. N 487897/51) М Кл. C 07 G 7/026. Опубл. 15.10.75.

Способ включает гомогенизацию замороженных молок в холодном цитратно-солевом растворе, центрифугирование при температуре минус 3oC. Образовавшийся осадок ядерного материала в макроизмельчителе заливают цитратно-солевым раствором и гомогенизируют. В гомогенат при перемешивании добавляют цитратно-солевой раствор и 6% додецилсульфата натрия при 60oC в течение 1,5 часа. По истечении времени добавляют цитратно-солевую смесь, содержащую 29% поваренной соли и 4,8% трехзамещенного цитрата натрия, продолжая перемешивать 1,5 часа при 60oC. Затем массу охлаждают, помещают кизельгур, перемешивают 3 мин, чтобы вся охлажденная масса сорбировалась на кизельгур. Элюируют ДНК с кизельгура цитратно-солевой смесью, содержащей 14,5% поваренной соли и 2,4% трехзамещенного нитрата натрия. Отделяют элюат фильтрацией через слой бельтинга и фильтровальной бумаги. Элюат заливают 96% холодным этанолом, смесь перемешивают до сформирования нитевидного осадка ДНК. ДНК промывается дважды 50% этанолом, затем 7% этанолом.

Известен способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения (Патент РФ N 2017496, МКИ5 A 61 K 35/60).

Способ включает измельчение и гомогенизацию в цитратно-солевом растворе (ССЦ), трехкратную промывку ядерного материала ССЦ. Затем отмытый ядерный материал помещают в реактор с ССЦ, и 6% раствором додецилсульфата натрия в 45% этиловом спирте, нагревают до 60oC, добавляют равный объем раствора 5 M хлористого натрия, перемешивают, охлаждают до 12-16oC; обрабатывают реакционную массу ультразвуком, отделяют раствор ДНК от осадка балластных веществ фильтрацией реакционной массы через кизельгур на нутч-фильтре; концентрируют фильтрат на мембране с размером пор 0,45 мкм (потери ДНК при этом до 3%), отмывают концентрат диафильтрацией на этой же мембране, до отрицательной реакции на белок в пермеате.

Полученная натриевая соль ДНК имеет следующие характеристики:
- содержание белка не более 1,5%
- молекулярная масса 450 кДальтон
- молекулярный эффект 44%
- содержание РНК не более 2%
- содержание полисахаридов не более 2%.

В качестве прототипа выбран способ получения протаминов (1.144.700 МКИ4 A 61 K 37/08, 35/60), включающий очистку молок рыб от жира и соединительной ткани, гомогенизацию в растворе Рингера, фильтрование, центрифугирование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомогенизацию с последующим выделением целевого продукта. Повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатном буфере pH 4,6, содержащем 1,4 M натрия хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выделяют целевой продукт сорбцией на катионообменнике.

Задача, решаемая изобретением, - получение нуклеопротеинового комплекса с содержанием ДНК не менее 65%.

Сущность способа заключается в следующем: сырье - текучие молоки рыб, измельчают до фарша и обрабатывают 7-10% раствором хлорида натрия при температуре кипения в течение 2,5-3,5 часов при соотношении сырье:раствор соли равном 1: (4-5), после чего экстракт ДНК отделяют от плотной части, проводят его ультрафильтрацию с концентрацией до содержания сухих веществ 1,8 - 3,0 и концентрат сушат. Сухой продукт обрабатывают этанолом при 40-50oC при соотношении 1:(4-6) и сушат на воздухе.

Полученный продукт характеризуется следующими показателями: Внешний вид - аморфный порошок
Цвет - от белого до светло-кремового
Запах - свойственный, специфический, без постороннего
Массовая доля влаги, не более - 11%
Массовая доля основного вещества, не менее - 65%.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1.

290 г текучих молок лососевых обрабатывают 7% раствором NaCl в соотношении 1: 4 (сырье:раствор соли) в течение 2,5 часов при температуре 100oC. Смесь фильтруют через марлю, после чего подают на проточную центрифугу. Очищенный экстракт подвергают ультрафильтрации с концентрированием до содержания сухих веществ, равным 1,8%. Концентрированный экстракт направляют в распылительную сушилку MAPC-1, при температуре распыляемого воздуха на входе 200oC, на выходе 85oC. Сухой продукт обрабатывают 96% этиловым спиртом при соотношении 1:3, при температуре 40oC и сушат при комнатной температуре. Вес полученного препарата равен 17 г, что составляет 6% выхода ДНК, при содержании ДНК равном 69%.

Пример 2.

3 кг измельченного до фарша сырья обрабатывают 10% раствором NaCl в соотношении 1: 5 (сырье : 10% раствор NaCl). Экстрагирование проводят в течение 3,5 часов при температуре 105oC. Затем смесь подвергают грубой фильтрации через марлю, после чего подают на проточную центрифугу. Полученный экстракт подвергают ультрафильтрации через плоские мембраны 100000 Дальтон. Концентрированный раствор нуклеопротеина содержит 3% сухих веществ, концентрирование проводят при комнатной температуре 25oC.

Сушку концентрированного экстракта проводят на распылительной сушке марки MAPC-1 при температуре распыляемого воздуха на входе 210oC, на выходе 92oC.

Для удаления липидов сухой препарат промывают нагретым до 50oC этиловым спиртом в соотношении 1:5, готовый препарат нуклеопротеина сушат на воздухе при комнатной температуре.

Вес препарата - 75 г
Выход ДНК - 3,05
Содержание ДНК - 68%
Пример 3.

Получение нуклеинового комплекса из 1000 г текучих молок проводят в условиях примера 1, но сушку концентрированного экстракта ДНК проводят сублимационным способом. Для этого экстракт наливают в кюветы слоем не более 10 мм, замораживают при температуре -30oC и сублимируют в течение 36 часов, доводя конечную температуру сушки до +20oC. Вес полученного препарата равен 59 г, что составляет 6% выхода ДНК, при содержании ДНК равной 69%.

Пример 4.

Получение нуклеинового комплекса из 2 кг измельченного до фарша сырья проводят в условиях примера 2, но сушку концентрированного экстракта ДНК проводят в вакууме при 10-1 мм рт.ст. при температуре 80oC. Вес полученного препарата равен 75 г, что составляет 4,0% выхода ДНК, при содержании ДНК равном 68%.

Пример 5.

Получение нуклеинового комплекса из 1000 г измельченного до фарша сырья проводят в условиях примера 2, но сушку концентрированного экстракта ДНК проводят в вакууме при 10-2 мм рт.ст. При температуре 60oC. Вес полученного препарата равен 37,5 г, что составляет 3,6% выхода ДНК при содержании ДНК равной 67%.

Похожие патенты RU2122856C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНОВОГО КОМПЛЕКСА ИЗ ОТХОДОВ ПРОИЗВОДСТВА ЛИДАЗЫ 1995
  • Эпштейн Леонид Мендельевич
  • Касьяненко Юлия Ивановна
  • Петров Вениамин Филиппович
  • Фарцейгер Анатолий Григорьевич
  • Казьянин Александр Викторович
RU2098107C1
СПОСОБ БЕЗОТХОДНОЙ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ХИТИНСОДЕРЖАЩЕГО СЫРЬЯ 1997
  • Левоньков С.В.
  • Купина Н.М.
  • Блинов Ю.Г.
RU2123269C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПРОТЕОЛИЗА И СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИЩЕВЫХ РЫБНЫХ ПРОДУКТОВ 1996
  • Миленина Н.И.
  • Слуцкая Т.Н.
  • Логачева О.В.
  • Андреев Н.Г.
  • Якуш Е.В.
  • Наседкин А.В.
  • Ковалев Н.Н.
RU2103887C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДНК ИЗ МОЛОК ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 2012
  • Албулов Алексей Иванович
  • Фролова Марина Алексеевна
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Васильченко Ольга Михайловна
  • Шинкарев Сергей Михайлович
  • Гринь Андрей Владимирович
  • Рогов Роман Васильевич
  • Немцев Дмитрий Сергеевич
RU2488634C1
ПИЩЕВАЯ ЭМУЛЬСИЯ 1997
  • Роль Л.Н.
  • Якуш Е.В.
RU2113803C1
СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ВНУТРЕННОСТЕЙ ГОЛОТУРИЙ С ПОЛУЧЕНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ "ТИНГОЛ-2" И "ЭРОГОЛ" 2001
  • Слуцкая Т.Н.
  • Тимчишина Г.Н.
  • Павель К.Г.
RU2215532C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОЛИЗАТА ИЗ ГИДРОБИОНТОВ, СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ТРИТЕРПЕНОВЫХ ГЛИКОЗИДОВ 1995
  • Блинов Ю.Г.
  • Загородная Г.И.
  • Павель К.Г.
  • Слуцкая Т.Н.
  • Тимчишина Г.Н.
  • Чумак А.Д.
  • Шульгина Л.В.
RU2095000C1
СПОСОБ ПЕРЕРАБОТКИ КРАСНЫХ ВОДОРОСЛЕЙ 1995
  • Подкорытова А.В.
  • Кадникова И.А.
  • Кушева О.А.
  • Соколова В.М.
  • Калинкин Б.В.
RU2113131C1
ПРОДУКТ, ОБОГАЩЕННЫЙ СВОБОДНЫМИ АМИНОКИСЛОТАМИ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2000
  • Пивненко Т.Н.
  • Давидович В.В.
  • Позднякова Ю.М.
  • Эпштейн Л.М.
RU2171066C1
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПАШТЕТНЫХ КОНСЕРВОВ (ВАРИАНТЫ) 1997
  • Ярочкин А.П.
  • Вахрушев И.Н.
RU2110180C1

Реферат патента 1998 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНОВОГО КОМПЛЕКСА

Способ включает измельчение рыбных молок до фарша, обработку его 7-10%-ным раствором хлорида натрия при соотношении сырье: раствор соли 1:(4-5) в течение 2,5-3,5 ч при температуре кипения, отделение экстракта ДНК от плотной части, ультрафильтрацию с концентрированием экстракта до содержания сухих веществ 1,8-3%, сушку препарата, обработку его этанолом при 40-50oС, сушку на воздухе. Технический результат: выход ДНК 4,5-6,0%, содержание ДНК - не менее 65%. 3 з.п. ф-лы.

Формула изобретения RU 2 122 856 C1

1. Способ получения нуклеопротеинового комплекса, включающий измельчение рыбных молок, обработку его раствором солей, отделение экстракта, выделение из него конечного продукта и сушку, отличающийся тем, что измельченные молоки обрабатывают 7 - 10%-ным раствором хлорида натрия при соотношении сырья: раствор соли, равном 1: (4-5), при температуре кипения в течение 2,5-3,5 ч, экстракт ДНК отделяют и направляют на ультрафильтрацию с концентрированием до содержания сухих веществ 1,8 - 3,0%, концентрированный экстракт сушат, после чего сухой продукт обрабатывают этанолом при температуре 40 - 50oC в соотношении продукт : этанол, равном 1 : (3-6), и сушат на воздухе. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушка концентрированного экстракта ДНК проводят распылительным способом при температуре распыляемого воздуха на входе сушилки, равной 225±25oC, а на выходе - 90±5oC. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушку концентрированного экстракта ДНК проводят сублимационным способом при температуре -30...+20oС. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушку концентрированного экстракта ДНК проводят в вакууме при 10-1 - 10-2 мм рт.ст. при температуре 60 - 80oС.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1998 года RU2122856C1

Способ получения протаминов 1982
  • Рыбин Владимир Кириллович
  • Макаров Николай Васильевич
SU1144700A1
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК ИЗ МОЛОК ОСЕТРОВЫХ РЫБ (ЕГО ВАРИАНТЫ) 1993
  • Аносова И.Г.
  • Конарев А.А.
  • Карпов И.Н.
  • Кочеткова М.Г.
  • Асафов А.В.
  • Безюлев В.В.
RU2034554C1

RU 2 122 856 C1

Авторы

Эпштейн Л.М.

Касьяненко Ю.И.

Артюков А.А.

Даты

1998-12-10Публикация

1995-06-28Подача