Способ диагностики кислородной недостаточности Советский патент 1977 года по МПК A61B10/00 G01N33/16 

ке. Перед опытом агар расплавляют на водяной бане и смешивают с равным объемом мединал-вероналового буфера (рН 8,6). После смешения буфера и агара концентрация агара 1%, ионная сила 0,06.

Перед электрофорезом теплый раствор агарового геля наносят на 9 предметных стекол (26X76 мм), чтобы образовался слой геля толш,иной 2 мм.

Разделение изоферментов продолжается 3- 3,5 ч при температуре О-2°С, сила тока 55- 60 мА, напряжение 90 В.

После окончания электрофореза предметные стекла (9) со слоем агара переносят в кювету из органического стекла и поверх агарового носителя наливают приготовленную непосредственно перед инкубацией смесь.

Состав инкубационной смеси: лактат натрия (0,2 М раствор 3,5 мл, рН 7,0); никотинамидадениндиноклеотид (НАД) (25 мг в 2 мл воды); нитросиний тетразолит (15 мг на 2 мл воды); цианистый натрий или цианистый калий (3 мл 0,05 М раствор в фосфатном буфере, рП 7,4); феназинметасульфат (2 мг на 2 мл воды); фосфатный буфер, рН 7,4 (50 мл), инкубация в этой смеси продолжается 120- 140 мин при 37°С. После инкубации субстратную смесь сливают и электрофореграммы несколько раз промывают дистиллированной водой, фиксируют 2 ч в смеси: уксусная кислота; этиловый спирт; вода (5:70:25). Затем предметные стекла с агаровым гелем осторожно извлекают и агаровым слоем вниз кладут на тройной слой хроматографической бумаги. Через 12-16 ч из агарового геля образуется сухая пленка, плотно прилегающая к предметному стеклу.

Активность изоферментов оценивают после денситометрии, либо фото.метрии и расчета относительной активности в процентах.

Наблюдениями группы больных в 27 человек с поражением бронхо-легочного аппарата в возрасте от 25 до 40 лет и контрольной группы в 25 человек в возрасте от 17 до 40 лет установлено, что использование предлагаемого способа диагностики выявило у клинически здоровых лиц в возрасте от 17 до 40 лет дополнительную фракцию лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в количестве 3,30±0,33% от всей активности ЛДГ эритроцитов (Р 0,001).

У больных уже в начальных стадиях кислородной недостаточности увеличение этой фракции достигает более 100-120%.

Таким образом, увеличение содержания дополнительной анодной фракции изофермента ЛДГ, расположенной между ЛДГ2 и ЛДГз, позволяет судить о гипоксии в клинически скрытых формах дыхательной недостаточности.

Формула изобретения

Способ диагностики кислородной недостаточности, заключающийся в определении активности гликолитических ферментов, отличающийся тем, что, с целью выявления начальных стадий кислородной недостаточности, определяют в эритроцитах с помощью электрофореза дополнительную анодную фракцию

изофер.мента лактатдегидрогеназы, расположенную между лактатдегидрогеназой - 2 и лактатдегидрогеназой - 3, при содержании которой свыше 4% от общей активности диагностируют раннюю стадию гипоксии.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. Маркелов И. М. «Оценка активности изоферментов в аспекте современных проблем реанимации. Афтореферат докторской диссертации. Л., 1971, 3.