Способ получения дрожжей Советский патент 1977 года по МПК C12D13/06 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ Концентрацию л-парафина (между 0,04 п 0,12 вес. %, преимущественно между 0,08 и 0,10 вес. %) регулируют различными методами, например, измереиием расхода азота, ироцеита клеточной массы или измерением выхода углекислого газа. Величину рН суспеизии культуры доводят до заданной величины добавкой ш,елочи, например, натрового щелока или едкого кали. Для контроля из суспензии культуры отбирают пробы, чтобы определить вес сухого вещества и содержание азота в массе дрожжевых клеток. После этого определяют нормы роста и время удвоения клеточной массы. Когда сухой вес дрожжей при следующих друг за другом отборах проб больше не возрастает логарифмически, ферментация заканчивается. Отделение дрожжевой массы производят декантированием или центрифугированием при многократном промывании водой. Получают пастообразную массу дрожжевых клеток, которая содержит еще 75-90 вес. % воды. Сущку производят, например, вальцевую, с псевдоожиженным слоем или распылительную. Высушенный продукт содержит 2-5 вес. % воды и 45-60 вес. % сырого белка. Доля аминокислот в последнем составляет 90-95%, нуклеиновых кислот - 3-6%. Полученная сухая дрожжевая масса пригодна для применения в качестве источника белка в пищевых продуктах и в корме для животных. Пример 1. Штамм Candida lipolytica, который находится на трубочке косого агара следующего состава, вес. %: Мясной экстракт2,5 Дрожжевой экстракт5,0 Мясоиептон10,0 Глюкоза10,0 NaCl10,0 Агар2,5 промывают декантацией 4 мл дистиллированной воды или физиологического раствора хлористого натрия и пересевают в стерильных условиях в колбу Эрленмейера объемом 2 л, в которой находится 250 мл жидкой питательной среды (рН 5,5) предварительной культуры следующего состава, вес. %: (NH4)2SO40,53 КНгРО 0,40 Na2HPO4-12H2O0,20 MgSO4-7H200,02 HCl0,02 rt-Парафин1,50 Микроэлементы0,10 Ферментацию осуществляют в ферментационном котле объемом 14 л, который загружают 10 л жидкой питательной среды следующего состава, вес. %: (NN4)28041,00 КН2РО40,40 Na2HPO4-12H200,20 MgS04-7H200,20 KCl0,02 Жидкую питательную среду с рН 4,0, стерилизуют 45 мин нри 12ГС. Кроме того, отдельно стерилизуют 300 г (3 вес. %) л-парафина с 10-14 атома.ми углерода. Перед посевом основной культуры к жидкой питательной среде добавляют 100 г (1 вес. %) л-парафина. Затравливают жидкую питательную среду в стерильных условиях двумя порциями по 250 мл предварительной культуры, которую встряхивают 48-72 час при 28°С. Затравленную таким путем питательную среду перемещнвают 48-64 ч при 28°С, аэрации (1 л воздуха на 1 л раствора культуры н I мпн) с помощью турбинной мешалки. Величину рН корректируют в случае необходимости добавкой 2 н. стерильного NaOH. Во время логарифмической фазы ферментации концентрацию я-парафина поддерживают между 0,08 и 0,10 вес. %. Для этого при уменьшении выделения С02 из клеток автоматически добавляют остальные количества л-парафина, пока снова не повышается выброс СОгС целью контроля из суспенз ги культуры отбирают пробы для определения сухого веса и азота в массе дрожжевых клеток. По окончании логарифмической фазы роста производят центрнфугирование, промывают клетки водой и затем осуществляют распылительную сушку. Полученный продукт содержит (вес. %): сырой белок 56,7, амииокислоты 54,9, нуклеиновые кислоты 3,5. Пример 2. Штамм Candida viswanathii выращивают как в примере 1. Затем в ферментациопый котел объемом 14 л вводят 9 л жидкой питательной среды с указанным в примере 1 составом и добавляют 0,5 вес. % стерилизованного парафина. Жидкую питательную среду используют для посева и перемещивают при температуре 30°С и аэрации 1 л/л/мин с помощью турбинной мешалки с числом оборотов 250 об/мин. Величину рН 4,0 поддерживают добавкой стерильного натрового щелока. Во время логарифмической фазы ферментации концентрация л-парафина сохраняется между 0,08 и 1,0 вес. %. Регулирование этой концентрации, контроль способа, а также отделение и обработку полученной массы клеток производят как в примере 1. После распылительной сушки получают продукт состава (вес. %): сырой белок 46,6, аминокислоты 42,0, нуклеиновые кислоты 4,1, сырая зола 3,05. Пример 3. Штамм Candida parapsilosls сначала выращивают (как в примере 1) в ферментационном котле объемом 10 л. Полученную таким путем суспензию культуры переносят затем в ферментационный котел объемом 200 л, который загружают 150 л следующей жидкой питательной среды, вес. %: (NH4)2S041,00 КН2РО40,40 К2НР040,20 Na2HP04-12H200,20 NaCl0,02

MgS04-7H200,02

д-Парафин ()0,50

Величину рН жидкой питательной среды устанавливают нри помощи полуконцентрированной фосфорной кислоты до 5,0. Затем стерилизуют 20 мин при 120°С и давлении 1,4 атм. После стерилизации величина рН 4,5-5,0.

Затем производят ферментацию культуры в течение 40-48 ч при 28°С, аэрации 1 л/л/мин, давлении 0,3 атм, при перемешивании двумя мешалками со скоростью 250 об/мин. Во время логарифмической фазы ферментации концентрацию устанавливаются для п-парафина между 0,08 и 0,10 вес. %, причем при уменьшении выброса углекислого газа добавляют остальные количества п-парафина, пока снова не повышается выброс углекислого газа. Величину рН 3,5-4,0 устанавливают добавкой стерильного натрового щелока. Момент окончания ферментации определяют как и в примере 1.

Полученную суспензию культуры применяют как посевной материал для ферментера объемом 2000 л. Состав жидкой питательной среды и величина рН остаются те же, что и для вышеописанной ферментации. Ферментер стерилизуют 20 мин при 120°С и давлении 1,4 ати, при перемешивании со скоростью 210 об/мин. После стерилизации величина рН 4,0-4,5.

Последующую ферментацию производят при 28°С, аэрации 1 л/л/мин, давлении 0,3 ати и при перемешивании двумя мешалками со скоростью 210 об/мин. Величину рН 3,0-4,5 во время ферментации поддерживают по средством стерильного натрового щелока.

Способ контролируют отборами проб для проверки стерильности, для измерения величины рН, для определения сухого веса и азота в массе дрожжевых клеток.

Концентрацию /г-парафина поддерживают во время логарифмической фазы роста между 0,08 и 0,10 вес. % и дополняют, как описано выше, по мере выброса углекислого газа. По окончании логарифмической фазы роста суспензию культуры нагревают некоторое время до 55°С и затем охлаждают до 18°С. Величина рН 3,5-4,5.

Полученную суспензию культуры (1850 л) с содержанием сухой массы 23 г на 1 л центрифугируют в отстойной шнековой центрифуге, итделенные таким образом влажные дрожжевые клетки суспендируют в опресненной воде и получают суспензию с содержанием сухой массы 10-15 вес. %, которую интенсивно перемешивают в соответствующем сосуде при 15-18°С; при этом в течение 1 ч вымываются из жидкой питательной среды сопутствующие вещества и компоненты. После повторного центрифугирования с опресненной водой получают дрожжевую суспензию из 20-25 вес. %, ее снова перемешивают и центрифугируют. Промытые дрожжевые клетки суспендируют в суспензию из 40-50 вес. % и подвергают распылительной сушке.

Получают 36 кг светлого клеточного продукта со слабым запахом дрожжей, содержащего (вес. %): сырой белок 47,9; аминокислоты 43,6; (из них 57,8 вес. % незаменимых аминокислот) нуклеиновые кислоты 3,9; сырая зола 3,7.

Пример 4. Штамм Candida quilliermondii ферментируют, как описано в примере 3, в ферментационном котле (объемом 2000 л) в 1900 л суспензии культуры. Способ осуществляют как описано в примере 3. Получают 38 кг клеточного продукта со слабым запахом дрожжей, который содержит, вес. %: сырой белок 48,8, аминокислоты 45,1, нуклеиновые кислоты 3,6, сырая зола 3,5.

Формула изобретения

Способ получения дрожжей вида Candida путем ферментации в аэробных условиях на питательной среде, содержащей в качестве единственного источника углерода п-парафины, с последующим дополнительным непрерывным введением /г-парафинов в логарифмической фазе роста дрожжевых клеток и выделением целевого продукта, отличающийс я тем, что, с целью снижения содержания нуклеиновых кислот в продукте, ферментацию ведут на я-парафинах с 8-23 атомами углерода в концентрации 0,04-0,12 вес. % от культуральной жидкости.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Патент Великобритании № 1294810, кл. C6F2X, 1972.