Способ получения фосфолипазы д Советский патент 1977 года по МПК A61K35/78 C07G7/22 C12D13/10 

1

Изобретение относится к технической биохимии, а именно к способам получения фосфолипазы D и может быть использовано в медицине и-пищевой промышленности.

Известен способ получения фосфолипазы D,включающий экстракцию белков из семян хлопчатника, осаждение целевого фермента и его адсорбционную очистку из раствора 1.

Одна полученная по этому способу фосфолипаза D нестабильна в растворах,содержащих сульфат аммония,и теряет свою каталитическую активность.

С целью повышения выхода и каталитической активности фермента по предлагаемому способу экстракцию белков осуществляют трис-буфером с рН 7-9, при этом адсорбционную очис та у проводят на силикагеле.

Концентрация трис-буфера равна О,01-О,1 М, а раствор имеет концентрацию 0,1-1,0 г/л. по белку.

Способ заключается Б том, что экс1-ракцию белков, проводят трис-буфером концентрацией 0,01-0,1 М, рН 7-9 и адсорбируют фосфолипазу после растворения. Адсорбцию проводят из разбавленного раствора

конпентращ1ей 0,1-1,0 г/л по белку и кол- личестве силикагеля 2О-120 г/п при

о,течение 15 мин - 24 ч.

Пример , Навеску cesiim хлопчатника размельчают и экстрагируют десятикратаым объемом О,1 Л трис-буфера, рН 8,8 ,гамогенизируюг и отделяют растворимые белки от осадка центрифугированием. К недостаточной жидкости добавляют два объема охлажденного ацетона (-10 С) и перемешивают. Образовавшийся осадок отделяют декантацией, промывают ацетоном и растворяют в воде. Доводят рН до 6 расвором 1 н. СИдСООН и нагревают 15 мнн при 50 С. Выпавший осадок удаляют центрифугированием (15 мин при 18000g). Разбавляют раствор ОД М ацетатным буфером, рН 5,6 до концент тацик О,1 мг/м по содержанию белка и к раствору добавляют снликагель КСК К« 2 из расчета SO г/п и оставляют инкубироваться не .енее 15 ми Адсорбированную фосфолипазу D отделяют от раствора центрифугиров/тем (1 О мин ЭООб). Использование пресшагаемого способа получения фосфопипазы D повышает йыход фсюфолипазы D в 1,8-2,5 раза; увепичива ет каталитическую активность попучендого препарата в 3-6 , раз; фсюфолипазу D олучают в адсорбированной на силикагеле не растворимой форме и многократно исполь зуют. .Формула изобретений 1. Способ получении фосфопипазы U, Эклкнающий экстракцию белков из сем5Ш зшопчатника, осаждение целевого фермента и его адсорбционную очистку из раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и каталитической активности фермента, экстракцию белков осуществляют трис-буфером с рН 7-9, при этом адсорбционную очистку проводят на сияикагеле. 2. Способ по п. 1, отличающийс я тем, что концентрация трис-буфера равна 0,01-0,1 М, а раствор имеет коннентрацию 0,1-1,0 г/л по белку. Источники информахдаи, принятые во внимание при экспертизе: 1. Авторское свидетельство №353725, кл, А 61 К 35/78, 1972.