Способ получения антибиотика Советский патент 1977 года по МПК C12D9/00 

со свойствами других культур ряда серых приведено в табл. 1 (для всех культур поверхность спор Sm, морфология RA, цвет серый вид ).

М о р ф о л о г и я.

Uefiii спор, образующиеся на аэриальном шцелии, разветвляются моно юднально и симподиально с образованием прямых цепей, петель, крючков, растянутых и имеюних неправильную форму сер ебристых спиралей (3-4 витка), также имеющих метельчатое pacпoлoжeшie. Цепочки бывают как короткими, так и длинными, но преимуществе}1но они содержат более 10 спор. На большинстве сред наблюдается достаточная ллотность. Споры уд;п1ненные и имеют форму овалов и цилиндров, поверхность спор гладкая.

Физиология. Растворимый п и г м е н г

На aiap - агаре с JKCTpaKTaMM дрожжей и солода образуются следь; коричневого пигмента.

Культура является хромогенной (образует меланин) на агар - с пептоном и железом и тирозином, а также на бульоне с триптояом и экстрактом дрожжей.

Культуральиые (период инкубащп 4 дней при 28° С) и 4 изиоло1 ические характеристики культур Streptomyces Sp. X-5i08 гфиведены в табл. 2 и табл. 3 соотвегственно.

Ор1анические нитраты не восстанавливаются в бульоне; крахмал активно гидролизуется, а желатина лип)ь очень слабо сжижается через 14 дней; xopoiJJO усваиваются L-арабиноза, d-фруктоза, d-маннит, 1--рампоза, d-раффиноза и саха1юза; плохо- d-Kx4iJio3a и L-инозит и совсе не усваивается целлюлоза.

Культура Streptomyces Sp.xopoino развивается при 24 и 37°С, но не развивается при 42 или 50°С.

Характер усвоения источников углерода и азога Streptomyces Sp. Х-5108 приведен япя периода ин чубации при 28°С.

Усвоение 1-арабиноз)1, L-pa.viHO3bi, d-ксилозы, d-маинита, L-ин()зиIa, глюкозы, фруктозы, сахарозы, ацетата, цитрата, малага, (жсалата, салицилата, сукцината, 1арт;)ата, фенолу (0,1Л), раффинозы, крахмала, d-рибозы, d-галактозы, d-маннозы, nej.iio6H03bi, лактозы, .мальтозы, декстрина, дулышта, Э)итри1а, сорбита и глицерина составляет 1, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3,2 2, 1,0, 2,0,0, 3,0-1,3,3,3, 3,3,3,0,0,0, 1,0- 1, а усвоение сульфата аммония, нитрата натрия, нитрита натрия ацетамида, аспарагина, тирозина н D, L -триптофана -1,1,1,1,3,3и2 соответственно (отрицательный контроль О-1).

Для культивирования продуцента Streptomyces Sp, Х-5108 применяют различные способы ферментации.

При ферменгатши в колбах порцию спор, взятую со среза культурь на агар-агаре, инокулируют в 100 мл питательной среды в конической колбе Эрленмейера емкостью 500 мл и инкубируют С на Вращающейся качалке в течение 7 дней. Пробы бульона отбирают на третий, пятый и седьмой день.

При приготовлении бачьших порций бульона поодукт инокулиооваш1Я готовят в конических колбах Эрленмейера емкостью 6 л. н HHjxKcoBbix бутьтях емкостью 16 л или резервуарах, снабженных устройствами для аэраади, отбора проб и т.д. Для аэрации через сбраживаемую среду в и резервуарах 1родувают стерильный воздух. При использовании резервуаров х-1я дополнительного перемешивания используют меха1шческие лопастные мешалки. Для предотвращения пепообразования вводят аитивспениватели, такие, как свиной лярд и соевое масло. Streptomyces Sp. Х-5108 культивируют в различных жидких средах, пре;шочтательно в средах, содержатдих истошшк ассимилируемого , например крахмал, глюкозу, .мелассу, и источник ассими; Ируемого азота, такой, как белки, гидролизаты белков, лолипецт}щы, аминокнс.чоты, жидкость, получаемую при обработке кукурузных початков, аммониевые соли, сульфаты, фосфаты, хлориды калия, натрия, кальция, магния, и П|5)1.5еси кобальта, меди, железа, молибдена, бора.

Активность антибиотика Х-5108 определяют m vitro по диаметру зоны ингибирования грамположите.чьных бактерий Bacillus Н. юи Bacillus simplex оГ) метолом .1и|ффузяи в среде агар агара с чаижой и пластикой,

Принимают условно, что активность антибиотика ) e.VMJi раствора соответствует диаметру зонь ин1иби;)ования- 20 мм. Культуру испытуе.мого NttiKpoopraHn3Ma выращивают в питате.чыюм бульоне, например в бульоне с триптиказой и соей, в 1ечение 24-42 час при 28 С на вращающейся качатпче (10( мл среды в конической колбе Эрленмейера емкостью 500 мл). 4 мл вь раще}{ной культуры (концентра1Шя 0,25 - 0,5/0 наливают на застывп1ий пи а1е;1Ып 1Й слой arap-aiapa в ча1иках Петри, помещают их в хололи.пьн.чк по .меньшей мере на 2 час до отбора и заполнения испытуемым раствором, содегжащн.м антибиотик, затем инкубируют 18 час и измеряют диаметр зоны ингибирования с точностью до 0,5 мм. Актив1 ость антибиотика вычисляют по стандартным кривым.

Дчя производства антибиотика целесообразно использовать сложные азотсодержащие вещества, например, растительного (соевые бобы или хлопковая мука, овсяная мука, твердое вептество томатной пасты, растворимые вещества, образующиеся при ферментации зерна) или животного (рыбная мука, отвар из мяса с мукой, продукты гадролиза аминокислот) происхождения и микробиальньге клетки (дрожжи торула).

Источниками углерода служат, например, глюкоза глицерин, декстрин и кукурузный крахмал. Кроме неорганических солей, обычно входящих в состав природных сред, вводят друтие со.гти, такие, как фосфат калия, карбонат кальция, сульфат ма ния, и микрозлементы.

Целесообразно для производства антибиотика Х-5108 в ферменты загр жать среду, сопержащую

1% обезжиренной муки из семян хлопка (Профло), 0,5% концентрата жидкости, получаемой при выщелачивании кукурузы, 1% кукурузного крахмала, 0,1% гидрофосфата кальция К2НРО4,0,1% карбоната кальция СаСОз.

В табл. 4 показано влияние состава питательной среды на выход антибиотика Streptomyces Sp. Х-5108 при проведении опыта во встряхиваемых колбах (период инкубации 5 дней).

Все среды содержат 1% декстрина, 0,1% Kj НРО4,0,1% СаСОз и 1% источника азота.

В каждые 100 мл среды для инокулирования вносят 1 мл суспензии спор Streptomyces Sp. Х-5108.

Результаты, полученные при выращивании Str tomyces Sp. во встряхиваемых колбах в течение 4 дней на средах, содержащих 0,1% К2НРО4,0,1% СаСОз и компоненты, указанные в табл. 5 (по 1% каждого), приведены в табл. 5. Для инокулирования 100 мл каждой среды употребляют 1 мл суспензии спор Streptomyces Sp. Х-5108.

Влияние состава питательной среды на выход антибиотика Streptomyces Sp. Х-5108 во встряхиваемьк колбах и в аэрированных резервуарах отражено в табл. 6.

При ферментации в различных аппаратах по.1тучают результаты, сведенные в табл.. 7.

Каждая среда содержит 0,5% СаСОз и 0,1% К2НЮ4. Для определения активности антибиотика используют Bacillus simplex.

Продуцент Streptomyces Sp. Х-5108 растет также на некоторых химических синтетических средах, содержащих аммониевые соли, нитраты или аминокислоты (глутамат, аргинин, глицин), служапще источниками азота, глюкозу, декстрин, крахмал, цитрат, ацетат и т.п., служащие источниками углерода, с добавкой солей, таких, как фосфат калия, карбонат кальция и сульфат магния, и микроэлементов, включающих двухвалентные ионы железа, меди, марганца, кобальта и цинка.

Результаты ферментации Streptomyces Sp. Х-5108 на различных синтетических средах показаны в табл. 8.

Выход антиоиотика Х-5108 увеличивается при хорошей аэрации среды. Антибиотик Х-5108 можно получать при любой те тературе, обусловливающей удовлетворительный рост микроорганизма. Так, например, при вьфащивании Streptomyces Sp. Х-5108 в колбах при 24, 28, 30 и 32°С(анализ на выход антибиотика через 3,4,5 и 6 дней) выход антибиотика достигает максимума через 5-6, 4, 3-4 и 3-4 дня соответственно.

Во время ферментапии среда остается почти нейтральной или становится слабо кислой. Конечная величина рН зависит от наличия буферных веществ и от первоначальной величины рН среды (среда должна быть нейтральной до стерилизации).

Для выделения и очистки антибиотика Х-5108 используют различные способы, например, экстракцию растворителем (периодическая и.гш непрерывная противоточная экстракция), проводимую в экстракционных колоннах, и хроматографию, основанную на проникнове1ши в гель сырого антибиотика, выделенно о из культуральной среды. 5Из культуральной среды антибиотик Х-5108

выделяют путем отделения мице;шя фильтрованием или центрифугированием с последующей экстракщ{ей фильтрата или фугата несмеишвающимся с водой сложным эфиром, например этилацетатом, 0 амилацетатом, бутилацетатом, предпочтительно, бутилацетатом, при рН 3-7,5.

Для противоточной распределительной экстракции используют смесь этилацетата, изопропанола и 0,1 и. водного раствора Nao НЮ.

5 Д.ГИ окончательной очистки антибиотика Х-5108 применяют метод хроматографии, основанный на проникновешп в гель предварительно очищенного экстракш1ей препарата, на геле декстрана с поперечными связял/ш или на поли.меризованном 0 геле декстрана.

Для хроматографии берут сефадекс LH-20 и элюируют спиртом.

После отделения антибиотика фьшьтрованием или центрифугировшшем культуральной среды его 5 анализируют методом тонкослойной или бумажной хрюматографии при проявлении пятен методом флуоресценции и биоавтографии. Для хроматографии лучше использовать стеклянные пластины, покрытые силикагелем.

0 Для тонкослойной хроматографии использ тот смесь хлороформа, метанола и гидроокиси аммония.

После очистки антибиотик Х-5Ю8 представляет собой аморфное желтое вещество.

5Найдено, %: С 63,63; Н7,81; N3,48; О25,08

(по разности).

Антибиотик Х-5108 растворим в спиртах,

например метшгале, этаноле, 1 и 2 -пропаноле,

трет-бутаноле; в несмепшвающихся с водой сложО ных эфирах, например в этилацетате, амилацетате,

бутилацетате, и в хлороформе.

Антибиотик не растворим в воде.

ИК- спектр, : 3400 (щнрокая), 1660 (сильная), 1580 (широкая), 1580, 1380,1250, 1100, 1040 и 995 (отчетливые.

УФ-спектр (0,1 н. соляная кислота), Хмакс (Е j )) 334 (403), 233 (610) и 206 (SQOV

УФ-спектр (буфер изопропанол - К2НРО4 РН7), Хмакс (EfJ;, ), ммк: 327(423), 231 (660).

УФ-спектр (0,1 н. едкш кали), Хмакс(Е ) ммк: 327 (416), 231 (647).

ЯМР-спектр (дейтерохлороформ, внутренний стандарт тетраметилсилан) : отчетливые сигналы при 0,92, 1,66-2,03, 3,16 и 3,43 5 и в области сигналов олефинов.

Микробицидную активность антибиотика Х-5108 определяют методом с чашкой и пластиной, с диффузией в среде агар-агара.

7

,нтабиотик X-5I08 обладает низкой токсичностью при оральном и парэнтеральном введении, значительной активностью против , стрептококков при систематическом (оральном) и местном (подкожном) в.ведении, активностью против пневмококов и кишечного кокщ1диоза. При опытах на мышал установлено, что антибиотик практически не токсичен при оральном и подкожном введении (LDso не более 2000 и 1320 мг/кг соответственно). Антибиотик aiCTHBCH при оральном (LDso 52 л{Г/к-г) и подконшом (СД5о 44 мг/кг) введении против Streptococcus pyognes, активен против Diptococcus pneumoniije (СД5о 807 и 283 мг/кг при оральном и подкожном введении соответственно) и против грамотрицательных бактерий.

Антибиотик Х-5108 npsi введенш в корм доMaiiuien тицы стимулирует рост носле/щей.

Обычно aHTiiOHOTHK Х-5108 добав}ШОт к сбалансированным в огношении питательности кормам для домашней птицы (на 100 вес.ч. корма 0,0001-0,01 вес.ч. антибиотика). /Дальнейшее увеличение концентрадаи антибиогика не приводит к улучшению результатов.

Пример. Суспензией снор Streptomvces Sp. Х-5108 из пробирки с гштательной агар-агаровой средой ипокулируют содержимое резервуара из 1шрекса емкостью 16 л, снабженного приспособлением для аэращ1и, в который загружено 15л среды, содержа1лей (в %): 1 соевой муки, 1 желтого сахара, 0,25 твердого вещества, гюлу аемого при переработке кукурузных початков, 0,1 К2НРО4, 0,1 СаСОз и 0,05 свилого жира (а.чтивснениватель).

Период инк бащ1и 4 ;1ля при 28°С в условиях аэрации. Выросинш волокнистый материал переносят в фер.ментер емкостью 378 л, изготовленный из нержавеющей стали, который содержит 192 л среды из % обезж11ренной муки из семян хлопчатника, l/f кукурузного крахмала, 0,25% твердого вещества, получаемого при переработке кукурузных початков, 0,1% СаСОз 0,1% ПРО., и 0,5% свиного жира.

рН среды до инокулирования 6,8. Ферментер аэрируют и чергз 5 дней выгружают содержимое, фильтруют с изнользованием диатомитовой зем.1Ш, подкисляют фильтрат до рН 3,5 экс1рагируют его вдвое меньишм объемом бутилацегата, осветленный экстракт кСНцентрнруют в вакууме при температуре ниже 40 С до образования коричневого сиропа, после растирания которого с .иетролейным ).м вьщеля()т твердый iiopoirioK а}1тибиотика Х-5108 с активностью против Bacillus Е. 120елУмг. fl р и м е р 2. Антибиотик Х-5108 очищают путем периодической -зксгракщл растворителем. Партии куртуральной среды после фер.меитаиии (11340 л), KOTOJbie при испытаниях in vitro показывают активность /v 130 ед/мл против Bacillus simplex, фильтруют, экстра1ируют фильтрат бутилацетатом при рН 7,5, промывают экстракт водой, концентрируют методом мгновенного испа8

рения при температуре ниже , прибавляют iaлoнaт дизти; натрия до рН 9,0, образовавпшйся желтый осадок отфильтровывают промывают бутилапештом, обрабатьшают смесью вода-бутилапетаг и дово/гят рН до 4. Оргагшческую фазу отделяют, обрабагывают, как указано выше, но малонат дизтилнатрия прибавляют до устаиовления pHv8,5. Полученный осадок подкисляют, экстрагируют свежим бутилацетатом, обрабатывают экстракт да1)ко G-60 и

натриевую соль антибиотика Х-5108 осаждают прибавлением малоната диэтилнатрия до рН 8,0. Образовавшуюся желтую натриевую соль анти биотика промьшают и сушат. При испытаниях in vitro активность со;ги 430 ед/мт против Bacillus

simplex.

Технологическая схема вьщеления ангибиотика Х-5108.

Стадия 1. 11340 л бульона в делим (сбор через 5-6 дней) фильтруют.

Стадия 2, К 9804 л профильтрованною бульона (рН 7,5) при 1 еобхо.димости добавляют ИзРО4 и экстрагируют 2268 л бутилацетата.

Стадая 3. 2192 л экстракта промывают 2 х 94 л воды и концентрируют методом мгновенного исиарения.

Стадия 4. К 302 л концентрата прибавляют матшиат диэтилнатрия до рН 9 (1-1,5л ,7н. раствора малоната), осадок отфильтровывают и промывают 3,7 л бутиладетата.

Стадая 5. Полученный осадок растворяют в 94 л ВОДЬ, добавляют Нз РОц до рП 4 и экстрагаруют двумя пopция ш бутилацетата (75 + 37,8 л).

Стадия 6. 106 л экстракта промывают 2 х 7,5 л воды и конце}1трируют методом мгновенного испарения.

Стадия 7. К 15 л концентрата прибавляют малонат диэтилнатрия до рН 8,5, отфильтровывают осадок и п юмывают 3,7 л бутилацетата.

Ста;1,ия 8. Выделенный осадок растворяют в 75 л воды, доводят pf 1 до 5 с помои ю 15%-ной Из РО и экстра ируют двумя порциями бутилацегата (56,7 28,3л).

Стадая 9. 78 л экстракта промываю 2 х 7,5 л воды и концентрируют методом мгновенного испарения.

Стадия 10. 15л концентрата перемеигивают с 50 г дарко G-60 в течение 1 час при комнатной температуре, фильтруют и концентрируют методом мгновенного испарения.

Стадия 11. К 7,5 л концентрата прибавляют

малонат диэтилнатрия до рН 3,0, отфильтровывают осадок, промывают 3,7 л бутилацетата, затем 3,7 л петролейного эфира (т. кип. 30-60°), сушат при 56°С/Ь,5 мм в течение 36 час и получают натриевую соль антибиотика Х-5108 в виде желтого а.морфного вещества.

П р и м е р 3. Очистка антибиотика Х-5108 противоточной распределительной экстракцией при числе труб 2(Ю, объеме верхней и нижней фаз 40 мл (каж;;ая).

5 г антибиотика Х-5108, выделенного экстракцией из сырого бульона после ферментации, растворяют в 40 N01 верхней фазы и используют систему эшлацетат - изсжротанол 0,1 MNa2HPO4 (12:9:20 по объему). Число переносов 200, пик для труб после 200 переносов 159, коэффициент распреаелення 3,88.

Фракции 150-170 собирают, к экстракту антибиотика в органической фазе прибавляли 1-бутанол, водную фазу отбрасывают, органическую промьтают четырьмя порциями воды, воду отгоняют в виде азеотрсэта, прибавляют петролейный эфир и вьщеяяют 3 г антибиотика, активность которого в 2 раза больше активности исходного материала.

П р и м е р 4. Для очистки антибиотика Х-5108 хроматографией на сефадексе LH-20 к этанольному раствору 300 мг пробы антибиотика, предварительно очищенного противоточной распределительной экстракдаей, добавляют раствор метилата натрия (влажная 1шдикаторная бумажка) до рН 8-9, вносят в колонку с сефадексом LH-20 (290 X 41 мм), уравновецкиную спиртом ЗА. Колонку проявляют спиртом ЗА и антибиотик удаляют из колонки в виде раствора объемом 950-1200мл (активные фракции). Последующие фракции содержат ряд окрашенньсх зон с незначительной биологической активностью. Активные фракщш сливают, выпаривают до небольшого объема, прибавляют к остатку эфир и петролейный эфир и осаждают антибиотик в виде желтой натриевой соли, дающей только одно желтое пятно при тонкослойной хроматографии (сшшкагель F-254, обнаружение в УФ- свете) с Rf 0,29 (силикагель/кизельгур, биоавтография).

I р и м е р 5. 0,464 г натриевой соля антибиотика Х-5108, полученной хроматографией на сефадексе LH-20, растворяют в 4,6 мл ледяной воды, прибавляют 10 мл этилацегата, переносят в делительную воронку и прибавляют 1 мл раствора NaH2PO4 (50 г NaH2PO4H2O в 100 мл воды) Образовавшийся вначале осадок растворяется при встряхивании. Органическую фазу промывают четырьмя порциями ледяной воды (по I объему), отгонякд от нее азеотроп, разбавляют концентрат (2 мл) 2 .объемами этилацетата, прибавляют диэтиловый эфир по каплям до помутнения и вводят 30 мл

МО

петролейного эфира. Полученный осадок антибиотика Х-5108 отфильтровывают и с т11ат при комнатной темперагуре.

П р и м е р 6. Основной рацион готовят иэ следующих ингредиентов (вес.%):

Измельче шое желтое

зерно кукурузы56,075

Мясо и костная

мука (50% белков)4,000

Рыбная мука

(60% белков)4,00(

Соевая мука

(50% бе1жов)28,000

Дегидрагированная

мука из альфа-альфы1,000

Животный жир4,000

Метионин0,200

Минеральный фосфат0,250

Карбонат кальция .,1,200

Иодированная соль0,250

Витаминыi ,000

Минеральные компоненты0,025

К этому рациону прибавляют антибиотик Х-5108 в норме 50 г антибиотика на 1 кг рациона.

llpoBOiViT опыт путем непринудительного кормления домашней птицы (однодневные цыплята) рационом с добавкой антибиотика Х-5108 в течение 15 дней Затем цьшлят взвешивают, учитывая количество съеденного KopNia, и эффективность кормления определяют путем сравнения с контрольными гру1тпами.

Средний дополнительный привес для каж;;ой опыной группы делят на средний привес контрольной групы и частное умножали на 100.

Привес за 2 недели (среднее значение для 40 цьшлят) для контрольной и испытуемой (50 г антибиотика на 1 кг рациона) группь составляет 154 ± 8 и 185 12 г (с учетом среднеквадратичной погреш)юсти для среднего значения) , или 100 и 120% соответственно. Эффективность кормления 1,55 и 1,39, улучшение эффективности кормления - 12%.

При введении в рацион различных ко;гачеств антибиотика Х-5108 получены результаты, указанные в табл. 9.

Из данных табл. 9 видно, что цыплята, получавшие рацион с добавкой 50 мг антибиотика Х-5108 на 1 кг рациона, растут быстрее, чем в контрольной группе.

Таблица 1

Хороший рост на всех перечисленных жидких средах, бульеже с триптоном (темный пигмент, отрицагельная реакция на индол через 3 дня) ; питательном бульоне ГДА, бульоне Чапека с сахарозой, бульоне Краинского с глюкозой и бульоне с глицерином и цитратом кальция.

Хороший рост в течение 8 дней при 24, 28, 32 и 37, но не при 42° С.

Бульон с органическим нитратом 8

13

Желатина (15%) при 18°С

12

Агар-агар с пептоном и железом (Юшгпер)

Лакмусовое молоко

13

Яичный firapДсфсета

Ю

Восстановления нитрата не наблюдается, газов не образуется

То же

Сжижения желатины не наблюдается

Слабое сжижение

Хромогенная - образуется меланин

Цвет лакмуса не меняется; помутнения или осветления не наблюдается

Светло-коричневатый цвет; отсутствие помутнения или осветления

Небольшое колн честно темного пигмента

Источник азота

Отвар из мяса с мукой

ВУ-100 (Коммершиал Солвен Корпорейшен)

Профло (Тредерс Ойл Милл

Компани)

Овсяная мука (Кускер Отс

Компани)

Сойалоз (обезжиренная мука coeabLx бобов) Белковая мука из арахиса

Белковая мука из кокосовых

орехов

Твердое вещество томатной

пасты

Мука с льняным маслом

Кукурузная мука

Высушенный экстракт из зерна кукурузы вместе с растворимым веществами (X Уоркер)

Солудри (Шинли Дистиллере Рыбная мука (Гортон) Рыбные отходы (Уилкннсон)

Смесь молочного сахара с альбумином

Высушенные дрожжи торула Автолизат дрожжей нейшенел

Гндролизат сои, образовавшийс под действием знзимов

Гидролизаг белков пшеницы, образовавшийся при кислотном лизе (Турон Миллз)

Гомогенизированная отжатая ры

Протопептон N 366 (Уилссш Лабораториз)

Твердое вешество кукурузных початков

Период инкубация f дней.

Концентрация источника азота 2 %.

Таблица 4

Активность антиfaiOTHKa. ед/мл

50 45

23

32

30

41

50

57 37

33

74 51 25 16

50 38 J6

33

12

27

18 26

Компонент питательной среды

Таблица 5

Активность антибиотика, ед/мл

OiBap из мяса с мукой и декстрин

Остаток после ферментации зерна (ВУ-100) и декстрин Профло и декстрин

Рыбные отходы

Высушенный экстракт из зеррузы вместе с растворимыми (X. Уокер) и декстрин

Профло и декстрин Профло и декстрин Профло и декстрин Профло и декстрин

Профло и глюкоза Профло и крахмал Профло и глицерин Профло и желтый сахар Профло и мальтоза Профло и лактоза Профло и маннит

Период инкубации 6 дней,

БезСаСОз.

Без СаСОз или KjHTO.

Концентрация Профло 0,25%.

Концентрация Профло 2,0%.

40 67

52 40

138

19

34

12 47

21

21

35

14

22

26

25

1

Профло крахмала

12

1 BZjicyuieiffloro ра,творимого вещества после экстракции зерен кукурузы, 1 декстрина, 0,1 К2НР04 и 0,1 СаСОз

13

1 L-глута.мата натрия 1 декстрина, 0,1 твердото вещества кукурузных початков, 0,15 Kj НРО4 и 0,05 MgSO4

11

1 твердого вещества томатной пасты, 1 высушенного растворимого вещества после экстракции зерен кукуруты, кукур зного крахмала, 0,5 глюкозы, 0,5 СаСОз и 0,1

К2НР04

4

0,5 Профио, 0,5 высущенного растворимого вещества носле экстракции зерин кукурузы, 0,5 твердого вещества томатной пасты, 0,5 iiacibi из мясного экстракта (прогопептон N 366), I крахмала, 0,1 СаСОз и 0,1 КгНРОа

Ферментер объемом 454 л (загрузка 295 л среды), изготовленный из нержавеющей стали. Ферментер объемом 19000 л (загрузка 14500 л среды), изготовленный из углеродистой стали. Ферментер объемом 3400 л (загрузка 2220 л среды), изготовленный из углеродистой стали.

Таблица 7

67

100

200

91

260

23

1,0 глутамата натрия, 1 декстрина, 0,1 К2НЮ4.0,05 MgS04, 1,0 смеси аминокислот и 1 декстрина,

0,1 К2НРО4,0,1 солей VSP№ Г, ВВ1, бульон Чапека-Докса

1,0 аргинина, 0,1 декстрина, 01 К-2 НЮ4, 0,1 СаСОз и 0,05 MgSO4

1,0 Д,1-аспарагиновой кислоты, 1, декстрина, 0,1 К2НРО4,0,1 СаСОз 0,05% MgSO4

0,1 глутамата натрия, 0,6 (NN4)2НЮ4 1 глюкозы, 1 декстрина, 0,1 К2НЮ4,0,1 СаСОз, 0,1 КС1 и 0,05 MgSO4

0,33 (NN4) 2 S04 , 1,5 глюкозы, 0,1 цитрата натрия, 0,05 ацетата натрия 0,5 хлорида натрия, 0,025 MgS04-7H20, 0,01 К2НЮ4, 0,01 КН2РО4,0,3 СаСОз, 0,001 MnS04-4H2O, 0,004 ZnSO4 VHjO, 1,6-10 K,Cr,03 % сахарозы, 0, нитрат, натрия, 0,1% К, HP04, 0,05% u,uui /I сульфата двухвалентного железа.

24 Таблица 8

7,6

11,5 4,4

0,8

6,6

20 MgSO,. 0.05% хлорида калия,

48

Контроль

Антибиотик

1,54

149 (100)