Штамм SтRертомYсеS caNDIDUS - продуцент макролидного антибиотика Советский патент 1993 года по МПК C12P1/06 

Изобретение относится к микробиологии, а именно производству антибиотиков.

Известен ряд макролидных антибиотиков (метимицин, магнамицин, олеандоми- цин, лейкомицин, анголомицин), отличающихся от изучаемого нами по молекулярной массе и активности в отношении Klebsiella pneumoniae.

Цель изобретения - получение штамма - продуцента нового макролидного антибиотика.

Штамм № 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомицином (концентрация 50 мкг/мл).

Полученный штамм депонирован во ВНИИА и во ВНИИ генетика.

Культурально-морфологические признаки.

На всех диагностических средах ВМ-бе- ловатый, СМ-бесцветный, РП нет. Цепочки спор прямые, волнистые (RF). Споры гладкие. Штамм растет при температуре +28°С, оптимальные значения рН 7,0-7,2.

Штамм Streptomyces candidus 425 под- держивается на средах Гаузе 1 и Гаузе 2. Состав среды Гаузе 1 (%): крахмал растворимый № 2,0; «2НР04 - 0,05; - 0,05; КМОз - 0,1; NaCI - 0,05; FeS04 - 0,01; агар - 3,0; рН 7,2-7,4. Гаузе 2 (%): бульон Хоттин- гера - 3,0; пептон - 0,5; глюкоза - 1,0; агар

- 3,0; рН - 7.0-7,2, Штамм № 425 высевается на среды Гаузе 1 и Гаузе 2 на косяки, выращивается в термостате при -2+3°С. Пересев музейных культур приводится один раз в 3 месяца.

Физиолого-биохимические признаки.

Хорошо ассимилирует 1 - инозит, D - лактозу и D - мальтозу, хуже L - рамноэу, D

- рафинозу, D - маннит, глюкозу, L - дуль- цит, сахарозу, арабинозу и D - сорбит. Не используют D - ксилозу. В качестве источника азота интенсивно используют пептон, дрожжевой экстракт, соевую муку, гидролиsat Хоттингера., Плохо усваивает минеральные источники,

Клеточная стенка содержит L-ДАПК, которая оценивается хроматографическим методом (Lechevalier, 1968).

Посевной материал получают на 0,5% питательной кукурузной среде следующего состава (в %); кукурузный экстракт - 0,5; (NHi)2S04 0,35; NaCI - 0,5; крахмал нерастворимый - 2,5; глюкоза - 1,0; рН 7,0-7,1.

Для биосинтеза антибиотика используют среду А.

Пример 1, Для биосинтеза антибиотика используют среду АЛ, содержащую в (%): соевая мука - 1,0; глюкоза - 1,0; NaCI - 0,5; СаСОз-0,25; рН 7,2-7,4. Посевной материал вносят б количестве 3%. Выращивают при +28°С в течение 96 часов в колбах на качалке (180 об/мин). Антибиотическая активность культуральной жидкости составляет 2197 ед/мл в отношении Klebsiella pneumonlae.

Пример 2. Для биосинтеза антибиотика используют среду 5339, содержащую в (%): глицерин - 2,0; соевая мука - 0,5; (NH4)2S04 - 0,15; NaCI - 0,3; СаСОз - 0,3; рН 6,8. Посевной материал вносится в количестве 3%. Выращивают при +28°С в течение 96 часов в колбах на качалке (180 об/мин). Антибиотическая активность культуральной жидкости составляет 81 ед/мл в отношении К. pneumonlae,

. Штамм Ns 425 продуцирует антибиотик, выделяемый из мицеллия и нативного раствора продуцента. Антибиотик из мицелия извлекали ацетоном при рН 7,0, упаривали в вакууме. Водный остаток реэкстрагирова- ли н-бутанолом (1/15 от объема водного остатка). Бутанольный экстракт упаривали в вакууме при температуре ,+45°С. Из скон0

5

0

5

0

5

0

центрированного экстракта антибиотик осаждали гексаном, осадок высушивали.

Пример 3. Из фильтрата культуральной жидкости антибиотик извлекали н-бутанолом 1/15 от объема фильтрата. Экстракт упаривали до минимального объема и осаждали гексаном. Выход антибиотика составляет 1,8 г с антибиотической активностью 5 мкг/мл в отношении К. pneumbniae.

Пример 4. Из фильтрата культуральной жидкости антибиотик извлекают экстракцией хлороформом 1/15 от объема фильтрата. Экстракт упаривают до минимального объема и осаждали гексаном, Получают аморфный порошок белого цвета, выход которого составляет 2,3 г с антибиотической активностью 1,5 мкг/мл в отношении К. pneumonlae.

Очистку антибиотика осуществляют методом колоночной хроматографии на ки- зельгеле 60 марки Merk. Выход очищенного антибиотика из 1 л культуры составляет 600 мг, .Антимикробный спектр антибиотика 425 приведен в таблице.

Антибиотик N 425 хорошо растворим в спиртах, хлороформе, ацетоне, мало растворим в воде. Анализ спектральных данных (ИК-, ЯМР-, масс-спектроскопии) позволил отнести изучаемый антибиотик к группе макролидов, Он отличается от всех известных макролидов по молекулярной массе (т/е 998). Сравнение проводилось по компьютерной базе данных антибиотиков, разработанной Я. Берди, ВРН.

Анбибиотик 425 высоко активен в отношении К. pneumonlae и других грамотрица- тельных бактерий в отличии от известных макролидных антибиотиков. Антибиотическая активность составляет 1,5 мкг/мл.

Использование: производство антибиотиков и касается получения нового макролидного антибиотика, высокого активного в отношении Klebsiella pneurnonlae и других грамотрицательных бактерий. Сущность: штамм ИМВ 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомицином (№ 2062 коллекция ВНИИА и S-919 коллекция ВНИИ генетика). Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к Klebsiella pneumonlae и других грамотрицательных бактерий, грамположительных бактерий и грибов Fusariu m и Asperglllus. Штамм продуцирует новый макролидный антибиотик, отличающийся от всех ранее известных по молекулярной массе с т/е 998. 1 табл.

Формула изобретения Штамм Streptomycesjcandldus ВКПМ S- 919- продуцент макролидного антибиотика.