Разбавитель для сухой вирусвакцины против болезней марека Советский патент 1977 года по МПК A61K39/12 C12K5/00 

1

Изобретение относится к разбавителям сухой вирусвакцины против болезни Марека из вируса герпеса индеек.

Сухая вакцина против болезни Марека отличатся от других тем, что вирус в ней неустойчив и плохо сохраняется в свободном от клеток состоянии. Использование эффективного разбавителя вызвано необходимостью сохранить исходную активность разведенной вакцины, предназначенной для вакцинации 500-1000 цыплят, в течение всего периода вакцинации (2 ч). Поэтому особое значение приобретает разбавитель для сухой вакцины.

Известны разбавители для нативной вакцины против болезни Марека, представляющие собой солевой сбалансированный физиологический раствор с добавлением сыворотки крупного рогатого скота до концентрации 10% 1. Однако он оказался малоэффективным для сухой вирусвакцины. Сухая вакцина, суспендированная в этом разбавителе, уже через 1 ч при комнатной температуре сохраняет только 60% исходной активности, а через 2 ч -30%.

Известны также разбавители - фосфатный буфер или среда 199 с добавлением и без добавления 4% триптозофосфатного бульона; смесь СФГА, представляющая сачарозофоофатный буфер € добавлением альбу1мина и глютамата натрия, сахарозофосфатный буфер с альбумином (СФА) 2. Наиболее эффективным оказались разбавители, содержащие стабилизатор альбумин и сахарозофосфатный буфер в качестве его растворителя (СФГА, СФА). Однако эти разбавители обладают антигенной активностью, очень дороги (цена 1 кг бычьего сывороточного альбумина - 3,4 тыс. руб.; альбумина из сыворотки крови человека - 8,6 тыс. руб.) и технология их изготовления сложна тем, что общепринятый метод стерилизации - автоклавирование - непригоден. Все это ограничивает их применение, особенно в промышленном масштабе.

Цель изобретения-разработка разбавителя, повышающего длительность сохранения исходной активности вируса, дешевого, простого в изготовлении и не обладающего антигенной активностью.

Это достигается тем, что в качестве стабилизирующего вещества разбавитель содержит необладающий антигенностью и устойчивый к воздействию высоких температур пептон, а в качестве его растворителя - глициновый буфер с рН 7,0-7,2 при следующем соотнощении компонентов, %:

Пептон1-10

Глициновый буфер с рН

7,0-7,2Остальное

Предлагаемый разбавитель значительно дешевле известных (цена 1 кг пептона - 13 .руб.) и эффективность его действия не ниже СФГА, являющегося в настоящее время лучшим разбавителем для вакцины нротив болезни Марека.

Прн получении предлагаемого разбавителя навеску пептона для получения 2-10%ного раствора растворяют в бидистиллированной воде. Для осветления раствора его подкисляют 1 н. соляной кислотой до рН 5,5 н кинятят в течение 30 мин, фильтруют и нейтрализуют 2 М глициновым буфером (рН 8,6) до рН 7,0. После этого разбавитель расфасовывают, герметически укупоривают

и стерилизуют автоклавированием при 1 атм в течение 1 ч. Разбавитель обладает надежными стабилизирующими -свойствами при концентрации пептона 1 -10%, но для практического применения наиболее пригоден разбавитель с концентрацией нептона, равной 2%.

В таблице приведены примеры сохранения активности вакцины в предлагаемом разбавителе в течение 2-3 ч после ее растворения в сравнении с другими известными разбавителями (в разбавители вносили равное количество вирусвакцины; данные в скобках- % от исходной активности в СФГА).

Из данных таблицы видно, что предлагаемый разбавитель (2%-ный раствор нептона на глициновом буфере) так же, как и СФГА, хорошо сохраняет титр вакцины в течение 2-3 ч, в то время как разбавитель, включающий 10% сыворотки крупного рогатого скота значительно, снижает титр вакцины уже в момент разбавления (на 50% от исходной активности).

Формула изобретения

Разбавитель для сухой вирусвакцины против болезни Марека, содержащий стабилизатор и растворитель его, отличающийся тем, что, с целью повышения длительности сохранения исходной активности вируса и снижения стоимости разбавителя, в качестве стабилизатора разбавитель содержит пеитон, а в качестве его растворителя - глициновый бзфер с рН 7,0-7,2 при следующем соотношении компонентов, %:

Пептон1-10

Глициновый буфер с рН

7,0-7,2Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

2.Патент США № 3783098, кл. 195-1.1, 1974.