Способ получения сыворотки против опухоли Эрлиха Советский патент 1984 года по МПК A61K39/395 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в онколог при иммунотерапии рака. Известныспособы получения сьшоротки для иммунотерапии рака путем иммунизации животных клетками (анти геном) исходной опухоли ij . Однако сыворотка, полученная эти способом, недостаточно активна. С целью повышения активности сыворотки по предлагаемому способу в качестве антигена используют штамм клеток асцятной карциномы Эрлиха АКЭМ-1 или АКЭС-1. Штамм опухоли получен из исходного штамма опухоли Эрлиха, па сируется на мышах в Институте генетики и цитологии АН БССР. Получают штамм АКЭМ-1 следующим образом. Мышам (самцам) линии Af вводят в хвостовую вену по 1.10 кле ток опухоли Эрлиха, предварительно отмытых (трехкратно) раствором Хэнк са. На 22-й день после введения опу холевых клеток из легкого выделяют опухолевый узелок размером с прося™ ное зерно. Прививкой нормальным мышам выделенного опухолевого узелка получают штамм опухоли АКЭМ-1. Опухоль АКЭМ-1 представляет собо гетерогенную популяцию клеток, состоящую в основном из двух хромосомных классов: тетраплоидного и околооктаплоидного с выралсенным преобладанием тетраплоидного, В популяци клеток доминирующими являются три клеточных клона с 80-, 82-, 84-хромосомными наборами. В метафазных пластинках присутствуют маркерные . хромосомы: 1-2 большие суб- и метацентрические телоцентрические с двойной перетяжкой. Почти, в каждой метафазной пластинке встречаются 1-2 малые метацентрические хромосомы. Опухоль растет в асцитной и солидной формах на мншах, линейнонеспецифична, продолжительность жизни при внутрибрюшинном введении мышам линии AJ (по 5,10 опухолевых клеток) составляет 22±4 дня. Для получения сыворотки против опухоли Эрлиха группу мышей линии Af иммунизируют путем внутрибрюшинного (3-кратного с интервалом 7 дней введения облученных (10 000 f ) клеток штагл а опухоли АКЭМ-1 (по 3. 10 клеток) . М.ышей линии СЗН/Sn иммунизируют путем внутрибрюшинного (6кратного с интервалом 7 дней) введения облученных (10 000 ) клеток опухоли АКЭС-1 (по 1.10 клеток на мышь). На 10-й день после последней иммунизации у мышей получают сыворотку из крови. Влияние сыворотки анти АКЭМ-1 и сыворотки анти АКЭС-1, полученных путем иммунизации мышей клетками опухоли АКЭМ-1 или АКЭС-1, и сыворотки анти АКЭ, полученной ранее известным способом, т.е. иммунизацией мышей клетками опухоли Эрлиха, на скорость роста опухоли Эрлиха, приведены в таблице. Мышам линии Af или СЗН/Sn внутрибрюшинно прививают по клеток опухоли Эрлиха. Черев 24 и 48 ч после прививки опухоли мышам вводят двухкратно внутрибрюшинно: первой группе по 0,5 мл сыворотки анти АКЭМ-1, второй - по 0,5 мл сыворотки анти АКЭС-1, третьей -по 0,5 мл сыворотки анти АКЭ.Контрольной серией служат мыши, получившие по указанной схеме сыворотку интактных мышей или раствор Хэнкса. Прививаемость опухоли у мышей при введении им по 5x10 клеток АКЭ составляет 100%. О противоопухолевом эффекте антисывороток судят по скорости роста опухоли, которую определяют по среднему количеству опухолевых клеток, накапливающихся в брюшной полости у мышей к 14-му дню (мыши линии Af ) или к 10-му дню, (мыши линии СЗН/Sn) после прививки. Определяют процент торможения опухолевого роста. Проводят цитогенетический ана.71из популяции опухолевых клеток в контрольных и опытных сериях. В каждой серии анализируют по 50 метафазных пластинок . Из таблицы видно, что сыворотки анти АКЭМ-1 или анти АКЭС-1 введенные мышам с привитой опухолью Эрлиха, вызывают торможение опухолевого роста на 86% и 51% соответственно, в то время как сыворотка антк АКЭ и сыворотка интактных не оказывают достоверного влияния на скорость роста этой опухоли. Предлагаемый способ позволяет получать иммунную сыворотку против опухоли Эрлихаj, которая при введении мы1яам с привитой исходной опухолью вызывает значительное (до 86%) торможение опухолевого роста. Клетки АКЭ+сыворотка интактных 17 365±51 мышей Клетки АКЭ+сыво16 392t64 7,0 20 ротка анти АКЭ Клетки АКЭ+сыво16 49±6 86,0 ротка анти АКЭМ-1 Клетки АКЭ+сыворотка анти АКЭС-1 Клетки АКЭ+раст18 447i92 - 20 вор Хенкса 18 18 235i42 - ,05 ,05 193151 10,2 ,05 ,05 ,05 106+23 51,1 1-4.0,05 2I5tl2 - ,05 ,05

Способ получения сыворотки против опухоли Эрлиха путем иммунизации мышей опухолевым антигеном с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности сыворотки, в качестве антигена используют штамм клеток асцитной карциномы Эрлиха АКЭМ-1 или АКЭС-1.

Примечание: - достовериость данных по линиям.