Способ оценки тяжести вирусного гепатита Советский патент 1977 года по МПК A61B5/00 G01N33/50 

1

Изобретение относится к медиштее и может быть использовано для оценки тяжестп и прогнозирования тяжелых форм вирусного гепатита.

Известен способ диагностики вирусного гепатита, заключающийся в опрецеленнп активности фермента фруктозо-1 фосфаг aльдoлaзы в-сыворотке крови больных iX

Однако известный способ не обеспещьвает высокой спещ1фичности анализа, а

также возможности более ранней диагностики заболевания и прогнозирования его течения,

С целью повышения спеш1фич:ности анализа, а также возможности более ранней диагностики заболевания и прогнозирования его течения по предлагаемому способу сыворотку крови обрабатывают шютеином, затем добавляют в пробу 250-500 J субстрата - глицил-фенилаланил-р нитроанилида инкубируют смесь при комнатной температуре в течение мин.

Способ оценки тяжести вирусного х эпатита осушествляют следующим образом.

Определяют активность фермента-катепС1ПШ с, ЦМЯ ЯТОГО С lBOrOj5-Ly . i )(:iv iffc;-тывают п.истеянол, а затем c-ucjijnTu;. - гли1щл-феннлаланил р нитроаишпдол, irifxy бируют раствор с последуюиптм определю-- иием D о-.еси кагепсииа С спект)ЗСчфото,1ет- piniecKJ. Субстрат берут в тсопичестпе 2оО 500 у на пробу. Инкубацию тг;1обы пеаут при 37 С в течение 20 мин.

Пример. К 0,25 мп сыворотки в опытной iipoGiipi:o добавляют мл растг ора циС теина (для активации фермента) в адегат- но буфере 0,1 М 5,5 (растворяют цистеин из расчета 17 мг в 1 мл буфера) и выдерживают 5 мин нри комнатной температуре. Разводят с 1нтетический-субстрат - глищ5Л- 11С1П1лалан1,;1-.-р нлтроанн.шд в том же буфере из расчета 250 5 субстрата в 0,75 мл буфера. Добавляют в опытную пробирку 0,75 мл раствора субстрата в буфере. Довоадт объем до 3 мл «шстык буферок. В контрольную пробирку наливают все то же, только вместо субстрата добав ляют чистый . Смотрят опытную пробирку против контрольно На спектрофотомет ре СФ-4А при длине BOJHIBI 110 ммк. За-

тем onbiTss Jo., j и контрольную пробирки ставят в т-ерыостат при 37 С на 20 мин (опытным путем было установлено, что наибольшая активность фермента проявляется за это врэмя). После инкубации вновь смотрят на пробы. Из второго, большего вдспа, вывдтают первое. Полученную величину акстикгши переводят в у- /мг по калибровошгой кривой. Полученную величину умноц жяют на 4 (пересчет на 1 мя сыворотки). Получают то кошгчество if п-нитроанипина, которое оттенил катепсин С из 1 мл сыво-,

Количество обследованных

k) болезни больных

18

Легкая

27

Срэ дне тяжелая

20

Тяжелая

ротки от субстрата - глицил-фенилаланил-р-нитроанилиоа за 20 мин инкубации. Калибровочную кривую строят по п-нитроанипину. У здоровых детей катепсин С в сыворотке крови не определяется (равен О.) При вирусном гепатите у детей,особенно при гя;келых его формах, активность катепсина G: в сыворотке крови достигает 12 /мп.

В табл. 1 показаны результаты повышения активности катепсина С в острый период заболевания в зависимости от тяжести процесса.

Кратность повышения активности фермента . ()

в 2,5 раза

в 3,5 раза

в 5,5 раза

Использование предлагаемого способа определения активности катепсина С в сыворотке крови детей, больных вирусным ге- цатитом, обеспечивает упрошение методики путем определения активности фермента в сыворотке крови; возможность ранней оценки степени тяжести патологического процес- са в печени и своевременного назначения соответствутощей терапии, | а также возможность прогнозирования |течения заболевания, что знащ1тельно помогает в лечении вирус- ного гепатита, особенно тяжелых его форм Фор мула изобретения Способ оценки тяжести вирусного гепатита путем определения активности фермет та в сыворотке крови спектрофотометричеоки, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности анализа, а также возможности более ранней диагностики заболевания и прогнозирования его течения, сыворотку крови обрабатывают цио теином, затем добавляют в пробу 2 50-500 У Субстрата - глицил-фенипаланил-р-иитроаиипида, инкубируют смесь при комнатной температуре в течение 20-25 мин. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. Ж. Лабораторное дело , 1955, № 6, 7, метод В. И. Товаркицкого и Е. Н. Валуйской.