ностью, хотя твердая форма проявляет меньшую активность.
Пример 1. В стеклянную колбу подают 24.024 г мочевины и 24,5 г Mg-SOi, , смешивают и гомогенизируют; температуру поддерживают равной 40С в. течение 2-4 ч, образуется прозрачная вязкая паста. Затем добавляют 72,0 г глюкозы и 300-400 мл дистиллированной воды или физиологического раствора хлористого натрия, медленно встряхивают до полного растворения, после чего раствор выдерживают двое суток при постоянной температуре 40°С. Можно также с самого начала соединить мочевину, глюкозу и Mg-SOi, в твердой до образования пасты, а потом добавить дистиллированную воду или раствор хлористого натрия, или же мочевину, глюкозу и Mg-SOi, можно растворить в дистиллированной воде или растворе хлористого натрия.
Потом добавляют 33,2 г йодида калия, встряхивают до полного растворения и через сутки вводят 24,4 г бензойной кислоты в пересыщенном спиртовом растворе или спирт добавляют после бензойноП кислоты до достикения полного растворения. В первом случае, когда добавляют пересыщенный раствор бензойной кислоты, образуется большой белый осадок, который отфильтровывают, и после растворения в достаточном количестве спирта вводят в фильтрационную жидкость, из которой выпадает мелкий порошок; его тоже отфильтровывают. В другом случае получают сразу активный белый порошок, но он содержит большее количество примесей. Получаемый мелкий порошок желтоватого цвета имеет склонность к комкованию, полностью растворяется в воде и не растворяется в спирте.
П р и м 6 р 2. Для получения жидкой фазы выполняют те же операции, чт и для получения твердой; смесь из мочевины и сульфата магния, к которым позже добавляют глюкозу, растворяют в 40 МП или в меньшем количестве дистиллированной воды или в растворе хлористого натрия. Добавляют бензойную кислоту в чистом виде и потом спирт в количестве, которое достаточно для полного растворения бензойной кислоты. Бензойную кислоту можно также добавить в пересыщенном спиртовом растворе. Смесь выдерживают при . Наблюдается образование трех фаз; нижней твердой и двух жидких, которые полностью разделены, причем промежуточный слой более интенсивно окрашен и имеет большую вязкость. При нагревании в верхнем слое образуются твердые корки, которые снимают до тех пор пока верхний слой не исчезнет полностью. В этот момент жидкий средний
слой подают в отдельный сосуд, в котором поддерживают комнатную температуру. Вследствие изменения температуры этот жидкий слой принимает кристаллический вид, и через несколько дней в нижней части сосуда начинает образовываться прозрачная жидкость, которая постепенно поднимается до стабилизации в конце концов в двух слоях - нижнем жидком и верхнем твердом, которые разделяют фильтрацией. Из них жидкий слой - фармакологически эффективен. Эта жидкость имеет желтую окраску изменяющейся интенсивности, она густая, маслянистая и имеет характерные запах и вкус.
Продукт испытывался на животных, чтобы определить его токсичность и фармакологическое действие на физиологические постоянные животных, причем также на жи вотных, у которых экспериментальным Ъутем была развита опухоль. Применяли раковые опухоли; саркому S 37 и асцитическую саркому Эрлиха.
Исследуют действие на живой организм полученного предлагаемым способом соединения в жидкой и твердой формах (на асцитическую карциному Эрлиха) . Опухоль получают в лаборатории постепенным введением в гомозиготные мыши Swiss. Для эксперимента применяют гомозиготных не достипиих половой зрелости мышей-самок SWiss типа , их возраст 4-6 месяцев, вес около 30 г.
При всех экспериментах опухолевые клетки получают внутрибрюшинной пункцией на восьмой день после зарахсения мышей; их промывают и суспендируют в изотоническом растворе хлористого натрия и имплантируют известным образом в здоровых животных. Следят точно за тем, чтобы экологические условия и питание были одинаковы во всех экспериментах. Все мыши получают метку, позволяющую их идентифицировать и записывать их вес в начале и во время всего эксперимента. Кроме того, каждый день определяют среднее арифметическое каждой группы подопытных животных и контрольной группы. На восьмой и двенадцатый дни после заражения посредством пункции живота собирают асцитическую жидкость для подсчета клеток. Всех мертвых животных как контрольной группы, так и группы подопытных животных вскрывают и подвергают микроскопическому исследованию.
При данных опытах следят за двумя критериями; во-первых, контролируют рост опухолей, а именно с помощью кривой веса, а во-вторых, контролируют переживших животных, которым был введен описываемый продукт.
Во время двух опытов убивают несколько животных для микроскопического и макроскопи ческого исследования.
Лечение начинают в различные моменты времени относительно имплантации опухолей, которые колеблются от трех дней до имплантации до трех дней после нее. В одной группе подопытны54 животных применяемые дозы активного соединения определяют в зависимости от развития опухолей, а в другой группе опухолям дают расти в течение трех-четырех дней и лечение начинают после того, как вес увеличился на 2 г или более. Число введенных опухолевых клеток равно 1x10 , 2x10 и 8х10б.
У групп подопытных животных, которым внутрибрюшинно введены 1x10 и 2x10 клеток асцитическоИ карциномы Эрлиха, наблюдают большую разницу в росте опухолей в сравнении с контрольной группой. У контрольных групп измеренный в начале живой вес повышается на 40-SO%, в то время, как израстание веса у подвергаемых лечению групп подопытных животных не составляет даже 20% от измеренного в начале живого веса, и в большинстве опытов вес позже опять уменыг1ается до достижения начального значения. После гибели последнего контрольного животного число оставшихся в живых животных составляет 40-70% от числа подвергаемых лечению; их держат еще месяцами в лаборатории. Некоторые из этих животных проявляют склонность к образованию твердой париетальной опухоли, и в отдельном случае - асцитической опухоли, которая вызывает гибель животного только через три месяца после начала опыта.
У групп опытных животных, которым введены 8x10 раковых клеток в течение первых пяти дней наблюдается нарастание веса (около 2-3 г), затем они сохраняют этот вес или теряют его опять медленно до конца опыта. Здесь остается в живых меньшее число животных, чем у групп, которым было введено меньшее число клеток (20-40%). В двух экспериментах, в которых вводят 8x10 клеток, лечение проводят в течение 3 и 4 дней: контролируют нарастание веса и случаи переживания. Вес подопытных животных гораздо ниже веса контрольных животных, но подвергнутые -лечению животные остаются только еще три дня в живых.
Не наблюдается никаких различий, если лечение начинается за три дня до имплантации опухоли. Если прерывают лечение в день имплантации, то опухоль развивается так же, как и у контрольных групп, а если продолжают его, 1то получают те же самые результаты, 4
что и при описанных выше экспериментах.
Одной группе вводят сначала небольшие дозы активного соединения, которые повышгиот потом до 100 мг. При этой дозе можно установить внезапное падение кривой, которое продолжается до восстановления первоначального веса; однако в данном случае остается в живых меньшее число животных.
Применяемые дозы активного соединения колеблются от 2 до 100 мг в день (эта терапевтическая широта возможна благодаря нетоксичности препарата) . Получаемые результаты показывают, что имеется тесная связь между применяемой дозой и опухолью. У животных, которым вводят дозы ниже 10 мг/30 г, достигают хороших результатов, если количество введенных клеток меньше 2x10 . При более высоких концентрациях опухолевых клеток необходимо., применять соответственно повышенные дозы. Если лечение начинают через 5-6 дней после заражения, то
небольшими дозами не достигают никаких результатов и следует вводить большие количества, чем 50 мг в день.
Лечение твердых опухолей начинают через 10 дней после их имплантации, когда опухоль больше 0,5x0,5 см. После лечения в течение трех дней на поверхности опухолей появляется черное пятно, которое распространяется нормальным образом в течение следующих 10-12 дней, потом тормозится в росте и отделяетсяот окружающей среды;
Испытуемый препарат пракаически нетоксичен и безвреден. Переносимость
препарата удовлетворительная.
Формула изобретения
1.Способ получения производных глюкозы путем смешения мочевины и
глюкозы, отличающийся тем, что, с целью придания веществу противоопухолевой активности, мочевину смешивают с пятиводным сульфатом магния в молярном соотношении
1:0,06-1:0,5 при 10-55 0 и гомогенизируют, добавляют глюкозу в молярном соотношении мочевина: глюкоза, равном 1:1, воду или физиологический раствор
в количестве 300-400 мл, встряхивают, после выстаивания добавляют йодид калия в молярном соотношении мочевина: йодид Кс1Лия, равном 1:0,25-1:1, встряхивают до полного растворения, подкисляют пересыщенным спиртовым
раствором бензойной кислоты в молярном соотношении 1:0,25-1:1 до рН 2-4, отфильтровывеиот осадок.
2.Способ ПОП.1, отличаю.щ и и с я тем, что, после подкисле1ния бензойнойкислотой смесь нагревают отделяют маточный раствор и после кристаллизации отделяют жидкую фракцию. . Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:е 1. Сб. Препараты и крЬвезаменитали Ленинградского научно-исследовательского института гематологии и переливания крови . Л., изд. Мелицина, 1970, с.50.
