Способ получения фибринолитического комплекса Советский патент 1978 года по МПК A61K31/727 A61K31/616 

Комппекс ГАсп. сохраняет -iti vttpocBora фибринолигическую актив.ность при хранении в эксикаторе (с CaG ) при комнатной температуре, в течение 5-6 месяцев, т.е. является высокостабипьным в,отличие от известных. Препарат комплекса гАсп. не обладает побочным действием и нетоксичен (животные выдерживают дозу 2,5 г/кг) по сравнению с известными комплексами.

Получаемый комплекс ГАпс. имеет иную структуру, чем составляющие его компоненты, что обнаружено авторами с помощью метода спектрофотометрии в ультрафиолетовой области спектра и метода пересекающегося электрофореза. В частности, с помощью последнего метода не было выявлено окраски на кислые группы гепарина в месте пересечения гепарина и аспирина, что указывает на участие кислых групп гепарина в комплексообразовании с аспирином.

получения комплекса ГАсп. берут 1%-ный раствор, гепарина (1ОО мг в 1О мл дистиллированной воды) и 1%-ный раствор аспирина (10 мг в 1 мл дистиллированной воды). Затем смешивают эти растворы. При этом достигается соотношение гепарина и аспирина, равное 1О:1, при котором происходит образование наиболее активного комплекса. Осаждение комплекса осуществляют дри рН среды от 2 до 4 добавлением четыФкбринолитическая активность комплекса ГАсп. и его отдельных

компонентов

рехкратного количества (44 мл) охлажденного перегнанного ацетона. Через 15-20 мин

после добавления ацетона при О С выпадает осадок, представляющий собой комплекс ГАсп. Осадок отделяют центрифутированием (1800 об/мин в течение 1О мин), затем высущивают при 18-25 С в струе воздуха. Выход комплекса 10О-105 мг. Получают белый негигроскопический порошок, который сохраняет свою активность при хранении в эксикаторе при комнатной температуре в течение 5-6 месяцев,

В табл. 1 приведена фибринолитическая активность комплекса ГАсп.определяемая IПо зонам лизиса iirvilro. Соотношение ,д ре акционной среде гепарина и аспирина 10:1 или 8:1 является оптимальным условием для возникновения хорошо растворимого и устой чивого при нагревании комплекса ГАсп. с его специфической фибринолитотеской активностью.

Известный комплекс гепарин-трипсин (соотношение гепарина и трипсина 1:6), не обнаруживает фибринолитических свойств за 1,5 ч и проявляет незначительное фибринолитическое действие лишь спустя 16-18 ч инкубации проб при 37 С. Комплекс ГАсп., полученный по предложенному способу, проявляет фибринолитйческое действие уже спуртя 1,5 ч инкубациич

Таблица 1

О МО±ttlО О О 64,О М24 ±т3,1 О 1,2 Р Через 1,5 ч после инкубации проб при 37 С 56,0 81,0 81,0 72,0 25,0 24,О 2О,0О 2,0 1,9 О 0,7 О 0,5 0,7О ,001-.0,,001 -iO,OOl 0,ОО1 ,О1 0,,5 Через 16-18 ч после инкубации при 37°С 72,0 121,0 124,О 120,О 25,О 24,О ,О 1,9 1,9 2,2 0,7 41О. О,001

Как видно из габп. 1, гепарин и аспирин по отдельности практически не обладают фибринолитическим действием.

Комплекс ГАсп. обладает значительной, антикоагулянтной активностью, превышающей

Антикоагулянтная активность комплекса ГАсп. и его отдельных

компонентов 40 сек.4О сек4-4,5 мин

активность эквивалентного количества гепа рина. Аспирин не оказывает заметного влияния на антикоагулянтные свойства крови животного (см. табл. 2).

Таблица2 5 мин и более 4,5 мин нет сгустка

О О Н

СО

03 Ю CMQл

ё о

S

ffi и

а

1

N

со ю

CD

о о

V

а л с ш

см о л Из цанных, приведенных в табп. 3, видно, что многократное введение животным per OS комплекса ГАсп. (соотношение 10: :1) вызывает имитацию активации противосвертываюшей системы (ПСС), вследствие чего увеличивается суммарная фибринопит-ическая активность (СФА) плазмы крови, ее неферментативный фибринолиз (НФ), удлиняются ч и к тромбоболастограммы (ТЭГ) повышается антикоагупянтная активность плазмы крови животных (АТ-ак). Подобное предлагаемому комплексу ГАсп, введение в организм составных частей комплекса-гепари на или аспирина - в дозах, эквивалентных их содержанию в комплексе, приводит к незначительному антисвертыьающему эффекту только в течение первого часа после послед него их введения, Действие же комплекса ГАсп, более продолжительное, чем действие его составных частей, Комплекс ГАсп. (соотношение 1О:1) способен растворять свежие экспериментально образованные тромбы. Лизис тромбов в со- судах животных происходит через 1-1,5ч после введения комплекса ГАсп, в 1ОО% слу чаев. Через 5-7 мин после внутривенного введе ния комплекса ГАсп, здоровым животным значительно усиливаются фибринолитические и антикоагулянтные свойства крови, причем при внутривершом введении комплекса наблюдается наибольшее усилие фибринолитических свойств крови, чем при внутримышечном вве дении комплекса pet of. Препарат комплекса ГАсп. не обладает побочным действием и нетоксичен по сравне нию с известными комплексами. Комплекс ГАсп, (1О:1) вводился внутривенно половозрелым крысам в количестве 1 мл в виде 10-, 2О- и 50%-HbJx растворов. При .вскрытии животных через 2 дня после первой инъекции и через 2 дня после второй нт екции в легких, печени, почках, сердце и cteлезенке не обнаружили каких-либо изкданений или отличий от контроля. Формула изо р е т е н и я Способ получения фибринолитического комплекса , включающий смешипвгше гепарина с веществом, придающим ему фибринолитические свойства и усиливающее его антикоагулянтное действие, с послед аошим осаждением полученного комплекса в кислой среде и высушиванием его, отличающийс я тем, что, с цепью повышения стабильности комплекса и снижения его токсичности, гепарин смешивают с acnvspuHOM в соотношении (8-15) :1, осаждение полученного комплекса проводят ацетоном, а высушивание его ведут при температуре 18-25 С, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. Патент США№ 3577534,кл.424-183, 1970. 2,MansfeEd V.u H{ oidovec J,uluci eit uber Reactionea des KtM&laEBibierlea Tr-yp&ina.lI.Beaf.iehung zwiecVten der Akiiv tdi des Hepoi-ins urrd Trj/piiiMb-CoSEection oi czecho&SovcxK chemtcoiE commuhicottion , 1957,т21,№5 , с 1209.