Способ получения щелочной или аммониевой соли инсулина Советский патент 1978 года по МПК A61K38/28 

1

Изобретение относится к фарманевтиуеской промышленности, а именно к по 1учению лекарственных нрепаратов для лечения сахарного диабета.

Известен способ получения нрепаратов инсулина путем смешивания щелочной или аммониевой соли инсулина с цинком, протамином в соотношении на каждые 100 ед инсулина 0,2-1,5 мт протамина при рН раствора 6,5-8,0 . Однако известный способ не обеспечивает высокого качества целевого продукта.

Целью изобретения является повышение качества целегзого продукта.

Эта цель достигается тем, что соль двухвалентного металла инсулина растворяют я водно-кислой среде, добавляют соединение щелочного металла или аммония в хелатообразующем агенте, например в этиленднаMHH-N.N,N,N-TeTpayKcycHoPi кислоте в -количестве 0,0002--0,05 М при рН 7,6-8,6.

Двухвалентный металл включает элементы VII В, Vni 1В, и ИВ групп перипдической системы элементов, например марганец, же.мезо. кобальт, Н11кель, медь, цинк и кадмий, предпочтительно двухвалентным металлом яг5ляется Ц11НК.

Шелочпой металл включает элементы группы IA до 5-го периода включительно. Предпочтительны литий, натрий, калий.

Водный шелочной раствор инсулина содержит двухвалентный металл, хелатообразующнй агент и ионы щелочного металла и аммония, рН раствора может меняться от 7,6 до 8,6, предпочтительно рН 8,2. Концептрация инсулина с двухвалентным .метал.лом МО/кет меняться от 10 до 100 ед/мл. Предпочтительная концентрация такого инсулина составляет приблизительно 500 ед/мл. Хелатообразующи.м агентом может быть, напри.мер, этилeндиa.мин-N,N,N,N-тeтpayкcycнaя кислота, 1,2-диаминонронан-Ы,Ы, ,М-четырехуксусная кислота, 1,3-диамнно-2-оксипропан-М,1Ч,Ы,К-четырехуксусная кислота, диэтилентриа.минчетырехуксусная кислота, диэтилентриаминопятиуксусная кислота, гексаметилeндиaмин-N,N,N,N-чeтыpexyкcycнaя кислота, .-бутилэтилендиамин-1 ,М ,N ,-трехуксусная кислота, N-(2-oкcиэтил)этилeндиaмии- N,N-тpиyкeycнaя кислота, этилендиаMHH-N,N,N,N -тетрапронионовая кислота и другие. хелатообразующими агентами являются полйметилендиаминчетырехуксусные кислоты, самым предпсзчтительным хелатообразующим агентом является этилендиамин-Ы.Ы.Ы.М-четырехуксусная кислота. Хелатообразующий агент используют в виде свободной кислоты, либо в виде ее соли со щелочным металлом или аммонием. Если берут соль, катион соли должен быть тем же, что и катион требующегося щелочного металла или аммония в инсулине. Следует учитывать количество добавляемого катиона в результате применения такой соли при определении количества требуемых ионов щелочного металла или аммония. Для того чтобы удалить двухвалентный металл из инсулина и осуществить быструю кристаллизацию, инсулина на базе щелочного металла или соединения аммония, молярное соотношение между хелатообразующим агентом и двухвалентным металлом в инсулине должно быть 3:1. При более низких соотношениях скорость кристаллизации инсулина на щелочном металле или на соединении аммония из щелочного раствора понижается. При более низких соотношениях растет вероятность того, что двухвалентный металл остается связанным с инсулином. Концентрация хелатообразующего агента должна составлять приблизительно 0,0002 М и может доходить до 0,05 М, При концентрации инсулина на базе двухвалентного металла приблизительно 500 ед/мл предпочтитель ная концентрация хелатообразующего агента 0,01 М. иДелочной водный раствор инсулина на двухвалентном металле может также содержать ионы щелочного металла или аммония. Концентрация ионов щелочного металла или аммония может меняться от 0,2 до 1,0 М. Ионь щелочного металла или аммония могут поступать из любого (или любых) водорастворимого соединения, которое не оказывает вредного действия на инсулин. Часть требующихся ионов щелочного металла или аммония может быть получена при использовании хелатообраз тощего агента в форме соли щелочного металла или аммония или при использовании основного щелочного металла или соединения для регулировки рН раствора. Ионы могут быть получены из хлорида, бромида, фторида, йодида, ацетата, сульфата, фосфата. Лучщими являются хлоридные и фосфатные соли, предпочтительны хлориды. Щелочные водные растворы инсулина на двухвалентвом металле можно приготовить различными способами; Предпочтительный способ заключается в растворении инсулина на двухвалентном металле в кислой водной среде и подгонке получающегося раствора до щелочного рН при помощи подходящего основания. Хелатообразующий агент или дополнительные ионы щелочного металла или аммония можно добавлять в любое время в виде твердых частиц или в виде водных растворов. Кислый водный раствор инсулина на двухвалентном металле имеет рН 2,5-3,5. Кислотность раствора обеспечивают любой неорганической кислотой, предпочтительна хлористоводородная кислота. При необходимости в кислые водные растворы инсулина на двухвалентном металле обйплйют консерванты, например фенол, метилпарабен, а также изотонические агенты, например глицерин, глюкозу. Количество консерванта составляет 0,4% по весу на объем, предпочтительной концент)ацией является 0,2%. Затем .кислый водный раствор инсулина с двухвалентным металлом делают щелочным при помощи основания, в основном используют гидроокись щелочного металла или аммония, карбонат аммония и другие аналогичные щелочные соединения. Другой способ получения щелочного водного раствора инсулина с двухвалентным металлом заключается в растворении инсулина с двухвалентным металлом в водной щелочной среде с рН, равным приблизительно 8- 9,5, рН конечного раствора 7,6-8,6. Щелочность исходного водного раствора обеспечивают за счет гидроокиси щелочного металла или аммония. Восстановление щелочности достигают добавлением разбавленной неорганической кислоты, соляной или фосфорной. Концентрированные растворы в инсулине на двухвалентном металле являются более трудными для приготовления, чем разбавленные растворы из-за пониженной растворимости инсулинов на двухвалентном металле в щелочном растворе. Хелатообразующий агент и ионы щелочного металла или аммония можно вводить в любое время, обычно их вводят перед стадией окончательной доводки рН. После приготовления водного раствора инсулина с двухвалентным металлом, инсулина на щелочном металле или аммоний инсулин начинает кристаллизоваться из раствора, обычно при температуре окружающей среды, но при необходимости можно использовать более высокие или низкие температуры. Предпочтительна температура кристаллизации ниже 30°С. Затем полученные кристаллы инсулина на щелочном металле или соединении аммония отделяют известными способами. Обычно кристаллы отделяют центрифугированием и промывают последовательно разбавленным, раствором соли щелочного металла или аммония (обычно около 0,5 М), ацетоном, абсолютным спиртом и простым эфиром. чЗатем кристаллы сущат под вакуумом. . Пример I. Цинк-инсулин в количестве 8 г, состояа(ий приблизительно на 70% из инсулинз, получаемого от быков и коров, и на 30% из инсулина от свиней, растворяют в 400 мл воды с фенолом и кислотой, которую