Способ получения 2-0-метил-д-рамнозы Советский патент 1978 года по МПК C12D13/04 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения моносахарида-1 2-0-метил-Д-рамнозы. Известные способы получения моносахаридов основаны на использовании культур, например/ StVeptoni ces Slreptom ces aEbus.BacciEus ToruEopsis, Acelobaclep mboxidau&ClJ и C2 Однако известные способы можность получения д-рибозы и Ь-сорбозы - широко распространенных в природе моносахаридов. Известен сТюсоб получения 2-0-ме тил-Д-рамнозы путем культивирования ее продуцента на питательной среде в условиях аэрации, содержащей источ ники углерода, азота и необходимые минеральные соли. В качестве продуцента 2-О-метил-Д-рамнозы используют культуру микроорганизмов M Kobacteriuw 402 3 . Однако указанная культура хранится в коллекциях Великобритании и является труднодоступной для использования в нашей стране. Цёлью изобретения является упрощение процесса. Поставленная цель достигается тем что в качестве продуцента используют культуру BoicctSue faecaDis aEoaPigerjes штамм 6. Указанный штамм выделен в 1960 году из желчи и хранится в музее живых культур Московского Государственного Контрольного института медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича. Морфология и культурально-биохимические свойства. Палочка короткая, иногда изогнутая подвижная грамотоицательная, размером О,5-1-2М. На бульоне растет в виде равномерной мути с образованием пленки, пристеночного кольца и осадка. Аэроб. Оптимальная t роста -30-37°. Хорошо растет на синтетических средах при использовании в качестве источника азота аминокислот, способна расти на аммонийных солях в качестве источника азота, если источником углерода при этом служит ацетат либо другие трехуглеродные соединения. Штамм хорошо разлагает дериваты белка типа пептона с образованием аммиака. Белки не расщепляет Не разлагает большинство Сахаров, но потребляет их окислительным путем. Сущность способа заключается в следующем :

Дня получения 2-0- етил-Д-рамнозы культура Boccieus iaecaBia aEca&igenes штамм 6 выращивается на мясо-пептонном агаре либо бульоне в течение 1-2 суток при 37. Из отмытой физиологическим раствором бактериальной массы, высушенной ацетоном и эфиром, известным способом экстрагируют специфический полисахарид. Полученный полисахарид гидролизуют 1М серной кислотой (0,5% раствор полисахарида в кислоте) при 100°, 1,5-2 ч. Гидролизат нейтрализуют ионно-обменной смолой либо сухим углекислым барием. Из полученной смеси Сахаров 2-0-метил-Д-рамнозу выделяют разделением последней на колонке с порошком целлюлозы в системах растворителей этанол-вода (95:5) либо я - бутанол-вода (95:5). Кроме того, этот сахар можно получить из смеси методом препаративной хроматографии на бумаге с использованием растворителя п -бутанол-пиридин-вода (6:4:3) .

Получаемый указанньш способом препарат 2-0-метил-Д-рамнозы не содержит примеси .других Сахаров разделении в следую1ад;к системах растворителей: rt -бутанол-пириднн-вода (6:4:3), П-бутанол-вода-(95:5), ацетон-вода (95:5), этанол-шода (95:5), а его пик совпадает при совме цении хроматограмм с пиком этого сахара в гидролиз ате полисахарида при разделении последнего методом газожидкостной хроматографии в виде ацвтиллированных альдононитрилов и полиолов исследуемых Сахаров. Выход сахара составляет 5% от сухого веса Препарата специфического полисахарида.

Пример. Культуру Босс «г us iaeca2ts a ca igenes штамм б выращивают на мясо-пептонном агаре при 37 в течениесуток, смывают и промывают физиологическим раствором, а затем ацетоном и эфиром. Специфический полисахарид получают гидролизом бактериальной массы горячим формаьшдом по Фуллеру. Выход препарата - 5% от сухого веса бактериальной массы. 100500 мг полисахарида гидролизуют 1Ы серной кислотой (0,5% раствор) 1,5 ч при ЮО. Гидролизат нейтрализуют Dowex 1x16 (HCOg), сгущают при 3540° и в объеме 3-5 мл наносят на колонку размером 3,7x50 см, набитую сухим порошком целлюлозы. Разделение проводят в растворителе этанол-вода (95:5). Разделение контролируют окрашиванием отдельных фракций антроновым реактивом и хроматографией на

бумаге.

При указанных условиях достигается воспроизводимое отделение 2-0-метил-Д-рамнозы, а полученный препарат был хроматографически чистым при разделении в различных системах растворителей: п -бутанол-пиридин-вода (6:4: :3),п -бутанол-уксусная кислота-вода(4:1:5),п -бутанол, насьвденный водой с 1% аммиака и др.при проявлении хроматограмм различныьш проявляющими реагентами: анилинфталат, щелочной раствор азотнокислого серебра, йодная кислота-бензидин и др. Препарат также не содержит возможной примеси

аминокислот и был серологически активным при торможении гомологичной реакции преципитации.

Формула изобретения

Способ получения 2-0-метил-Д-рамнозы путеК культивирования ее продуцента на питательной среде в условиях аэрации, содержащей источники углерода, азота и необходимые минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса в качестве продуцента используют культуруBacciEua faecaEis aScaEigenes 4 штамм 6.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.Патент США 3919046,кл.195-30

2.Авторское свидетельство СССР 45№ 461116 кл, С 12 D 13/00, 1973.

З.Со1пас15ап JourdaE о Chemistrv, 1967, 45,1.987.