Реагент для обнаружения белка в моче Советский патент 1978 года по МПК G01N33/16 

1

Изобретение относится к диагностическим средствам и может быть использовано в диагностике почечных заболеваний.

Известен реагент для обнаружения белка в моче, состоящий из носителя, индикатора и буфера 1.

Однако известный реагент вступает в реакцию как с белком, так и с побочными продуктами.

Целью изобретения является повышение специфичности реакции путем устранения взаимодействия реагента с побочными продуктами.

Эта цель достигается тем, что реагент в качестве индикатора содержит октагалогенсульфофталеин дополнительно содержит полипропиленгликоль, а также смачиватель при следующем соотношении ингредиентов в г на 100 мл раствора:

Октагалогенсульфофталеин0,02-0,2

Г1олипропиленгликоль0,5-5

Буфер10 30

Смачиватель0,1 -1,0

В качестве, способного всасывать носителя применяют фильтровальную бумагу, но также может быть применен волокнистый прочес, асбест и подобные материалы. Полипропиленгликоли, которые используют для реагента, должны иметь молекулярный вес примерно от 500 до 10000, могут быть использованы линейные пояипропнленгликоли, блокполимерные продукты, полученные из окиси пропилена и окиси этилена, а также разветвленные соединения, в которых окись пропилена заполимеризована с такими многоато.мнымн спирталш, как, например, триметилолпропан, глицерин и.1и пентаэритрит, и которые в некоторых случаях модифицированы дополнительно окисью этилена. В качестве индикатора используют октагалогенсульфофталеины, например октабромфенолсульфофталеин (тетрабромфеноловый синий), октахлорфенолсульфофталеин (тетрахлорфеноловый синий), а также смешанные галогенированные соединения, например 3,,5 -тетрабромфенол-3,4,5,6-тетрахлорсульфофталеин, 3,,5 -тетрахлорфенол-3,4,5,6-тетрабромсульфофталеин и 3,3 -дихлор-5,5 -дибромфенол-3,4,5,6-тетра.хлорсульфофта.чсин. Особенно предпочтительными яш яются индикаторы, которые содержат в положениях ,3Д.5.5%етыре атома хлора. Реагент для обнаружения белка требует применения сильного буфера, который даже при погружении в содержащуюся в теле жидкость, имеющую другое значение рН, сохраняет постоянное значение рН. При применении сульфофталеиновых индикаторов буфер устанавливают на значение рН, которое лежит несколько ниже области рН перехода индикатора и тогда индикатор мало окрашивается. По отношению к очень малым концентрациям белка лучшая чувствительность достигается тогда, когда значение рН буфера лежнт в области перехода индикатора, рН должно быть от 2,5 до 4,5. При более низких значениях рН в большинстве случаев происходит ослабление белковой реакции при большем усилении реакции с азотистыми основаниями и обычной мочей. Предпочтительное значение рН .зависит от индикатора, а также от типа пропиленгликоля и прочих реагентов, при которых значение рН и количество буфера изменяют таким образом, чтобы индикатор после погружения в свободную от присутствия белка мочу имел еще чистую окраску. В качестве буфера могут быть использованы смеси, состоящие нз лимонной, яблочПропиленглнколь0,5- 5, Буфер10-30 Индикатор0,02-0,2 Поверхностно-активное вспомогательное средство0,0-1,0 В качестве растворителя для ингредиентов применяют смеси, состоящие из воды и низшего спирта, в которых они растворимы. Но можно также сначала осуществлять предварительную пропитку буфером из воды и после этого производить последующую пропитку остальными составными частями нз органического раствора. Готовый реагент может применяться известным способом, может быть приклеен к ручке или запечатан мемсду синтетическим полимером и сеткой с мелкими отверстиями. Пример I. Фильтровальную бумагу (Шляйхер и Шюль 2316) последовательно пропитывают следующими двумя растворам и и в каждом случае производят сушку при 60°С. Раствор 1. Д}имонная кислота, моногидрат, г20 Аммиак, 25%-ный водный раствор, млОколо 10 Вода дистиллированная, м-лДо 100 Раствор имеет значение рН 4,1 ной, винной кислот и других, а также нз их щелочных или аммонийных солей. Для лучшего диспергирования добавляют поверхностно-активные вещества. Для этого могут быть применены неноногенные агенты смачивания, а именно этоксилнрованные спирты жирного ряда и фенолы с 1-4 оксизтнленовыми группами. Агенты смачивания анионного типа уснливают реакцию с азотистыми основаниями, в то время как поверхностно-активные вещества катионного типа вызывают сильно искаженную положительную реакцию индикатора в том случае, когда применяют не очень кислый буфер, который тормозит белковую реакцию. По этой причине эти поверхностно-активные вещества не пригодны. Дополнительно можно также вводить агенты набухания или загустители, которые могут затруднять сход реагентов с носителя, такими агентами может быть гндрооксиэтилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза. Могут быть также добавлены в реагент комплексосбразователи, например сульфат магния. Пропиленгликоли, а также остальные составные части применяют в следующих количествах, в расчете на 100 мл пронитывающего раствора, г: предпочтительно1- 2 -м-15-20 0.05-0,1 0,2 -0,5 Раствор 2. 3 ,3,5 ,5 -тетрахлорфенол-3,4,5,6-тетрабромсульфофталеин (рН 3,9), мг50 Полнпропиленгликоль со средним молекулярным весом 1200 (Полигликоль П 1200 (R), г2 Метиловый спирт, мл до 100 Реагент реагирует с нормальной мочой, принимая желтый цвет, а с содержащей альбумин мочой рринимает окраску от зеленой до сине-зеленой с сильной интенсивностью. Моча с содержанием хинина примерно 100 мг°/о дает такую же зеленую окраску, что и моча с содержанием 5 мг%. альбумина. Реактивная бумага такого же состава, но без пропиленгликоля реагирует с нормальной мочой, принимая зеленую окраску. Зеленая окраска от 5 мг% альбумина с надежностью не может быть отличена от этой отрицательной окраски. Поэтому сравнивают с реакцией 25 мг альбумина: уже примерно 25 мг% хинина имитируют это количес о белка. В случае обычного быстрого теста 25 хинина уже имитируют присутствие 5 мг% альбумина. Пример 2. Фильтровальную бумагу (Шляйхер и Шюль 2316) последовательно пропитывают следующими двумя растворами и производят сушку при 60°С. Раствор 1. Лимонная кислота, моногидрат, г20 Аммиак, 25/о-ный водный раствор, млОколо 6 Вода дистиллированная, млДо 100 рН раствора устанавливают на значение 3,1. Раствор 2 З,3,5,5,3,4,5,6-Октабромфенолсульфофталеин {тетрабромфеноловыйсиний, рН 3,6), мг50 Полипропиленгликоль, средний молелулярныи вес 2000, г 1 Нонилфенол, этерифицированный 1-2оксиэтиленовыми остатками, г0.4 Метиловый спирт, млДо 100 Оба указанных раствора применяют также с половинным количеством растворителя и перед пропиткой производят их объединение. Реагент реагирует с нормальной мочой, принимая желтую окраску, и с содержащей альбумин мочой реагирует, принимая зеленую окраску высокой интенсивности. Моча с содержанием хинина примерно 50 дает такую же зеленую окраску, как и моча с 5 мг% альбумина. Реагент такого же состава, но без пропиленгликоля реагирует с нормальной мочой, принимая слабую зеленую окраску. Примерно 10 мг °/о хинина в случае этой реактивной бумаги имитирует 5 мг% альбумина. Если вместо нонилфенола, этерифицированного 1-2 оксиэтиленовыми остатками, применяют 0,4 г кокосового спирта, этерифицн|)ованного 2 оксиэтиленовыми остатками, или 0,2 г трибутилфенола, этерифицированного 4 оксиэтнленовыми остатками, то получают практически идентичный реагент. Пример 3. Фильтровальную бумагу (Шляйхер и Шюль 2316) сначала пропитывают 15°/о-ным водным раствором натрийдигидроцитрата (рИ 3,5) и сушат при 60°С. Последующую пропитку производят раствором следующего состава, после чего каждый раз производят сушку при 60°С: А.3,3,5,5,3,4,5,6-Окта X лорфенолсульфофта леин, мг50 Полипропиленгликоль, г1 Метиловый спирт,, мл До 100 Свойства полученного реагента соответвуют свойствам реагента, полученного в имере 1. Б.З,3 -Дибром-5, 5-дихлорфенил-3,4,5,6-тетрахлорсульфофталеин, мг50 Десмофен 7200 (R).r1 Метиловый спирт, млДо 100 Свойства полученного реагента соответвуют свойствам бумаги, полученной в прире 2. С.3,3,5,5 -Тетрабромфенол -3,4,5,6-тетраулорсульфофталеин, мг 50 Десмофен 7200 (R).r1 Метиловый спирт, млДо 100 Свойства пат ученного реагента соответвуют свойствам бумаги, полученной в прире 2. Пример 4. Фильтровальную бумагу ляйхер и Шюль 2316) пропитывают приденными ниже двумя растворами и проводят сушку при 60°С. Раствор 1. Яблочная кислота, г15 6 н.раствор гидроокиси натрия, мл Около 16 Гидроксиэтилцеллюлоза (Натрозоль 250G(R),r 2 Вода дистиллированая, мл До 100 рН раствора устанавливают на значении 3,5. Раствор 2. Тетрабромфеноловый синий, г0,6 Полигликоль Р 1200 (R),r3 ХлороформДо 100 Свойства полученного реагента соответвуют свойствам бумаги, полученной в прире 2. Предлагаемый реагент обладает высой чувствительностью по отноп1ению к бел, не вступая во взаимодействие с побоч-. ми продуктами. . Формула изобретения Реагент для обнаружения белка в мо, состоящий из носителя, индикатора и фера, отличающийся тем, что, с целью пошения специфичности реакции путем устнения взаимодействия реагента с побочми продуктами, в качестве индикатора

7 . , 633501 - .8

содержит октагалогенсульфофталеин, до-Буфер 10 - 30

полнительно содержит полипропиленгликольСмачиватель 0,1 - 1,0

а также смачиватель, при следующем со-Источники информации, принятые во вниотношении ингредиентов в г на 100 мл раст-мание при экспертизе;

вора:-5 - 1. Руководство по клиническим лабораОктагалогенсульфо-торным исследованиям. Составлено

фталсин 0,02-0,2 В. Е. Предтеченским. «Медицина, 1964,

Полипропиленгликоль 0,5-5с. 351.