Способ определения перекиси водорода Советский патент 1979 года по МПК C01B15/02 G01N21/06 

3 дит к появлению нежелательных окрашиваний и потере чувсТвительности при длительном хранении. Кроме того катион радикала зелено-голубого цвета, образующийся при вступлении в реакцию с индикатором, не очень стабилен, так как при дальнейшее окис;лении относительно легко переходит в хинодиимин коричневого цвета. Поэтому окраска анализируемых проб вследствие образования коричневого оттенка имеет нечистый тон, который быстро меняется и поэтому уже через непродолжительное время его нельзя правильно оценить. Хотя катион ради кала может быть стабилизирован в значйтёльном объеме анионными смачи вателями, последние не всегда приме нимы, так как они могут разрушать оксидазы уже на первой стадии реакции , Целью изобретения является получение экспресс-проб, которые имели бы устойчивые радикалы красящих веществ. Поставленная цель достигается оп сьшаемым способом определе(шя перекиси водорода, включающемобр аэование окрашенного соединения с примен нием в качестве индикаторов окисления 3,3. ,5,5 -тетраалкилбензидинов общей формулы i - где R,R2,R3,R4 одинаковые или ра ные радикалы, представляющие собой простые или разветвленные, цепи низших алкильных групп с 1-6, предпочтительно с l-4j атомш ш углерода. Отличие способа состоит в применении 3,З,5,5-тетраалкилбензидино общей . в качестве индикато ров окисления в экспресс-пробах для обнаружения и определения перекиси водорода, соединений, которые взаимодействуют с образованием перекиси водорода и соединений, ведугдих себя как перекиси. Способы получения соединений .фор мулы : известны. Не описанные в литературе соединения , 3,з -диметил-5,5 -диэтилбензидин и 3,3 ,5,5-тетраизопропилбен зидин могут быть получены из о-толи дина и этилена или бензидина и пропилена. По изобретению тетраалкилбензиди ны могут быть применены для обнаружения глюкозы и крови в моче, холестерина в сыворотке, перекиси водорода в молоке или в пленках для про для определения глюкозы в крови и сыворотке и во многих других пробах Все эти пробы отличаются тем, что цветные-реакции ярче, стабильнее и лучше оттенены, чем при применении -то.пидина, так как окраска катионов радикала тетраалкилбензидинов от зелено-голубой до зеленой не загрязняется примесью коричневых хинондииминов. В экспресс-пробах, описанных в примерах, четко проявляются свойства тетраалкилбензидинов, причем у отдельных представителей этих соединений наблюдается по сравнению с О-толидином повышенная стойкость, например, при хранении индикаторной умаги для обнаружения крови в моче. Благодаря повышенной стабильности катионов радикалов в пробных пленках при определении глюкозы анализ возможен в достаточно большой промежуток времени. Пример 1. Пробная бумага для обнаружения крови в моче. Фильтровальную бумагу (Шляйхер и 1г1юль № 23SL) последовательно пропитывают в растворах 1 и 2 и высушивают при 4 О С. Раствор 1. 1,2 М буферный раствор цитрата (рЙ 5,25) 35,0 мл Этилендиаминовая уксусная кислота, динатриевая соль0,1 г Диоктилнатрийсульфосукцинат 0,5 г 2,5-Диметилгексан-2,5-дигидроокись (70%-ная) 1,6 г Триморфолид фосфорной кислоты 12,7 г Этанол30,0 мл Дистиллированная вода До 100 мл Раствор 2. 3,3,5,5-тетраметилбензидин 0,3 г Фенантридин0,2 г ТолуолДо 100 мл Для пробы применяют белую бумагу, которая окрашивается в зелено-голубой цвет при погружении в мочу, содержащую кровь, спустя с. Если эритроциты в норме, то бумага окрашивается в зелено-голубой цвет. Если происходит гемолиз или в моче находится гемоглобин, то бумага тотчас же окрашивается также в зелено-голугбой цвет. Чувствительность 5 эритроцитов/2цм или соответствующего количества гемоглобина. Количество эритроцитов ниже нормы также может вызвать при известных условиях появление отдельных зелено-голубых точек на пробной бумаге. Чувствительность по миоглобину соответствует чувствительности по гемоглобину. После трехдневной выдержки при 60 С пробные бумажки окрашиваются в жел- товатнй цвет, их чувствительность в основном остается прежней, а бремя реакции увеличивается на 60-90 с. Пробная 6yi.iara, пропитанная о-тоЛидином, после такой же выдержки, как при пропитке тетраметилбензидином. 5 желто-коричневый цве окрашивается в 20 эритроцитов ее чувствительность Бумаги такой же чувствительности и стабильности, которые взаимодейст вуют медленнее и дают чисто-зеленый цвет, получают при применении эквимолярных количеств 3 ,3 , 5, З-тетраэтил-З , 3- метил 5, 5-диэтил- или 3,3,5,5-тетраизопропиленбензидино Пример 2. Бумага для проб для обнаружения глюкозы в моче. Фильтровальную бумагу (Шляйхер и Люль 597NF) пропитывают в раствора 1 и 2 и сушат при . Раствор 1. Глюкозаоксидаза (70 об/мг)222 мг Пероксидаза (70 об/мг) 28 мг Морфолиноэтансульфанат-буффер (рН 6,1,ОМ) 50 мл Татразин80 мг Поливинилпирролидин 300 мг .Дист иллированная вода, до ЮО мл 5 Раствор 2. 3, З ,5,5-тетраметилбензидин600 мг ЭтанолДо 100 мл Бумажки для проб, которые содержат эквимолярные количества 3,3, 5,5-тетраэтилбензидина или о-толидина, получают по методике примера 1. Цвета реакций этих бумажек в моче, содержащей глюкозу, через 60-120 с после погружения приведены в таблице. При применении тетраметилбензидина эти цвета не изменяются 10-15 мин, при сушке они приобретают более голубоватый оттенок и остаются такими в течение всего дня. Цвет пробной бумаги, пропитанной тетраэтилбензидином, при cjmiKe слегка бледнеет, и остается таким не сколько дней. Пробная бумага, nportV танная 0-толидином, через 5-10 мин желтеет и бледхнеет, а после сушки в течение 2-4 ч после концентрации глюкозы совершенно бледнеет или окрашивается в слабый коричнево-оливковый цвет.

ЖелтыйЖелтый Желтый

О

Светло-зеленыйСветло-зеленыйСветло-зеленый

50

Зеленый . .Зелено-голубойСредне-зеленый 100

Зелено-голубойГолубовато-Зеленый 250

Голубовато-Черно-голубойТемно-зеленый

500 зеленый

Черно-оливковый Черный 000

Бумажки для проб, которые содержат эквимолярные количества3,3-диметил-5,5 диэтилбензидина по устойчивости цвета практически не отличаются от бумажек, пропитанных тетраэтилбензидином.

Пример 3. Бумажки для проб для обнаружения перекиси водорода.

Фильтровальную бумагу пропитывают в растворах 1 и 2 и высушивают при .

Раствор 1.

Тринатрийцитрат,

дигидрат

Лимонная кислота,

моногидрат

Пероксидаза (70 об/мг)

Альгинат натрия

Полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат (твин) зеленый

Густой зеленый

Винилпирролидин-винилацетат-Мишполимеризат . 375 мг Дистиллированная вода До 100 мл Раствор 2.

3,3 ,5,5-тетраметилбензидин 500 мг

АцетонДо 100 мл

Так, приготовленная бумага для проб с перекисью водорода дает в водных растворах, например молоке, зелено-голубые цветовые реакции при концентрациях менее 0,1 мг %.

Пример 4. Бумага для проб 60 для обнаружения холестерина и сложных эфиров холестерина в сыворотке. Фильтровальную бумагу (Шляйхер и 597NF, Инд) пропитывают растворами в определенной послсдовательнос65 ти и высушивают при температуре 40 Г.